【摘要】：腎細胞癌(Renal cell canceI.,RCC)是泌尿生殖系腫瘤中死亡率最高的癌癥,其發(fā)病率約占成人惡性腫瘤的3.8%,致死率約占2.5%。RCC對放療不敏感,各類化療方案對轉(zhuǎn)移性腎癌的治療有效率僅為1 0%-15%。有機陽離子轉(zhuǎn)運體OCT2(Organic cation transporter,member 2,SLC22A2)是腎臟中表達最高的攝取型藥物轉(zhuǎn)運體,啟動子區(qū)域異常高甲基化是其在腎癌中沉默的主要原因,導(dǎo)致了腎癌細胞對奧沙利鉑等鉑類化療藥物的耐藥。我們實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),將DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑地西他濱(Decitabine,DAC)與奧沙利鉑聯(lián)用,可逆轉(zhuǎn)腎癌細胞中OCT2的低表達,增敏奧沙利鉑的抗癌作用。但影像學(xué)結(jié)果顯示在臨床治療過程中,該給藥方案雖然可以抑制腫瘤繼續(xù)生長,但腫瘤未見明顯縮小。有研究表明高達50%-60%的實體瘤晚期表現(xiàn)出局部缺氧,RCC作為一種實體瘤,隨著癌細胞的不斷增殖同樣表現(xiàn)出低氧的腫瘤微環(huán)境。基于上述臨床現(xiàn)象,考慮到RCC的低氧特征,本課題在前期研究的基礎(chǔ)上,探究低氧對于DAC去甲基化功能的影響。我們通過在常氧(20%氧濃度)和低氧(1%氧濃度)下對腎癌細胞進行DAC處理后,檢測OCT2 mRNA和蛋白表達水平以及啟動子區(qū)甲基化和組蛋白H3K4me3修飾的變化,發(fā)現(xiàn)低氧下DAC無法誘導(dǎo)OCT2的表達,DAC處理后OCT2啟動子區(qū)依舊處于高甲基化、低H3K4me3修飾的轉(zhuǎn)錄抑制狀態(tài)。接下來,我們通過檢測DNA甲基化動態(tài)修飾過程以及DAC代謝通路中關(guān)鍵因子在低氧下的表達變化,進一步探究低氧介導(dǎo)的RCC細胞DAC抵抗的具體機制。我們發(fā)現(xiàn)低氧主要通過下調(diào)平衡型核苷轉(zhuǎn)運體(Equilibrative nucleoside transporter 1,ENT1)的表達,抑制RCC細胞對DAC的攝取。另外,通過qPCR、western blot和免疫組化技術(shù)對RCC腫瘤組織和配對正常組織中ENT 1表達檢測的結(jié)果表明,ENT1的表達在腎癌組織中也異常下調(diào)。隨后,我們又探究了低氧下ENT1表達下調(diào)的生物學(xué)機制,發(fā)現(xiàn)低氧可以通過低氧誘導(dǎo)因子(HIF-lα)以及蛋白酶體和溶酶體通路在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平參與ENT1的表達調(diào)控。由于低氧可以通過影響表觀遺傳修飾間接參與基因表達調(diào)控。我們同時考察了低氧介導(dǎo)的組蛋白乙酰化修飾水平和miRNA表達變化對于OCT2的表達調(diào)控作用。我們發(fā)現(xiàn),低氧下腎癌細胞中組蛋白去乙�；窰DAC9表達異常上調(diào),導(dǎo)致OCT2啟動子區(qū)域H3K27ac修飾水平下調(diào),從而在轉(zhuǎn)錄水平抑制OCT2表達。另外,腎癌中異常上調(diào)的miR-489-3p可以通過靶向OCT2 3'-UTR抑制其表達,增加腎癌細胞對于奧沙利鉑的化療抵抗。低氧下,miR-489-3p的前體和初始轉(zhuǎn)錄本表達均上調(diào)。綜上所述,本研究闡明了低氧阻礙DAC入胞的機制,從多個角度探究了低氧對OCT2表達調(diào)控的作用,并提出miR-489-3p作為潛在腎癌初期診斷標志物的可行性,對優(yōu)化腎癌現(xiàn)有的臨床治療方案具有重要意義。 【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R96

【圖文】：

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文邐低氧下，ＥＮＴ１介導(dǎo)的腎細胞癌ＤＡＣ抵抗逡逑復(fù)氧氣濃度，是否可以逆轉(zhuǎn)低氧下腎癌細胞對于ＤＡＣ的抵抗呢？我們將腎癌細胞逡逑在低氧下培養(yǎng)１邋ｄ邋（Ｈ１）或２邋ｄ邋（Ｈ２）后，再轉(zhuǎn)移至常氧環(huán)境，進行３邋ｄ邋（Ｎ３）的逡逑ＤＡＣ處理，然后通過ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測０ＣＴ２的表達情況，發(fā)現(xiàn)低氧下ＤＡＣ無法誘導(dǎo)逡逑０ＣＴ２的表達，但如果低氧放置數(shù)天后對其恢復(fù)供氧，ＤＡＣ又可以重新誘導(dǎo)０ＣＴ２逡逑的表達（Ｆｉｇ．３．２７Ａ）。低氧下放置一天后表達下調(diào)的ＥＮＴ１也可以通過恢復(fù)供氧的逡逑方式重新表達，并隨著常氧暴露的時間加長而逐漸恢復(fù)至正常表達水平（Ｆｉｇ．３．２７逡逑Ｂ）。另外，低氧放置的時間越久，恢復(fù)供氧對于其去甲基化作用的逆轉(zhuǎn)效果就越逡逑弱（Ｆｉｇ．３．２７邋Ａ），這提示我們需要進行更長時間的常氧暴露以使細胞重新適應(yīng)常氧逡逑環(huán)境，，恢復(fù)對ＤＡＣ的攝取能力。逡逑Ａ邐７８６－０邐７６９－Ｐ逡逑

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李明紅;高鈺琪;袁志兵;孟民杰;;白藜蘆醇對低氧內(nèi)皮細胞活性的影響及機制研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2016年06期

2 閆琳;王龍梅;楊俠;董曉光;徐海峰;;低氧對小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞-5中根蛋白表達的影響[J];眼科新進展;2014年05期

3 尉曉娜;謝于鵬;夏譽;何金彩;;低氧對小鼠曠場行為的影響[J];溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2012年01期

4 劉海霞;李道季;高磊;王偉偉;陳煒清;;長江口夏季低氧區(qū)形成及加劇的成因分析[J];海洋科學(xué)進展;2012年02期

5 王茹;;低氧運動/訓(xùn)練研究新動向[J];北京體育大學(xué)學(xué)報;2012年08期

6 孫衍偉;曾琴琴;侯仕彩;丁兆軍;周嘉云;安永恒;孟令新;;高-低氧放療與低氧放療對食管癌療效的對比研究[J];中華全科醫(yī)學(xué);2011年10期

7 周q

本文編號：2712130