【摘要】：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)是單胺類中樞神經(jīng)遞質(zhì)的一種,是5-羥色胺(5-HT)生成的無活性的酸性代謝終產(chǎn)物,最終從尿液中排出。5-HIAA是人體內(nèi)重要的神經(jīng)遞質(zhì)代謝產(chǎn)物,增高或降低都會間接反映體內(nèi)某些病理改變。在轉(zhuǎn)移性類癌患者尿液中5-HIAA的水平明顯升高。臨床上將5-HIAA的過度分泌作為類癌瘤的最為特異性的生化指征。檢測24小時尿液中5-HIAA的含量可用于類癌綜合征病情的監(jiān)測及治療療效的評估。類癌歸屬于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(neuroendocrine neoplasms,NENs),NENs是一類起源于干細(xì)胞且具有神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物、能夠產(chǎn)生生物活性胺或多肽激酶的腫瘤。其中,胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasms,GEP-NENs)最為多見。在治療胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的藥物研究中,一些新藥例如:吉非替尼以及沙利度胺等發(fā)揮了一定的效果。本課題對人尿液中5-HIAA和人血漿中吉非替尼的檢測方法進(jìn)行了研究。本論文共分為五章,主要內(nèi)容包括:第一章介紹了課題研究的意義,類癌的發(fā)病特點(diǎn)及診斷,5-HIAA的合成代謝,5-HIAA的常規(guī)分析方法,類癌及分子靶向藥物治療進(jìn)行了綜述。第二章建立人尿液中5-HIAA的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法,并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。該方法使用的色譜柱為Waters HSS T3(100×2.1 mm,1.8μm),質(zhì)譜條件為電噴霧離子源(ESI),選擇負(fù)離子提取方式檢測。采用人工尿液UR-N-CONTROL LEVEL 2 NP配制標(biāo)準(zhǔn)曲線,質(zhì)控樣品采用人工尿液和天然尿液配制而成,以5-羥吲哚乙酸的同位素氘標(biāo)記物為內(nèi)標(biāo),尿液樣品采用乙腈進(jìn)行稀釋處理后采用UPLC-MS/MS檢測。該方法測定的5-羥吲哚乙酸在0.0500至50.0μg/mL范圍內(nèi)線性良好,r~2≥0.9896,最低定量限(LLOQ)為0.0500μg/mL。5-羥吲哚乙酸批內(nèi)、批間準(zhǔn)確度偏差在-10.7%~4.8%之間,精密度(CV)≤8.4%。平均回收率為100.3%~102.3%。該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高,快速。人工尿液和天然尿液在定量分析時無差異,適合于人尿液中5-羥吲哚乙酸的濃度測定。第三章晚期非胰腺來源神經(jīng)內(nèi)分泌瘤患者24小時尿液中5-HIAA濃度的測定。本課題建立的人尿液中5-HIAA濃度的檢測方法已應(yīng)用于新一代抗腫瘤藥物治療晚期非胰腺來源神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者的III期臨床研究樣本的檢測。目前已完成40例患者24小時尿液中5-HIAA基線濃度的檢測,檢出總量在0.12 37.8 mg范圍內(nèi),其中7例患者24小時尿液中5-HIAA的總量高于10 mg,15例患者24小時尿液中5-HIAA的總量低于2 mg。第四章建立人血漿中吉非替尼的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法,并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。該方法使用的色譜柱為Waters BEH C18色譜柱(100×2.1 mm,1.7μm),質(zhì)譜條件為電噴霧離子源(ESI),選擇正離子提取方式檢測,以吉非替尼-d3為內(nèi)標(biāo),血漿樣品采用乙腈進(jìn)行蛋白沉淀處理后采用UPLC-MS/MS檢測。該方法測定的吉非替尼的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為5.00至3000 ng/mL,濃度與峰面積比的關(guān)系可用回歸方程:峰面積比=A×濃度~2+B×濃度+C來表示,r~2≥0.9962,最低定量限(LLOQ)為5.00 ng/mL。吉非替尼批內(nèi)、批間準(zhǔn)確度偏差在-3.8%~4.0%之間,精密度(CV)≤11.2%。平均回收率為98.9%~101.8%。吉非替尼儲備液和血漿穩(wěn)定性結(jié)果良好。該方法的準(zhǔn)確度、精密度良好,已應(yīng)用于臨床人血漿樣本中吉非替尼濃度的檢測。第五章對全文進(jìn)行總結(jié)與展望。
【圖文】：

海交通大學(xué)工程碩士學(xué)位論文 第一章.3 5-HIAA 的合成代謝色氨酸（TRP）在色氨酸羥化酶（TPH）的作用下生成 5-羥基色氨酸（5-HTP-HTP 在芳香族氨基酸脫羧酶（AAAD）的作用下脫去羧基生成 5-HT，5-HT 在氧化酶（MAO）作用下生成 5-HIAA，代謝途徑見圖 1-1。在這個代謝途徑中，TRP 攝入量不足或者代謝途徑中任何一個酶缺失或是異，都將導(dǎo)致 5-HIAA 的合成紊亂和生成障礙。

C2 僅含 5-HIAA ULOQ 濃度（不含內(nèi)標(biāo)）的人工尿液樣品中內(nèi)標(biāo)檢測通道色譜圖 2-2 選擇性評價樣品色譜圖： （A）空白人工尿液樣品，（B）僅含內(nèi)人工尿液樣品，（C）僅含 5-HIAA ULOQ 濃度（不含內(nèi)標(biāo)）的人工尿液品ig.2-2 Chromatograms of selectivity evaluation (A) Blank artificial urine k artificial urine with internal standard (C) Blank artificial urine spiked wit5-HIAA at the ULOQ without internal standard質(zhì)效應(yīng)和基質(zhì)效應(yīng)因子察是否存在對定量分析有影響的基質(zhì)效應(yīng)，實(shí)驗(yàn)使用已進(jìn)行 5-HIAA 本的 6 個個體的空白尿液樣品，加樣配制成各自 5-HIAA 實(shí)測濃度值 2 至樣品，每個個體基質(zhì)樣品 3 個重復(fù)，，以測定其準(zhǔn)確度。6 個個體基質(zhì)的見表 2-2。表 2-2 6 個個體的人空白尿液樣品選擇性結(jié)果（n=3）Table 2-2 Six individual blank human urine assessment (n=3)基質(zhì)編號 1 2 3 4 5 6
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R730.43;R969.1;O657.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 段虹飛;李巧艷;董玲芳;趙寧民;秦玉花;趙紅衛(wèi);張偉;;UPLC-MS/MS法測定人血清中的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)志物5-羥基吲哚乙酸[J];華西藥學(xué)雜志;2015年04期

2 鄭容亮;常建華;;肺支氣管神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的研究現(xiàn)狀[J];中國癌癥雜志;2012年05期

3 徐建明;楊晨;;胃腸胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤國際診斷共識的解讀[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2011年11期

4 楊曉鷗;李景南;錢家鳴;楊紅;陳薔;盧琳;;血漿嗜鉻粒蛋白A對多種神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的診斷價值[J];中華內(nèi)科雜志;2011年02期

5 李影;穆薩;唐愛國;;5-羥吲哚乙酸的研究進(jìn)展[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2010年10期

6 劉素芹;戴高鵬;劉慧宏;陳雪;;5-HIAA在MWNT-Nafion修飾電極上的伏安行為[J];分析試驗(yàn)室;2007年09期

本文編號：2707619