【摘要】：目的:隨著淋巴瘤和乳腺癌患者年輕化以及生存率的提高,化療藥物所致醫(yī)源性損害逐漸得到重視。卵巢是生殖系統(tǒng)中對化療最為敏感的部位,大劑量、長時間的化療可破壞卵巢組織,導(dǎo)致卵巢功能早衰。表柔比星作為蒽環(huán)類抗生素的代表藥物,是女性乳腺癌一線化療用藥。臨床發(fā)現(xiàn),應(yīng)用表柔比星為主的化療方案6個療程的乳腺癌患者,出現(xiàn)以閉經(jīng)為主的卵巢早衰(premature ovarian failure,POF癥狀的概率為45-83%,而且大概約60%的患者一年后卵巢功能不能完全恢復(fù)~([1-3])。課題組前期研究證實表柔比星能引起小鼠卵巢功能明顯減退,動情周期消失。因此研究探討表柔比星對人卵巢顆粒細(xì)胞的損傷機制,為化療引起的卵巢早衰治療提供治療思路。方法:1、采用Ficoll密度離心法分離、培養(yǎng)人卵巢GCs;2、應(yīng)用細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色方法檢測人卵巢GCs表面特異性受體卵泡激素受體(Follicle-stimulation hormone receptors,FSHR)的表達(dá)鑒定GCs;3、將人卵巢GCs與含三個不同濃度表柔比星的完全培養(yǎng)基(G組:0 mg/l、GP1:組0.0125 mg/l、GP2組:0.025mg/l)共同孵育24h后PI單染流式細(xì)胞術(shù)PI單染檢測各藥物濃度組人卵巢GCs細(xì)胞周期G1、G2期比值的變化;4、收集與含三個不同濃度表柔比星的完全培養(yǎng)基(G組:0 mg/l、GP1:組0.0125 mg/l、GP2組:0.025 mg/l)共同孵育24h后的人卵巢GCs采用western blot,測量三個濃度下人卵巢GCs Gadd45β、Cdc2、cyclinB1蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果:1、人卵巢GCs細(xì)胞的鑒定:應(yīng)用細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色方法鑒定培養(yǎng)分離的細(xì)胞,染色部位位于細(xì)胞膜,程棕色,染色細(xì)胞數(shù)80%,為強陽性,鑒定培養(yǎng)細(xì)胞為GCs;2、流式細(xì)胞術(shù)檢測人卵巢GCs細(xì)胞周期的變化:從G組到GP2組,位于G1期構(gòu)成比降低,從(66±1.15)%到(59.5±1.83)%,再到(51.07±1.05)%,G2期的構(gòu)成比增加,從(4.75±0.45)%到(5.94±0.69)%,再到(8.93±0.81)%,P0.05,三種不同的濃度產(chǎn)生的結(jié)果不完全相同,SNK分析提示各組之間存在顯著差異,各組細(xì)胞G2期的占比隨著藥物濃度的升高的變化具有統(tǒng)計學(xué)意義,提示,表柔比星等導(dǎo)致GCs G2/M期阻滯,并且,隨著藥物濃度的增加阻滯越來越明顯;3、應(yīng)用western blot檢測人卵巢GCs的周期蛋白以及相關(guān)蛋白:目標(biāo)蛋白CyclinB1、Cdc2、GADD45β的表達(dá)從G組到GP2組的表達(dá)逐漸增加,灰度值從G組到GP2組的分別為:171716.133±1243.12、170834±637.592、164211.67±182.719(Cyclin B1),P0.05,SNK分析提示GP1與G組之間的差異不具有統(tǒng)計學(xué)差異,GP2與GP1、G組之間分別存在顯著差異,蛋白表達(dá)的變化具有統(tǒng)計學(xué)意義;152500±1255.930、150293±791.595、139746.33±741.756(Cdc2),P0.05,SNK分析提示各組之間存在顯著差異,蛋白表達(dá)的變化具有統(tǒng)計學(xué)意義;195393.33±220.185、189663.33±1343.251、182365±290.184(GADD45β),P0.05,SNK分析提示各組之間存在顯著差異,蛋白變化的變化具有統(tǒng)計學(xué)意義結(jié)論:1、提取的細(xì)胞的為人卵巢GCs;2、表柔比星作用的人卵巢GCs停留在了G2期;3、表柔比星可能使人卵巢GCs的GADD45β增高從而導(dǎo)致周期蛋白Cyclin B1、Cdc2增高引起了GCs細(xì)胞周期G2/M期阻滯。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R965
【圖文】：

人卵巢GCs細(xì)胞周期G1、G2期構(gòu)成比

化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實驗方法，其基本電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情驗結(jié)果圖如下圖 5，統(tǒng)計學(xué)分析如下表 2 圖 6，目標(biāo)DD45β的表達(dá)從 G 組到 GP2 組的表達(dá)逐漸增加，灰為：171716.133±1243.12、170834±637.592、n B1），P<0.05，SNK 分析提示 GP1 與 G 組之間的2 與 GP1、G 組之間分別存在顯著差異，蛋白表達(dá)500±1255.930、150293±791.595、139746.33±SNK 分析提示各組之間存在顯著差異，蛋白表達(dá)的3.33±220.185、189663.33±1343.251、182365±.05，SNK 分析提示各組之間存在顯著差異，蛋白變GP2 GP1 G

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2714480