【摘要】：目的:研究砷中毒誘導(dǎo)人正常肝細(xì)胞凋亡過程中H3K4甲基化水平的改變,及其可能調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK信號通路促進(jìn)凋亡的機制。方法:根據(jù)不同濃度染砷24h后的細(xì)胞形態(tài)變化,選擇100μmol/L亞砷酸鈉濃度處理LO2細(xì)胞24h復(fù)制砷中毒肝細(xì)胞損傷模型。把人肝細(xì)胞LO2分為對照組、模型組、SET7/9(SET domain containing 7/9)siRNA組、SET7/9siRNA陰性轉(zhuǎn)染組(Negative siRNA)、LSD1(賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1)過表達(dá)組、LSD1過表達(dá)陰性轉(zhuǎn)染組(Negative shRNA)、LSD1抑制劑組(OG-L002)。采用多功能實時無標(biāo)記細(xì)胞分析儀(real time cellular analysis,RTCA)檢測各組細(xì)胞增殖的影響;用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞周期及凋亡變化;使用Western blot方法觀察對照組、模型組、Negative siRNA轉(zhuǎn)染組、SET7/9 siRNA轉(zhuǎn)染組,GRP78、PERK、p-PERK、p-eIF2α(Ser51)、CHOP、H3K4me、SET7/9表達(dá)水平的變化;使用Western blot方法觀察對照組、模型組、Negative shRNA轉(zhuǎn)染組、LSD1組、OG-L002組GRP78、CHOP、H3K4me、H3K4me2、LSD1表達(dá)水平的變化;結(jié)果:RTCA結(jié)果顯示,模型組較對照組細(xì)胞增殖明顯受抑制,SET7/9 siRNA轉(zhuǎn)染組較Negative siRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖受抑制程度有明顯減輕,LSD1組較Negative shRNA轉(zhuǎn)染組和OG-L002組細(xì)胞增殖受抑制程度有明顯減輕;流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示模型組與對照組相比細(xì)胞凋亡率明顯增加,SET7/9 siRNA轉(zhuǎn)染組與Negative siRNA轉(zhuǎn)染組相比細(xì)胞凋亡率明顯降低,LSD1組與Negative shRNA轉(zhuǎn)染組相比細(xì)胞凋亡率明顯降低,OG-L002組與Negative shRNA轉(zhuǎn)染組相比細(xì)胞凋亡率明顯升高;Western Blotting檢測發(fā)現(xiàn),GRP78、p-PERK、p-eIF2α(Ser51)、CHOP、H3K4me的表達(dá)水平,模型組與對照組相比明顯升高,SET7/9 siRNA轉(zhuǎn)染組與Negative siRNA轉(zhuǎn)染組相比明顯降低;GRP78、CHOP、H3K4me、H3K4me2表達(dá)水平,LSD1組與Negative shRNA轉(zhuǎn)染組相比明顯降低,OG-L002組與LSD1組和Negative shRNA轉(zhuǎn)染組相比明顯升高。結(jié)論:砷染毒可以誘導(dǎo)LO2細(xì)胞發(fā)生凋亡;砷染毒誘導(dǎo)LO2細(xì)胞發(fā)生凋亡過程與激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的PERK信號通路有關(guān);H3K4甲基化水平的變化可調(diào)節(jié)PERK信號通路影響砷致肝細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的未折疊蛋白響應(yīng)和凋亡途徑[16]

各組細(xì)胞的細(xì)胞存活率
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R99

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本文編號：2705351