【摘要】：甾體藥物是臨床上應(yīng)用廣泛的一類重要藥物,常用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、抗毒、抗腫瘤等多種疾病以及用于生育控制。甾體化合物的結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜,其藥理活性的高低取決于特定位點(diǎn)的取代基�；瘜W(xué)合成法應(yīng)用于甾體化合物合成的主要局限性在于它的選擇性較差、步驟多,尤其是在甾體母核的特定位點(diǎn)引入氧原子。而微生物轉(zhuǎn)化法具有專一性強(qiáng),立體選擇性較高,副產(chǎn)物少等優(yōu)點(diǎn),故常用于留體藥物及中間體的合成。已報(bào)道的具有甾體轉(zhuǎn)化活性的微生物多達(dá)1500種,但成功應(yīng)用工業(yè)生產(chǎn)的菌株有限。因此篩選新型菌株對于改進(jìn)甾體生物轉(zhuǎn)化效率和拓寬微生物催化在甾體工業(yè)中的應(yīng)用范圍至關(guān)重要。工業(yè)上主要利用絲狀真菌催化甾體化合物特定位點(diǎn)的羥基化反應(yīng),如利用新月彎孢霉(Curvularia lunata)在11-脫氧皮質(zhì)甾醇(RS)的C11β位引入羥基生產(chǎn)具有抗炎活性的氫化可的松。本文發(fā)現(xiàn)新月彎孢霉也能夠轉(zhuǎn)化重要甾體化合物孕酮、雄甾-4-烯-3,17-二酮(4AD)、睪酮,并利用TLC、HPLC、1HNMR、13C NMR對其相應(yīng)的主要轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行了分離、鑒定。鑒于真菌甾體羥化酶屬于細(xì)胞色素P450酶(CYP),本文也初步探索了新月彎孢霉CYP基因在甾體底物誘導(dǎo)條件下的表達(dá)情況。主要研究結(jié)果如下:新月彎孢霉菌株CICC40301將孕酮,4AD和睪酮分別轉(zhuǎn)化為C17α-羥基孕酮,C14α-羥基-AD,C15-羥基睪酮,確定了新月彎孢羥化酶為誘導(dǎo)酶。通過對新月彎孢霉在底物誘導(dǎo)條件下的轉(zhuǎn)錄組測序和生物信息學(xué)分析得到符合預(yù)期大小的27個(gè)CYP基因,同時(shí)利用RT-PCR對27個(gè)CYP基因表達(dá)的誘導(dǎo)性進(jìn)行了初步分析,獲得了1個(gè)表達(dá)差異大的羥化酶候選基因。對新月彎孢霉轉(zhuǎn)化甾體化合物孕酮、4AD、睪酮的產(chǎn)物鑒定為進(jìn)一步開發(fā)利用該菌株提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
【圖文】：

圖１－４黑曲霉ＴＣＣＣ４１６５０轉(zhuǎn)化４ＡＤ逡逑Ｆｉｇ．邋１－４邋Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋４ＡＤ邋ｂｙ邋Ａ．ｎｉｇｅｒＴＣＣＣ４＼６５０逡逑．３微生物羥基化反應(yīng)的作用逡逑羥基化反應(yīng)是甾體微生物轉(zhuǎn)化中最重要的反應(yīng)之一。自從發(fā)現(xiàn)羥基化甾體可的，２１－雙羥基孕ｇ－４－烯－３，１１，２０－三酮）的藥用價(jià)值并將其成功投入商業(yè)化生產(chǎn)以來化反應(yīng)受到越來越多的關(guān)注。微生物可以在甾體分子的母核及其側(cè)鏈上的任何入一個(gè)或多個(gè)羥基，這些經(jīng)過羥基化修飾的化合物目前頗受歡迎，因?yàn)樵诤芏�，�?jīng)過羥基化的甾體相比原本機(jī)型很小的天然甾體化合物擁有更高的生物活性，脫氧表雄酮（ＤＨＥＡ）的７－羥基產(chǎn)物相比ＤＨＥＡ有更好的免疫保護(hù)效果和更益調(diào)節(jié)能力［６９］。此外，經(jīng)過羥基化修飾的化合物還有一些治療上的優(yōu)勢，比如，在血液中的半衰期更長，運(yùn)送方式更簡單，副作用更小［７（）］。逡逑很多羥基化反應(yīng)都具有非常重要的商業(yè)價(jià)值，，比如１１ａ羥基對于甾體的抗炎活不可少的，同時(shí)能夠降低雄激素和雌激素水平，減輕妊娠反應(yīng)，某些甾體化合ｌｌａ－羥基化產(chǎn)物還是合成地塞米松、強(qiáng)的松龍等藥物的重要中間體。甾體骨架級碳原子的羥基化是獲得高活性抗癌物質(zhì)的有效方法，比如雄烯二酮的衍生

產(chǎn)物邋２—邐孕？逡逑產(chǎn)物邋Ｉ邋—逡逑月彎孢霉Ｃ１ＣＣ邋４０３０１轉(zhuǎn)化孕酮的Ｔｇｅｓｔｅｒｏｎｅ邋ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ｂｙ１：轉(zhuǎn)化產(chǎn)物；２：孕酮逡逑接于５０ｍＬＹＰＤ液體培養(yǎng)基酮底物（４ＡＤ），轉(zhuǎn)化４８邋ｈ酮：乙酸乙酯＝５．５：邋３．５：１。逡逑看出，新月彎孢霉將４ＡＤ轉(zhuǎn)１邋２逡逑＇修，嫊，４ＡＤ逡逑
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R914

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本文編號：2695308