【摘要】：姑息性瘤內(nèi)注射治療是針對(duì)全身一般狀況差、腫瘤復(fù)發(fā)等無法手術(shù)治療、或無法耐受全身化療患者的一種治療方法,目的是控制或縮小腫瘤體積,緩解由于腫瘤占位造成的呼吸困難、吞咽困難等并發(fā)癥,減輕患者痛苦,提高生存質(zhì)量,延長患者生存時(shí)間。姑息性瘤內(nèi)注射治療可用于治療頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、肺癌、食管癌、消化道腫瘤等。但是,目前臨床上沒有適合瘤內(nèi)注射給藥的化療藥物劑型,普通注射液腫瘤局部停留時(shí)間短,腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物攝取差,目前研究較多的溫敏、pH敏感凝膠有注射壓力大等問題。小分子化藥與基因藥物聯(lián)用在癌癥治療中的協(xié)同作用是目前研究的熱點(diǎn),化藥與基因藥物雙載的納米系統(tǒng)可以改善藥物耐藥通道、提高細(xì)胞藥物攝取量以增加化療療效,基因藥物siRNA可以通過沉默腫瘤細(xì)胞特定基因,抑制腫瘤細(xì)胞增殖,起到協(xié)同抗腫瘤作用。雙載納米制劑一方面可以增加小分子化藥溶解度,降低其毒副作用,另一方面保護(hù)siRNA不被血漿中的核酸酶降解,增加其細(xì)胞攝取量�；谝陨夏康�,本課題設(shè)計(jì)制備一種磷脂殼聚納米粒(LCS_NPs)同時(shí)負(fù)載紫杉醇膽固醇復(fù)合物(PTX-CH)及siRNA~(VEGF),一方面利用PTX-CH的抗腫瘤作用,另一方面siRNA~(VEGF)抑制腫瘤細(xì)胞VEGF蛋白的表達(dá),減少鱗狀細(xì)胞癌腫瘤組織中新生血管的生成,協(xié)同發(fā)揮抑制腫瘤的目的,用于頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的姑息性瘤內(nèi)注射治療。首先,為了進(jìn)一步增加PTX的親脂性,以增加LCS_NPs的載藥量,用溶劑蒸發(fā)法將PTX與膽固醇(CHO)制備成紫杉醇膽固醇復(fù)合物(PTX-CH),DSC、FTIR、X-射線粉末衍射檢測(cè)確定其制備成功。其次,用乙醇滴入法制備紫杉醇膽固醇復(fù)合物磷脂殼聚糖納米粒(PTX-CH-loaded LCS_NPs),在最佳處方及制備工藝條件下,納米粒粒徑為142.83±0.25nm,Zeta電位為13.5±0.2mV,包封率為92.83±0.29%。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)證明納米粒3天內(nèi)穩(wěn)定性良好,滿足體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)要求。藥物體外釋放研究表明,在偏酸性環(huán)境下藥物可以更快的從納米粒中釋放出來,而腫瘤組織微環(huán)境呈酸性,納米粒在腫瘤組織可以加速釋放,有一定的靶向性。用4T1細(xì)胞對(duì)PTX-CH-loaded LCS_NPs進(jìn)行體外抗腫瘤評(píng)價(jià),激光共聚焦及流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取速度及攝取量明顯高于游離藥物。細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取機(jī)制為高爾基體參與下有能量依賴性的穴樣內(nèi)陷內(nèi)吞及巨胞飲。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明,PTX-CH-loaded LCS_NPs可以誘導(dǎo)更多的腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。荷瘤小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,PTX-CH-loaded LCS_NPs瘤內(nèi)注射治療較PTX溶液能夠更有效的抑制腫瘤生長并延長小鼠生存周期,可一定程度上抑制腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移�；趯�(duì)PTX-CH-loaded LCS_NPs的研究基礎(chǔ),本研究選擇靶向VEGF的siRNA——siRNA~(VEGF)為基因藥物,渦旋法制備siRNA~(VEGF)/PTX-CH-loaded LCS_NPs,納米粒的平均粒徑為149.63±2.05nm,平均Zeta電位為10.70±0.30mV。凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PTX-CH-loaded LCS_NPs可以較好的固縮住siRNA~(VEGF),并保護(hù)siRNA~VEGFEGF 12h不被血漿中的核酸酶降解。用人鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞CAL-27對(duì)siRNA~(VEGF)/PTX-CH-loaded LCS_NPs進(jìn)行體外抗腫瘤評(píng)價(jià),激光共聚焦及流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LCS_NPs作為載體可以將siRNA有效的遞送至細(xì)胞內(nèi)部,Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,LCS_NPs為載體的復(fù)合納米粒能夠有效的沉默CAL-27細(xì)胞中VEGF基因的表達(dá),降低細(xì)胞中VEGF蛋白的表達(dá)量。siRNA~(VEGF)/PTX-CH-loaded LCS_NPs能夠更有效的抑制CAL-27細(xì)胞生長,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。為了考察siRNA~(VEGF)/PTX-CH-loaded LCS_NPs瘤內(nèi)注射給藥體內(nèi)抗腫瘤效果,本實(shí)驗(yàn)建立了Cal-27鱗狀細(xì)胞癌荷瘤裸鼠模型,復(fù)合納米粒瘤內(nèi)注射后對(duì)腫瘤組織的抑制作用更強(qiáng)。腫瘤組織rtPCR及Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明siRNA~(VEGF)/Blank LCS_NPs組及siRNA~(VEGF)/PTX-CH-loaded LCS_NPs組中siRNA~(VEGF)mRNA相對(duì)表達(dá)量及siRNA~(VEGF)蛋白的表達(dá)較對(duì)照組明顯降低。腫瘤組織切片TUNEL染色后可以觀察到siRNA~(VEGF)/PTX-CH-loaded LCS_NPs組腫瘤中有更多的腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。表明復(fù)合納米粒瘤內(nèi)注射給藥后抗腫瘤效果更強(qiáng),明顯優(yōu)于普通的PTX注射液。本研究結(jié)果表明LCS_NPs可以作為PTX及siRNA雙載的載體,siRNA~(VEGF)/PTX-CH-loaded LCS_NPs用于頭頸部鱗狀細(xì)胞癌腫瘤姑息性瘤內(nèi)注射治療時(shí),可以更有效的抑制腫瘤細(xì)胞生長,降低腫瘤細(xì)胞VEGF蛋白的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：軍事科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R943

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本文編號(hào)：2716502