【摘要】：目的針對(duì)阿德福韋酯存在劑量依賴性腎毒性、生物利用度低等缺點(diǎn),依據(jù)前藥設(shè)計(jì)理念,結(jié)合腸肝循環(huán)特性,采用生物電子等排、結(jié)構(gòu)駢合原理,以阿德福韋為先導(dǎo)化合物,設(shè)計(jì)合成阿德福韋單L-硫代氨基酸酯,單膽酸酯衍生物,擬提高藥物在肝細(xì)胞中的富集濃度和生物利用度。方法(1)目標(biāo)化合物的合成:將帶有N-Boc-保護(hù)的L-氨基酸于-25℃在N-甲基嗎啉(NMM)和氯甲酸異丁酯(IBCF)存在條件下通入硫化氫氣體,制備N-Boc-L-硫代氨基酸,再將其與1,2-二溴乙烷或1,3-二溴丙烷反應(yīng)得到N-Boc-L-硫代氨基酸-2-溴乙酯或N-Boc-L-硫代氨基酸-3-溴-1-丙酯。以熊去氧膽酸/去氧膽酸為反應(yīng)底物,通過(guò)與3-溴-1-丙醇在DCC/DMAP存在條件下發(fā)生縮合反應(yīng),制備熊去氧膽酸-3-溴-1-丙基酯/去氧膽酸-3-溴-1-丙基酯。將上述制備的產(chǎn)物,在N,N’-二環(huán)己基-4-嗎啉基脒(DCMC)條件下,與阿德福韋通過(guò)“一鍋合成法”縮合,產(chǎn)物經(jīng)柱色譜分離純化得阿德福韋N-Boc-單L-硫代氨基酸酯,單膽酸酯衍生物,經(jīng)85%磷酸/氯仿體系進(jìn)行脫Boc處理,得最終化合物阿德福韋單L-硫代氨基酸酯,單膽酸酯衍生物;(2)利用UPLC-MS/MS方法考察了目標(biāo)化合物在人工胃液、人工腸液、大鼠空白血漿、肝微粒體中的穩(wěn)定性及代謝規(guī)律;(3)采用穩(wěn)定表達(dá)HBV-DNA的HepG 2.2.15細(xì)胞系,評(píng)價(jià)合成的目標(biāo)化合物體外對(duì)HBV-DNA的抑制作用;(4)采用鈉離子-�；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)多肽(Na~+/taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)轉(zhuǎn)染Hek 293細(xì)胞考察抗病毒活性較好的化合物在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的攝取機(jī)制;結(jié)果(1)合成阿德福韋單L-硫代氨基酸酯,單膽酸酯衍生物共計(jì)16個(gè),總產(chǎn)率為12.6-25.2%,所得目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)~1H-NMR、~(13)C-NMR、ESI-MS和ESI-HRMS鑒定確證;(2)對(duì)受試化合物進(jìn)行體外穩(wěn)定性及代謝規(guī)律研究,結(jié)果顯示,受試化合物在人工胃液中穩(wěn)定性良好,在大鼠空白血漿、大鼠肝微粒體中的穩(wěn)定性較阿德福韋酯好,半衰期長(zhǎng)于阿德福韋酯,在人工腸液中穩(wěn)定性較阿德福韋酯差,半衰期短于阿德福韋酯,其中化合物6d在肝微粒體中的裂解規(guī)律經(jīng)初步分析,首先經(jīng)過(guò)肝微粒體水解生成阿德福韋單去氧膽酸丙酯衍生物,再進(jìn)一步水解成為原藥阿德福韋;(3)體外抗HBV活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,8個(gè)受試化合物(6d,6e,6f,6g,6i,6l,6m,6n)均具有抗HBV活性,其中化合物6d,6i,6l,6m,6n的抗病毒活性及作用選擇性指數(shù)(EC_(50) 3.95~29.41μmol·L~(-1),SI 89.50~454.07)與陽(yáng)性對(duì)照阿德福韋酯(EC_(50) 3.09μmol·L~(-1),SI 142.04)相當(dāng),化合物6l的抗病毒活性最強(qiáng)、作用選擇性指數(shù)最高(EC_(50) 3.95μmol·L~(-1),SI 454.07)。(4)通過(guò)NTCP轉(zhuǎn)染Hek-293細(xì)胞考察了其攝取機(jī)制,結(jié)果表明所有受試化合物(ADV,6d,6l,6m,6n)在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HEK 293細(xì)胞與未穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HEK 293細(xì)胞中的攝取量均隨著濃度的增加而增加,在同一濃度下受試化合物(6d,6l,6m,6n)在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染NTCP的HEK293細(xì)胞中的攝取量顯著高于未轉(zhuǎn)染的HEK 293細(xì)胞(P0.05);且攝取率為6l6m6n6d;而陽(yáng)性對(duì)照阿德福韋酯在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HEK 293細(xì)胞與未穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HEK 293細(xì)胞其攝取率隨著濃度的增加未見(jiàn)明顯正相線性關(guān)系增加;在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HEK 293細(xì)胞與未穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HEK 293細(xì)胞中攝取率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上未見(jiàn)明顯差異(P≥0.05);結(jié)論首次合成16個(gè)未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的目標(biāo)化合物,穩(wěn)定性與代謝機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)目標(biāo)化合物在酸性條件下穩(wěn)定性較好,在富含酶的中性、堿性等環(huán)境中穩(wěn)定性較差,其在在肝微粒體酶的作用下先后斷裂得阿德福韋,進(jìn)而發(fā)揮抗病毒活性;抗病毒活性測(cè)試顯示部分化合物具有較高抗HBV活性,其中化合物6l活性最好;攝取機(jī)制研究表明目標(biāo)化合物能夠借助于肝細(xì)胞膜特異性表達(dá)的NTCP實(shí)現(xiàn)其肝靶向性富集的特性。 【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R914;R96

【圖文】：

圖 1-1 已上市或進(jìn)入臨床研究的非環(huán)核苷膦酸類前藥Fig. 1-1 Acyclonucleoside phosphonates listed or in clinical trails些前藥進(jìn)行了不同的結(jié)構(gòu)改造相對(duì)于阿德福韋酯雖然提高了 HBV 細(xì)胞毒性，但是仍存在一些不足，它們之中大都著力于改善阿德福度和脂溶性但是沒(méi)有考慮藥物對(duì)非靶向器官的影響，，沒(méi)有從代謝的

與新合成的結(jié)合膽汁酸再次排入腸道，此circulation, EHC)[33]。正常人每天體內(nèi)腸肝循環(huán)為 1汁酸能夠被肝臟特異性重吸收，由此證明膽汁酸具性靶向性。鈉離子依賴性膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(human apical odium-depSBT)和鈉離子-�；悄懰徂D(zhuǎn)運(yùn)多肽(Na+/taurocholCP)是膽汁酸腸肝循環(huán)中最重要的兩種轉(zhuǎn)運(yùn)體[34,35收進(jìn)入門靜脈血液和血液中的膽酸吸收進(jìn)入肝細(xì)胞效基團(tuán)偶聯(lián)物能夠被這兩種蛋白識(shí)別為底物而提富集濃度[36]。 膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體(hASBT/NTCP)對(duì)，膽酸衍生物可以被特異性識(shí)別與轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵主體 或 C-12 位上至少具有一個(gè)軸向羥基； 2）藥效基是在膽酸的 C-3 位和 C-24 位上[37,38,39]。

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本文編號(hào)：2712342