【摘要】：高血壓是全球范圍內(nèi)最常見(jiàn)的慢性病之一,也是心腦血管病最主要的危險(xiǎn)因素,嚴(yán)重危害人類的健康。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin-converting enzyme,ACE)是一種含鋅二肽羧肽酶,在血壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)中起重要作用。ACE抑制肽是是一類從食物中提取的具有降高血壓活性的多肽,通過(guò)作用于ACE而抑制血壓的升高。本文主要研究了二肽YS和十肽INNQFLPYPY(命名為INN)的體外ACE抑制活性、體外穩(wěn)定性、體內(nèi)降血壓活性、抑制類型,并借助分子動(dòng)力學(xué)模擬了這兩種ACE抑制肽的作用機(jī)制。研究結(jié)果如下:(1)采用紫外分光光度法測(cè)定ACE抑制肽YS和INNQFLPYPY的體外抑制活性,通過(guò)擬合方程發(fā)現(xiàn)YS和INNQFLPYPY的ACE抑制率與其濃度存在濃度-活性關(guān)系并計(jì)算二者的IC_(50)值(半數(shù)抑制濃度)。結(jié)果顯示:ACE抑制肽YS的IC_(50)值為22.62μg/m L,ACE抑制肽INNQFLPYPY的IC_(50)值為210.996μg/mL。(2)ACE抑制肽YS和INNQFLPYPY在4℃、20℃、37℃、42℃、65℃的條件下處理1 h后能夠保持良好的穩(wěn)定性。在pH1.0、pH3.0、pH5.0、pH7.0、pH9.0條件下處理2 h、3 h后檢測(cè)結(jié)果表明:YS在酸性環(huán)境下活性穩(wěn)定性最強(qiáng),在弱堿環(huán)境下的穩(wěn)定性稍差;ACE抑制肽INNQFLPYPY在中性和弱堿性的環(huán)境中具有較好的穩(wěn)定性,酸性環(huán)境對(duì)其ACE抑制率影響較大。體外消化穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)顯示:ACE抑制肽YS和INNQFLPYPY均具有較好的耐胃蛋白酶和胰蛋白酶消化穩(wěn)定性。(3)采用抑制酶解動(dòng)力學(xué)方法,探討了ACE抑制肽YS和INNQFLPYPY的酶抑制類型。分別根據(jù)YS和INNQFLPYPY與ACE作用的Lineweaver-Burk方程,確定了YS和INNQFLPYPY均為競(jìng)爭(zhēng)性抑制類型。(4)通過(guò)灌胃原發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和正常大鼠(Wistar)研究ACE抑制肽YS和INNQFLPYPY的體內(nèi)降血壓效果,結(jié)果顯示:YS和INNQFLPYPY在一定的劑量范圍內(nèi)均能顯著降低高血壓大鼠的血壓,并且對(duì)正常大鼠的血壓無(wú)影響。單次灌胃YS結(jié)果顯示,各劑量組均在4 h左右血壓下降最多,15 mg/(kg.BW)劑量組的SHR的血壓最多下降41.81±4.46 mmHg;單次灌胃INNQFLPYPY結(jié)果顯示,各劑量組均在4 h左右血壓下降最多,15 mg/(kg.BW)劑量組的SHR的血壓最多下降34.26±4.13 mm Hg,二者單次灌胃與卡托普利陽(yáng)性對(duì)照相比均有類似的降血壓效果。連續(xù)兩次灌胃YS后,1~7 h內(nèi)SHR血壓持續(xù)下降,在灌胃后7 h左右血壓下降值達(dá)最大,為-52.86±4.19 mmHg,灌胃后8~12h SHR血壓持續(xù)回升,12 h時(shí)血壓下降值回升至-26±4.74 mmHg。連續(xù)兩次灌胃INNQFLPYPY后,1~7 h內(nèi)SHR壓持續(xù)下降,在灌胃后8 h左右血壓下降值達(dá)最大,為-41.16±4.79 mm Hg,灌胃后9~12 h SHR血壓持續(xù)回升,12 h時(shí)血壓下降值回升至-19.08±2.4 mmHg。(5)分子動(dòng)力學(xué)模擬分析表明,YS和INNQFLPYPY與ACE的結(jié)合過(guò)程中,范德華力和靜電力均起到重要作用。INNQFLPYPY與ACE的結(jié)合過(guò)程中,范德華力為主要貢獻(xiàn)力。INNQFLPYPY與ACE口袋中部的氨基酸殘基His365、Lys522和His524發(fā)生氫鍵相互作用,與右袋口的氨基酸殘基Tyr220、Tyr231、Gly127、Arg415、Ala416和Asn417形成大量氫鍵相互作用。YS與ACE的結(jié)合過(guò)程中靜電力為主要貢獻(xiàn)力,范德華力作用相對(duì)較弱,YS與ACE口袋中部的氨基酸殘基Asp426、Gln293、Glu396和Lys522形成的氫鍵作用。
【學(xué)位授予單位】：天津商業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2699065