【摘要】：腫瘤一直是危害人類健康的重要疾病之一,早期診斷是發(fā)現(xiàn)與治愈腫瘤的關(guān)鍵。目前,X射線計(jì)算機(jī)斷層掃描(X-ray-computed tomography,CT)是應(yīng)用最多的的檢查腫瘤的方法。造影劑(contrast agents)能有效提高X射線成像對(duì)比度和清晰度,提高CT靈敏度。但目前使用的含碘造影劑對(duì)早期腫瘤診斷的靈敏度不高,因此,研制新型靶向特異性的CT成像造影劑具有重要的意義。Sigma-2受體在多種腫瘤細(xì)胞株中高豐度表達(dá),可作為癌癥治療的潛在靶點(diǎn)�；衔颯V119能夠與sigma-2受體特異性結(jié)合,選擇其作為靶向運(yùn)載體,偶聯(lián)三碘苯母核造影劑,得到新型靶向強(qiáng)化CT造影劑。通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性實(shí)驗(yàn)對(duì)新型造影劑與腫瘤細(xì)胞的親和性進(jìn)行了探究。本論文在對(duì)現(xiàn)有碘造影劑結(jié)構(gòu)進(jìn)行對(duì)比分析后,設(shè)計(jì)了三種新型結(jié)構(gòu)的三碘苯造影劑中間體化合物。同時(shí)設(shè)計(jì)了新的高效率合成靶向載體SV119的路線:利用一鍋法設(shè)計(jì)合成9-苯甲基-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬烷-3-酮,經(jīng)過(guò)還原等一系列反應(yīng),成功得到目標(biāo)產(chǎn)物SV119。再分別與三個(gè)中間體偶聯(lián)得到三種新型靶向造影劑。通過(guò)元素分析、紅外、核磁共振等技術(shù),對(duì)合成的化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征,結(jié)果顯示所合成的化合物SV119、三種造影劑及它們的偶聯(lián)體的化學(xué)結(jié)構(gòu)與設(shè)計(jì)的目標(biāo)結(jié)構(gòu)一致。本課題組早期研究發(fā)現(xiàn),高表達(dá)sigma-1受體蛋白的乳腺癌細(xì)胞同時(shí)也高表達(dá)sigma-2受體蛋白,于是用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)化法將閱讀框中包括有sigma-1受體基因的哺乳動(dòng)物表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA3.1-sigma-1)轉(zhuǎn)染到乳腺癌細(xì)胞MCF-7中,構(gòu)建高表達(dá)sigma-2受體蛋白的工程株細(xì)胞MCF-7-sg1。用PCR法證實(shí)轉(zhuǎn)染的腫瘤細(xì)胞MCF-7-sg1基因組含有外來(lái)sigma-1基因;用western blot法證實(shí)MCF-7-sg1細(xì)胞成功表達(dá)目標(biāo)產(chǎn)物,并通過(guò)對(duì)比分析,篩選出表達(dá)量最高的MCF-7-sg1工程細(xì)胞株,用作下一步研究。為了檢測(cè)所得到的新型靶向造影劑能否與腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合,本論文利用羅丹明B能發(fā)熒光的特性,使用DCC酯化法合成羅丹明B-N-羥基琥珀酰亞胺酯(RB-SE),進(jìn)一步與SV119偶聯(lián)得到熒光探針RB-SV119。測(cè)定其熒光發(fā)射光譜,發(fā)現(xiàn)RB-SV119在激發(fā)光的作用下會(huì)發(fā)射熒光,可以作為熒光探針,用來(lái)研究造影劑與腫瘤細(xì)胞的親和性。用兩種能與sigma受體特異性結(jié)合的配體(AC927和BD1047)作競(jìng)爭(zhēng)性試劑,通過(guò)它們與熒光探針RB-SV119競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合MCF-7-sg1細(xì)胞表面的sigma-2蛋白,觀察細(xì)胞在激發(fā)光下的熒光發(fā)射情況,探究合成的熒光探針RB-SV119能與腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合。為研究合成的新型靶向造影劑與腫瘤細(xì)胞的親和性,進(jìn)行造影劑、熒光探針與MCF-7-sg1細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)。先用合成的新型靶向造影劑孵育MCF-7-sg1細(xì)胞,再用熒光探針RB-SV119室溫孵育造影劑結(jié)合后的MCF-7-sg1細(xì)胞,通過(guò)對(duì)比觀察各組腫瘤細(xì)胞在激發(fā)光下的熒光發(fā)射情況,結(jié)果顯示靶向造影劑Ⅰ對(duì)腫瘤細(xì)胞的結(jié)合力較弱,而靶向造影劑Ⅱ、造影劑Ⅲ對(duì)高表達(dá)sigma-2受體的腫瘤細(xì)胞有較高特異性結(jié)合力,因此,造影劑Ⅱ、造影劑Ⅲ有望成為新一代高靈敏度CT靶向造影劑。
【圖文】：

溶 溶 難溶 溶 溶 難溶 溶 溶 RB-SE 的合成可選擇乙腈為溶劑。獲然后用乙醚/乙腈的混合溶液重結(jié)晶水、甲醇、乙醇、乙腈等，難溶于乙料，合成的不同氨基類化合物在酸，即出現(xiàn)酸式結(jié)構(gòu)與堿式結(jié)構(gòu)的平衡中熒光消失[116]。因此將合成的 RB-熒光的酸式結(jié)構(gòu)產(chǎn)物。劑，原料 RB 與中間產(chǎn)物 RB-SE、，三個(gè)化合物 Rf值不同，由此可。

標(biāo)記 Marker；Sigma-1：質(zhì)粒圖 4.1 Sigma-1 基因擴(kuò)增電泳圖 DNA 擴(kuò)增結(jié)果gh 脂質(zhì)體高效轉(zhuǎn)染試劑，，將閱表達(dá)質(zhì)粒（pcDNA3.1-sigma- sigma-2 受體蛋白的工程株細(xì) DNA，以細(xì)胞基因組 DNA 應(yīng)序列位于質(zhì)粒上，另一個(gè)引物能擴(kuò)增和質(zhì)粒相對(duì)應(yīng)的 sigm不能擴(kuò)增。實(shí)驗(yàn)中挑取多個(gè)克基因組 DNA 濃度不同，稀釋成擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖譜中條帶的亮 Marker 與陽(yáng)性對(duì)照組 1 的條0.7 kb，證明 sigma-1 基因成功
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)計(jì)量大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R914

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本文編號(hào)：2705795