【摘要】：目的:制備無(wú)穩(wěn)定劑修飾的漢防己甲素PLGA納米粒,研究其理化性質(zhì)及細(xì)胞毒和細(xì)胞攝取特性。方法:以聚乳酸-羥基醋酸共聚物(PLGA)為載體材料,采用無(wú)穩(wěn)定劑修飾的納米沉淀法制備漢防己甲素納米粒;通過(guò)單因素試驗(yàn)考察不同制備工藝對(duì)納米粒理化性質(zhì)的影響;通過(guò)載藥量、包封率、累積釋藥量等指標(biāo)考察其載藥特性;采用MTT比色法檢測(cè)其對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549的細(xì)胞毒性;采用共聚焦顯微鏡技術(shù)考察其細(xì)胞攝取特性。結(jié)果:無(wú)穩(wěn)定劑修飾的漢防己甲素PLGA納米粒平均粒徑169.3 nm,與有穩(wěn)定劑的漢防己甲素PLGA納米粒相比外觀無(wú)明顯改變。在一定范圍內(nèi),隨著PLGA用量的增加,納米粒的粒徑呈上升趨勢(shì);隨著投藥量的增加,納米粒的載藥量顯著增加,包封率下降。在pH7.4的釋放介質(zhì)中,納米粒釋慢釋藥,96 h累積釋藥率60.44%。細(xì)胞毒試驗(yàn)顯示,當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間為8 h時(shí),漢防己甲素組的細(xì)胞毒性大于漢防己甲素納米粒組;當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至24 h時(shí),漢防己甲素納米粒組的細(xì)胞活性明顯低于純藥物組;高劑量的空白納米粒組始終表現(xiàn)較低的細(xì)胞毒性。激光共聚焦電鏡斷層掃描顯示漢防己甲素納米粒能夠較好的被細(xì)胞攝取。結(jié)論:制備的無(wú)穩(wěn)定劑修飾的漢防己甲素PLGA納米粒大小均一,包封率高,體外釋藥表現(xiàn)出較好的緩釋效果,易被細(xì)胞攝取,對(duì)A549細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用。
【圖文】：

－ＰＬＧＡＮＰｓ和２％ＰＶＡ－Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ懸液適量，稀釋，滴加在硅膠晶板上自然揮干，ＱｕｏｒｕｍＱ１５０ＥＳ噴金儀真空條件噴金，掃描電鏡觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)（圖１）。（２）ＴＥＭ樣品制備：�。裕澹簦校蹋牵粒危校蠛停玻ィ校郑粒裕澹簦校蹋牵粒危校髴乙哼m量，稀釋，滴加在覆蓋碳膜的銅網(wǎng)上，用２．０％的磷鎢酸鈉液負(fù)染，透射電鏡觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)（圖２）。ａ．無(wú)穩(wěn)定劑修飾；ｂ．２％ＰＶＡ修飾ａ．ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ－ｆｒｅｅ；ｂ．２％ＰＶＡ圖１載藥ＰＬＧＡ納米粒的ＳＥＭ照片Ｆｉｇ１ＳＥＭｉｍａｇｅｓｏｆＰＬＧＡｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｌｏａｄｉｎｇｄｒｕｇ２．２．２Ｚｅｔａ電位和粒徑分析分別�。裕澹簦校蹋牵粒危校蠛停玻ィ校郑粒裕澹簦校蹋牵粒危校髴乙哼m量，稀釋，激光散射法測(cè)定其粒徑及粒徑分布，并檢測(cè)Ｚｅｔａ電位（圖３）。·１３７６·中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志２０１５年８月第３５卷第１５期ＣｈｉｎＨｏｓｐＰｈａｒｍＪ，Ａｕｇ２０１５，Ｖｏｌ３５，Ｎｏ．１５

ａ．無(wú)穩(wěn)定劑修飾；ｂ．２％ＰＶＡ修飾ａ．ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ－ｆｒｅｅ；ｂ．２％ＰＶＡ圖２載藥ＰＬＧＡ納米粒的ＴＥＭ照片Ｆｉｇ２ＴＥＭｉｍａｇｅｓｏｆＰＬＧＡｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｌｏａｄｉｎｇｄｒｕｇ圖３載藥ＰＬＧＡ納米粒（ａ．無(wú)穩(wěn)定劑修飾；ｂ．２％ＰＶＡ修飾）的粒徑分布圖Ｆｉｇ３ＳｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｂｙｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆＰＬＧＡｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｌｏａｄｉｎｇｄｒｕｇ（ａ．ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ－ｆｒｅｅ；ｂ．２％ＰＶＡ）２．３單因素試驗(yàn)考察無(wú)穩(wěn)定劑修飾的ＰＬＧＡＮＰｓ的制備工藝從ＰＬＧＡ用量、乙醇和純化水體積比兩方面對(duì)無(wú)穩(wěn)定劑修飾的ＰＬＧＡ納米粒制備工藝進(jìn)行考察。２．４Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ穩(wěn)定性考察Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ懸液離心收集納米粒，，重分散于ｐＨ７．４ＰＢＳ緩沖液中，室溫保存，通過(guò)測(cè)量０，３，６，９，１２ｄ不同時(shí)間點(diǎn)粒徑對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行考察。２．５Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ包封率和載藥量測(cè)定２．５．１色譜條件色譜柱：ＲＰ１８－ｓｅｌｅｃｔＢ（１２５ｎｍ×４ｍｍ）；流動(dòng)相：水－乙腈－三乙胺（７００∶３００∶１）（調(diào)ｐＨ７．４）；流速：０．７ｍｌ·ｍｉｎ－１；進(jìn)樣量：２０μｌ；柱溫：３５℃；紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：２８０ｎｍ。２．５．２包封率及載藥量的測(cè)定精密稱取一定量的Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ凍干粉，以乙腈溶解，經(jīng)０．２μｍ微孔濾膜過(guò)濾，取濾液，ＨＰＬＣ法測(cè)定Ｔｅｔ的含量，并按下式（１）（２）計(jì)算包封率（ＥＥ％）

【參考文獻(xiàn)】

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1 李巍松;施誠(chéng)仁;杜勇;;漢防己甲素誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤株TGW凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];臨床兒科雜志;2006年06期

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