【摘要】：目的:構(gòu)建透明質(zhì)酸修飾的三七總皂苷靶向脂質(zhì)體(HA-PNS-LIP)及三七總皂苷脂質(zhì)體(PNS-LIP)的納米載藥遞送體系,對(duì)其基本性質(zhì)進(jìn)行表征及穩(wěn)定性檢測(cè)。HA-PNS-LIP靶向兔BMSCs表面CD44受體,通過(guò)檢測(cè)其鈣結(jié)節(jié)形成能力、成骨相關(guān)細(xì)胞因子TGF-β1、ALP及OCN的表達(dá),初步探討靶向BMSCs遞送PNS對(duì)其成骨能力的影響。方法:1.構(gòu)建HA-PNS-LIP及PNS-LIP載藥納米粒子,HPLC法測(cè)定藥物濃度及包封率、載藥量,粒徑分析儀檢測(cè)粒徑、PDI及Zeta電位,透射電子顯微鏡檢測(cè)形態(tài),同時(shí)進(jìn)行穩(wěn)定性檢測(cè);2.體外分離、培養(yǎng)及鑒定兔BMSCs;3.設(shè)立空白對(duì)照組(無(wú)干預(yù)措施的BMSCs)、PNS組(100mg/L PNS培養(yǎng)液的BMSCs)、HA-PNS-LIP組和PNS-LIP組(3個(gè)濃度:5、10、20μg/ml培養(yǎng)液的BMSCs);倒置熒光顯微鏡觀察BMSCs對(duì)各濃度HA-PNS-LIP、PNS-LIP的攝取效率;4.CCK-8法檢測(cè)載藥納米粒子對(duì)BMSCs的細(xì)胞毒性影響;5.第21天茜素紅染色法檢測(cè)各組鈣結(jié)節(jié)形成情況;6.藥物作用后第3、6、12天,用Real-time qPCR檢測(cè)TGF-β1、ALP及OCN的mRNA表達(dá)變化;7.藥物作用后第3、6、12天,用Western blot檢測(cè)TGF-β1、ALP及OCN的蛋白表達(dá)變化。8.載藥納米粒子作用第12天,用免疫熒光檢測(cè)TGF-β1、ALP及OCN的蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.納米載藥顆粒藥物濃度為923μg/ml;包封率:HA-PNS-LIP:86.65±0.45%,PNS-LIP:85.20±0.90%;載藥量:HA-PNS-LIP:7.89±0.04%,PNS-LIP:7.75±0.08%;粒徑:HA-PNS-LIP為72.84±0.14nm,PNS-LIP為69.33±1.39nm;PDI:HA-PNS-LIP為0.221±0.015,PNS-LIP為0.237±0.011;Zeta電位:HA-PNS-LIP為-18.55±0.07mV,PNS-LIP為-14.70±0.14mV;透射電子顯微鏡:兩種載藥納米粒子為類(lèi)圓形雙層囊泡結(jié)構(gòu);穩(wěn)定性:隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng),脂質(zhì)體溶液中藥物含量明顯下降。2.細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果:10、20μg/ml HA-PNS-LIP組細(xì)胞攝取效率≥50%;3.細(xì)胞毒性結(jié)果:10μg/ml HA-PNS-LIP組、PNS-LLP組對(duì)BMSCs細(xì)胞毒性最小。4.茜素紅染色結(jié)果:10μg/ml HA-PNS-LLP組鈣結(jié)節(jié)形成較其他3組明顯增強(qiáng),P0.05。5.Real-time qPCR和Western blot結(jié)果:從mRNA及蛋白層次看:(1)TGF-β1的表達(dá)變化:10μg/ml HA-PNS-LLP組的表達(dá)量在各時(shí)間點(diǎn)都高于其他實(shí)驗(yàn)組,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05;10μg/ml PNS-LLP組介于10μg/ml HA-PNS-LLP組與100mg/L PNS組之間;各實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)量都隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。(2)ALP的表達(dá)變化:各實(shí)驗(yàn)組在6天時(shí)出現(xiàn)顯著高表達(dá)P0.01,12天時(shí)持續(xù)高表達(dá)P0.05;10μg/ml HA-PNS-LLP組的表達(dá)量在各時(shí)間點(diǎn)都高于其他實(shí)驗(yàn)組,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05;10μg/ml PNS-LLP組介于10μg/ml HA-PNS-LLP組與100mg/L PNS組之間。(3)OCN的表達(dá)變化:各實(shí)驗(yàn)組在12天時(shí)出現(xiàn)顯著高表達(dá)P0.01;10μg/ml HA-PNS-LLP組的表達(dá)量在各時(shí)間點(diǎn)都高于其他實(shí)驗(yàn)組,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05;10μg/ml PNS-LLP組介于10μg/ml HA-PNS-LLP組與100mg/L PNS組之間。6.免疫熒光結(jié)果顯示:在12天,10μg/ml HA-PNS-LLP組的TGF-β1、ALP及OCN的蛋白表達(dá)較10μg/ml HA-PNS-LLP組為強(qiáng)陽(yáng)性。結(jié)論:1.構(gòu)建的HA-PNS-LIP、PNS-LIP載藥納米粒子具有良好的表征,2周內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性;2.10μg/ml HA-PNS-LIP靶向兔BMSCs遞送PNS可明顯增強(qiáng)鈣結(jié)節(jié)形成能力,可明顯促TGF-β1、ALP及OCN mRNA及蛋白的表達(dá),促成骨分化。
【圖文】：

NHS）溶解完全，37 °C 下反應(yīng) 24 h。然后邊攪拌邊醇胺（Dioleoyl Phosphoethanolamine，DOPE）（48 下反應(yīng)過(guò)夜，轉(zhuǎn)移至透析袋中（截留分子量 8000 14純化，收集溶液，冷凍干燥即得 HA-DOPE 產(chǎn)物。飾 PNS 脂質(zhì)體的制備N(xiāo)S、0.5mg 異硫氰酸熒光素（Fluoresceinisothiocyan卵磷脂溶于適量無(wú)水乙醇和氯仿的混合溶劑中，60劑，然后加入預(yù)熱的 HA-DOPE（1mg）水溶液水化細(xì)胞破碎儀超聲 1min 后，即得脂質(zhì)體溶液。隨后將袋（截留分子量 8000-14000KDa），于純水中透析純膜過(guò)濾得到 1mg/ml 淡黃色載藥脂質(zhì)體溶液。

液相色譜法（HighPerformanceLiquidChromatogr的藥物含量。的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 5mgPNS，采用甲醇溶解并稀釋至 50、100、20系列濃度，，甲醇溶液作為空白對(duì)照。Agilent 11：DiamonsilC18(2)5μ250×4.6mm，流動(dòng)相：乙腈in，柱溫：30 °C，檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm 下檢測(cè)。橫為 PNS 色譜峰面積，建立線性回歸曲線。質(zhì)體載藥含量測(cè)定藥脂質(zhì)體溶液，采用甲醇溶解定容至標(biāo)曲濃度
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R965

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 廖立;蘇曉霞;金巖;;抗氧化酶系統(tǒng)異常導(dǎo)致衰老骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化能力下降[J];口腔生物醫(yī)學(xué);2015年03期

2 劉小云;劉一舟;羅映紅;劉佳;;中藥骨碎補(bǔ)水煎液對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用[J];人人健康;2017年08期

3 劉之川;簡(jiǎn)華剛;王麗華;梅英;;體外聯(lián)合培養(yǎng)體系中人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響及機(jī)制[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2014年18期

4 董晨露;劉笑涵;吳琳;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的研究與進(jìn)展[J];中國(guó)骨傷;2019年03期

5 付丹丹;;促骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化因子研究現(xiàn)狀[J];菏澤醫(yī)學(xué)專(zhuān)科學(xué)校學(xué)報(bào);2014年02期

6 彭飛;鄭亞?wèn)|;徐西強(qiáng);虞冀哲;吳華;;620nm低能量紅光對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響[J];激光生物學(xué)報(bào);2011年03期

7 牛玉明;胡媛媛;冷衛(wèi)東;解龍川;賀維;陳永吉;;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和地塞米松聯(lián)合誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖和成骨分化[J];鄖陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年01期

8 王博;王東;施文軍;誥建飛;劉喜全;;阿倫磷酸鈉對(duì)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響[J];中國(guó)醫(yī)療前沿;2009年22期

9 王晶;張洹;;-80℃一步法凍存對(duì)成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2007年03期

10 耿英楠;韋敏;毛豪麗;;大分子擁擠對(duì)脂肪干細(xì)胞增殖及其成骨分化能力的影響[J];組織工程與重建外科雜志;2018年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 曹鳳儀;龍?jiān)?卓仁禧;張先正;;熒光納米探針用于干細(xì)胞早期成骨分化檢測(cè)[A];2015年全國(guó)高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)論文摘要集——主題F-生物醫(yī)用高分子[C];2015年

2 鄭亮;鄭雅元;崔燎;劉鈺瑜;;四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用及機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

3 吳江;陳槐卿;李良;尹光福;K-L P．SUNG;;鈦顆粒負(fù)荷影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力的機(jī)理[A];中國(guó)復(fù)合材料學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

4 吳江;陳槐卿;K-LP.SUNG;;鈦顆粒負(fù)荷影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力的機(jī)理[A];全國(guó)首屆青年復(fù)合材料學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2007年

5 林佳琳;張平;沈想;徐榮耀;朱偉文;傅瑜;江宏兵;;糖尿病骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自噬,衰老及成骨分化特征[A];2018全國(guó)口腔生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2018年

6 徐謙;崔亞洲;欒靜;周小艷;時(shí)良;崔笑笑;劉靜;韓金祥;;成肌細(xì)胞外泌體促成骨分化的作用及機(jī)制研究[A];2017第七屆泛環(huán)渤海生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2017年

7 袁風(fēng)紅;鄒耀紅;高愷言;俞可佳;;地塞米松對(duì)體外人骨髓基質(zhì)細(xì)胞增殖及成骨分化的影響[A];全國(guó)自身免疫性疾病專(zhuān)題研討會(huì)暨第十一次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

8 陳海嘯;洪盾;萬(wàn)曉晨;李繼承;;腸毒素C聯(lián)合維生素C對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響研究[A];2008年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

9 劉仰;李潔;陳雪英;葛雅平;房思煉;;α2-巨球蛋白對(duì)電離輻射下人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的保護(hù)作用[A];2017全國(guó)口腔頜面——頭頸腫瘤外科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2017年

10 張秀梅;崔亞洲;韓金祥;;韌帶成纖維細(xì)胞成骨分化過(guò)程mRNA和蛋白表達(dá)譜分析[A];泛環(huán)渤海地區(qū)九省市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)——2011年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王楠;姜黃素與人參果提取物對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響與成骨不全模型的作用[D];鄭州大學(xué);2019年

2 邱小玲;LINC00707通過(guò)miR-370-3p調(diào)控WNT2B影響人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

3 元宇;MiR-214在機(jī)械應(yīng)力促進(jìn)成骨分化中的作用研究[D];上海體育學(xué)院;2017年

4 萬(wàn)永鮮;自噬對(duì)骨質(zhì)疏松間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

5 賈搏;LncRNA-PCAT1對(duì)人牙周膜干細(xì)胞成骨分化調(diào)控機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

6 王鼎;股骨頭TNF-α含量及表觀學(xué)修飾調(diào)控TNF-α對(duì)BMMSCs成骨分化影響的作用機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2018年

7 周呈瑤;先天性脊柱側(cè)凸患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力評(píng)估研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

8 楊博;Amyloid β_(1-42)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響及機(jī)制研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2018年

9 彭宇飛;中藥關(guān)節(jié)腔灌注對(duì)激素型股骨頭壞死MSCs調(diào)控機(jī)制的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2017年

10 王琪煒;氧化鐵納米顆粒協(xié)助促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化效應(yīng)研究[D];東南大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王豐芝;SDF-1對(duì)牙周膜干細(xì)胞成骨分化作用的研究[D];蘭州大學(xué);2017年

2 徐超;介孔Fe_3O_4基納米輸送體系的構(gòu)建及其在外磁場(chǎng)作用下促成骨效應(yīng)研究[D];武漢理工大學(xué);2018年

3 石安源;TGF-β信號(hào)通路抑制劑調(diào)控hGMSCs體內(nèi)外成骨分化及其機(jī)制的初步研究[D];南京大學(xué);2019年

4 李云;靜壓力對(duì)人牙周膜干細(xì)胞成骨分化的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

5 覃玲;BMP9對(duì)靜壓力作用下人牙周膜干細(xì)胞成骨分化的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

6 安小寧;PNS介導(dǎo)BMP-Smad信號(hào)通路調(diào)控BMSCs成骨分化的機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

7 謝玉;納米HA-PNS-LIP靶向CD44對(duì)兔BMSCs成骨分化的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

8 李洋;BMP9在誘導(dǎo)干細(xì)胞骨分化中促進(jìn)PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與COX-2的關(guān)系研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

9 黃敏;INH-α抑制BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用及機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

10 張磊;黃精多糖體內(nèi)抗骨質(zhì)疏松作用及體外促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2704435