【摘要】：質(zhì)譜(Mass spectrometry,MS)是化合物定性定量分析的常用儀器,具有專屬性強(qiáng)、靈敏度高、分析速度快、無(wú)需標(biāo)記等特點(diǎn),但其密閉的離子化環(huán)境、復(fù)雜的前處理過(guò)程等因素使其應(yīng)用受到限制。近年來(lái)常壓敞開式離子化技術(shù)(Ambient ionization,AI)發(fā)展迅速,這種技術(shù)在敞開式環(huán)境中直接對(duì)樣品中的待測(cè)分子離子化,操作簡(jiǎn)單、無(wú)需樣品前處理,極大地推動(dòng)了質(zhì)譜在實(shí)時(shí)、表面、原位、高通量分析等方面中的應(yīng)用。溶出度試驗(yàn)是評(píng)價(jià)口服固體制劑工藝一致、體內(nèi)外相關(guān)性的一個(gè)重要參數(shù)。特別是對(duì)于生物等效性(Bioequivalence,BE)豁免的仿制制劑,體外溶出度的測(cè)定顯得尤為重要,但對(duì)于一些紫外吸收低、劑量小的制劑而言,建立快速準(zhǔn)確的溶出度測(cè)定方法十分困難。本論文中我們搭建了紙噴霧離子化(Paper spray ionization,PSI)裝置,首次建立了PSI-MS溶出度檢測(cè)方法,可有效的解決不揮發(fā)性鹽與質(zhì)譜不兼容的弊端,不受樣品有無(wú)紫外吸收的影響且前處理簡(jiǎn)單,適合于低含量制劑的測(cè)定。我們以馬來(lái)酸依那普利、鹽酸喹那普利、鹽酸貝那普利為待分析物,以相應(yīng)的氘代試劑為內(nèi)標(biāo),測(cè)定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;用新建的PSI-MS法測(cè)定了馬來(lái)酸依那普利片的溶出度,測(cè)定結(jié)果與液相色譜法一致,說(shuō)明PSI-MS可用于藥物溶出度的測(cè)定,測(cè)定時(shí)間僅需幾十秒。不是所有的待測(cè)藥物都能找到相應(yīng)的氘代試劑,加之氘代試劑價(jià)格昂貴,為開發(fā)其普適性,本論文進(jìn)一步研究了使用非氘代內(nèi)標(biāo)測(cè)定藥物溶出度的可行性。我們選擇與待測(cè)樣品化學(xué)結(jié)構(gòu)、性質(zhì)相似的非氘代化合物非那雄胺雜質(zhì)Ⅰ替代氘代試劑為內(nèi)標(biāo),成功的測(cè)定了非那雄胺片的溶出度,測(cè)定結(jié)果與HPLC結(jié)果一致,證明了非氘代內(nèi)標(biāo)的適用性,拓展了PSI-MS在溶出度測(cè)定方面的應(yīng)用。Aβ蛋白是阿爾茲海默癥(Alzheimer’s disease,AD)患者腦中老年斑的重要組成部分,被認(rèn)為是治療AD的潛在靶點(diǎn),有研究表明人參皂苷可用于延緩AD,推測(cè)其作用機(jī)理可能是通過(guò)人參皂苷與Aβ蛋白非共價(jià)相互作用實(shí)現(xiàn)的,由于非共價(jià)相互作用較弱,目前尚無(wú)有效技術(shù)手段測(cè)定非共價(jià)鍵的結(jié)合,也無(wú)法闡明人參皂苷作用機(jī)理。冷噴霧離子化技術(shù)(Cold spray ionization,CSI)是在低溫條件下實(shí)現(xiàn)離子化,離子化方式更軟,有助于保存溶液中弱的非共價(jià)相互作用,有望為非共價(jià)藥物-蛋白質(zhì)復(fù)合物研究提供有力手段。本論文基于CSI-MS技術(shù)建立了檢測(cè)非共價(jià)相互作用新方法,首次研究了人參皂苷與Aβ蛋白間非共價(jià)相互作用,通過(guò)直接及競(jìng)爭(zhēng)性實(shí)驗(yàn)對(duì)人參皂苷與Aβ蛋白結(jié)合化學(xué)計(jì)量比、配體的結(jié)合基團(tuán)以及各人參皂苷的相對(duì)結(jié)合力進(jìn)行了測(cè)定,從分子水平上闡明了人參皂苷可通過(guò)與Aβ蛋白結(jié)合干擾Aβ蛋白的聚集,為非共價(jià)相互作用的研究以及阿爾茲海默癥治療藥物的研制提供了很好的檢測(cè)手段。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)食品藥品檢定研究院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R927.1;O657.63
【圖文】：

S40K 型酸度計(jì)（瑞士），電子天平（METTLER-TOLEDO），超純水儀（默克密理博公司，Millipore, Bedford, MA），色譜紙（Grade 1，Whatman），鋁片，高壓直流電源。1.2.2 紙噴霧質(zhì)譜裝置系統(tǒng)圖 1-1 為紙噴霧離子源裝置示意圖及實(shí)物圖，其結(jié)構(gòu)主要包括用于噴霧的三角形色譜紙、用于支撐色譜紙且能夠?qū)щ姷娜切武X片以及用于產(chǎn)生電噴霧的高壓直流電源。三角形色譜紙尖端角度為 30°，底：5 mm，高：10 mm，電壓：4kv，紙噴霧尖端距質(zhì)譜口的距離約 6 mm。實(shí)驗(yàn)操作主要分為四步，如圖 1-2 所示：一、將 5 μl 待測(cè)樣品溶液滴加到三角形紙片上；二、在空氣中自然晾干 10 min；三、紙片后端施加 4 kv 的高壓電，同時(shí)滴加 10 μl 的噴霧溶劑；四、樣品分子溶于噴霧溶劑中并在電壓的作用下在色譜紙尖端形成電噴霧，進(jìn)入質(zhì)譜檢測(cè)。

三角形色譜紙尖端角度為 30°，底：5 mm，高：10 mm，電壓：4kv，紙噴霧尖端距質(zhì)譜口的距離約 6 mm。實(shí)驗(yàn)操作主要分為四步，如圖 1-2 所示：一、將 5 μl 待測(cè)樣品溶液滴加到三角形紙片上；二、在空氣中自然晾干 10 min；三、紙片后端施加 4 kv 的高壓電，同時(shí)滴加 10 μl 的噴霧溶劑；四、樣品分子溶于噴霧溶劑中并在電壓的作用下在色譜紙尖端形成電噴霧，進(jìn)入質(zhì)譜檢測(cè)。圖 1-1. 紙噴霧離子源裝置示意圖和實(shí)物圖

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張梅君;王志強(qiáng);黃學(xué)蓀;;固體制劑溶出度的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥業(yè);2009年08期

2 王曉輝;;藥物溶出度的測(cè)定方法及其進(jìn)展[J];天津藥學(xué);2006年02期

本文編號(hào)：2715707