【摘要】：紫杉醇(PTX)作為廣譜抗腫瘤藥物應用廣泛,但它在治療過程中存在生物利用度低且會對正常組織產生毒性等缺陷。為了提高紫杉醇的生物相容性和降低對正常細胞的毒性,將紫杉醇負載于納米顆粒進行治療的研究已成為熱點。天然產物植物甾醇不僅具有抗腫瘤、抗氧化和降血脂等多種生理活性和良好的生物相容性,而且具有剛性疏水骨架,可以通過自組裝形成納米結構,然后裝載抗腫瘤藥物形成納米載藥體系,因此其可以作為載體運送藥物達到更好的抗腫瘤效果。本研究以豆甾醇為結構母核,通過共價鍵接枝3,3’-二硫代二丙酸,引入二硫鍵,繼而構建具有多重刺激響應性的納米載體,研究其對紫杉醇裝載釋放特性,并對納米載藥體系對HT-29結腸癌細胞的抑制作用進行了研究。主要內容如下:利用豆甾醇的羥基與3,3’-二硫代二丙酸的羧基通過酯縮合共價連接合成豆甾醇衍生物(SD),利用薄層層析確定目標產物的生成,采用柱層析對SD進行分離純化,通過核磁氫譜和碳譜對SD進行結構鑒定,結果表明SD被成功合成。采用超聲乳化法制備豆甾醇衍生物納米顆粒(SDNs),通過掃描電鏡觀察其形貌,優(yōu)化乳化劑比例、有機溶劑種類和制樣方式,確定了SDNs的最佳制備條件為以四氯化碳為溶劑且四氯化碳:2.5%PVA=1:4(v/v)。掃描電鏡觀察到SDNs呈球形,粒徑分析儀測得SDNs平均粒徑為270±3.2 nm,Zeta電位為-22.1±0.3 mV。進行紫杉醇納米載藥體系的構建,制備了載藥納米顆粒SDNs@PTX,確定紫杉醇的最適投藥量為15%,載藥納米顆粒呈球形,SDNs@PTX的平均粒徑為315.9±2.6 nm,Zeta電位為-24.8±2.4 mV。通過高效液相測得納米顆粒對紫杉醇的包封率和載藥量分別為35%和4.56%。體外藥物釋放實驗表明SDNs@PTX對pH、谷胱甘肽和木瓜蛋白酶具有多刺激響應性,在pH 5.6條件下,釋放量高于pH 6.7和pH 7.4組,隨著谷胱甘肽和木瓜蛋白酶量的增多,負載藥物的釋放量逐漸增大。體外實驗研究SDNs@PTX對HT-29人結腸癌細胞的抑制作用。細胞吞噬實驗結果表明,隨著時間增長,細胞吞噬的負載異硫氰酸熒光素的納米顆粒越多,呈現良好的時間依賴性;MTT實驗結果表明,相比于游離紫杉醇和單獨載體SDNs,SDNs@PTX對HT-29的抑制效果最好,其IC_(50)值為0.159μg/mL(以PTX當量計),顯著優(yōu)于游離藥物PTX組(IC_(50)=4.337μg/mL);細胞形態(tài)學觀察結果發(fā)現加藥48h后,大量HT-29細胞死亡從六孔板壁脫落,表明SDNs@PTX具有良好的抗腫瘤效果。
【學位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R96;TQ460.1
【圖文】：

技術路線

圖 3-4 SD 的核磁氫譜圖Fig.3-41H-NMR of SD in CDCl33.3.2 SD 核磁碳譜表征如圖 3-5 所示為 SD 的核磁碳譜，其結果分析如下：13C NMR (126 MHz, CDCl3) 177.09 (C-35), 171.23 (C-30), 139.67 (C-5),138.44 (C-22), 129.46 (C-23), 122.91 (C-6), 74.71 (C-3), 56.94 (C-17), 56.11 (C-14),51.38 (C-24), 50.21 (C-9), 49.84 (C-13), 42.37 (C-4), 40.62 (C-20), 39.78 (C-12), 38.24(C-1), 37.12 (C-10), 34.62 (C-33), 34.01 (C-34), 33.57 (C-8), 33.00 (C-25), 32.03 (C-2),29.04 (C-16), 27.92 (C-7), 25.58 (C-31,C-28), 24.87 (C-32), 24.51 (C-15), 21.70 20.80 (C-11,C-21,C-26), 19.46 (C-19), 19.14 (C-27), 12.38 (C-29), 12.20 (C-18).核磁碳譜選用的氘代試劑為氘代氯仿，其殘余溶劑峰為 77.16 ppm 處的三重峰以四甲基硅烷（TMS）作內標確定各峰的化學位移值。根據文獻[67]，化學位移值在 177.34 ppm 和 171.48 ppm 處的碳原子分別為未反應端的羧基碳和反應生成的酯基碳，表明目標產物 SD 合成成功。

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 袁久榮,張子忠,衛(wèi)云,孟凡杰;自動多步展開儀分離測定北沙參中豆甾醇的含量[J];山東中醫(yī)藥大學學報;2001年06期

2 馮文歡;吳正章;張鵬;常明;金青哲;王興國;;超聲輔助分步結晶法制備高純度豆甾醇的工藝研究[J];中國油脂;2019年10期

3 佘家Y

本文編號：2713793