【摘要】：研究背景近年來,機(jī)會性真菌感染的發(fā)病率逐年升高,已成為造成人類疾病的重要原因之一。特別是對于免疫力低下的患者,如艾滋病患者,惡性腫瘤患者。念珠菌引起的全身性真菌感染在醫(yī)院感染中排第四位。非白念珠菌分離率的增加和念珠菌的耐藥率增加給臨床感染的治療帶來了巨大的挑戰(zhàn)。白色念珠菌(Candida albicans,CA)是造成念珠菌病最常見的病原體,它不僅能引起表皮念珠菌病,還能引起免疫力低下的患者發(fā)生危急生命的系統(tǒng)性真菌感染。當(dāng)前抗真菌藥物可用的種類很少,例如:多烯,唑類,嘧啶類和烯胺類等,其作用機(jī)制主要是針對細(xì)胞壁和細(xì)胞膜以及抑制DNA合成。此外,上述大部分藥物都能使人體表現(xiàn)出明顯的不良反應(yīng),如伏立康唑引起的視覺障礙、兩性霉素B引起的腎臟毒性、伊曲康唑引起的心力衰竭。在這些藥物中,如棘白菌素,其臨床應(yīng)用由于其高昂的費(fèi)用而受到限制。值得一提的是,念珠菌的耐藥現(xiàn)象越來越嚴(yán)重,特別是對于作為臨床常用的抗菌藥首選氟康唑。因此,尋找對抗耐藥真菌的藥物與策略迫在眉睫。針對臨床上能夠應(yīng)用的抗真菌藥物很少且出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象,越來越多的研究者希望通過聯(lián)合用藥這一方式來克服真菌的耐藥難題,而不是僅專注于高成本、長周期的新藥的研制開發(fā)。對于聯(lián)合治療,它通常包括多種抗真菌劑間的組合及現(xiàn)有抗真菌劑和非抗真菌劑間的組合。然而,由于多種抗真菌藥間的聯(lián)用成本高,且易增加患者的用藥不良反應(yīng),所以越來越多的研究者轉(zhuǎn)向關(guān)注非抗真菌藥與現(xiàn)有的抗真菌藥之間的聯(lián)用,例如,布地奈德和氟康唑、苯丁酸與氟康唑等的聯(lián)用均可顯著地抑制耐藥白色念珠菌的生長。因此,抗真菌藥與非抗真菌藥的聯(lián)合應(yīng)用已成為近年來克服真菌耐藥的重要研究手段,也是本課題組多年來的研究方向。鈣離子作為真核細(xì)胞中的第二信使,在細(xì)胞信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞生存中扮演著重要角色。真菌中的鈣-鈣調(diào)磷酸酶信號通路由很多元件組成,包括鈣通道、感應(yīng)器、轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)換器、鈣離子泵以及許多與鈣相關(guān)的蛋白和酶。上述大部分元件與真菌中許多生理過程密切相關(guān),而且很多研究表明鈣和鈣調(diào)磷酸酶介導(dǎo)了唑類耐藥性,表明了鈣信號通路在介導(dǎo)唑類耐藥中起到了非常關(guān)鍵的作用。鈣通道阻滯劑是一類臨床常用藥物,它常用于高血壓、心絞痛等心腦血管疾病,安全性較高,包括氨氯地平、貝尼地平、氟桂利嗪、地爾硫卓等�；阝}離子在真菌耐藥性方面的重要作用,本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)多個(gè)鈣通道阻滯劑與氟康唑聯(lián)用有明顯的體外協(xié)同抗耐藥白色念珠菌的作用,本課題將在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,進(jìn)行鈣通道阻滯劑(硝苯地平、氨氯地平、貝尼地平、氟桂利嗪)與氟康唑聯(lián)用的體內(nèi)作用研究,并進(jìn)一步探討其體內(nèi)作用機(jī)制,這不僅可以拓展鈣通道阻滯劑的臨床應(yīng)用,還將對尋找克服白色念珠菌耐藥的方法提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與新的思路。研究目的前期研究表明,氟康唑聯(lián)合鈣通道阻滯劑在體外對白色念珠菌具有顯著的協(xié)同作用。本研究在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討鈣通道阻滯劑是否能增加氟康唑體內(nèi)抗真菌作用,并探究其體內(nèi)作用機(jī)制。研究方法本研究所用到的白色念珠菌為CA10,鈣通道阻滯劑為氟桂利嗪、硝苯地平、氨氯地平和貝尼地平。使用大蠟螟作為真菌體內(nèi)侵染模型,測定氟康唑與鈣通道阻滯劑聯(lián)用對感染后大蠟螟的生存率、載菌量和組織病理變化,從三個(gè)方面評價(jià)二者的體內(nèi)聯(lián)合作用。生存率試驗(yàn):將感染CA10的大蠟螟幼蟲分為四組,包括對照組、鈣通道阻滯劑藥物單用組、氟康唑組、氟康唑與鈣通道阻滯劑藥物聯(lián)用組。每24 h觀察一次,并記錄幼蟲的存活情況,連續(xù)記錄4天,繪制生存曲線。載菌量試驗(yàn):將四組注射藥物的大蠟螟幼蟲攪碎,稀釋并將其置于無菌酵母膏胨葡萄糖(yeast extract peptone dextrose,YPD)瓊脂固體培養(yǎng)基上培養(yǎng),統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)并計(jì)算每只幼蟲的載菌量。組織病理學(xué)試驗(yàn):用過碘酸雪夫染色(Periodic Acid-Schiff stain,PAS)對大蠟螟組織切片進(jìn)行染色,觀察切片內(nèi)形成團(tuán)塊的情況,判斷大蠟螟組織的損傷情況,從而進(jìn)一步確定氟康唑(fluconazole,FLC)與鈣通道阻滯劑(Calcium channel blockers,CCBs)對體內(nèi)白色念珠菌耐藥菌感染的聯(lián)合抗真菌作用。本研究還從毒力因子方面進(jìn)行了進(jìn)一步的試驗(yàn),通過卵黃培養(yǎng)基法,測定二者聯(lián)用后對耐藥白色念珠菌毒力因素胞外磷脂酶的影響。研究結(jié)果生存率試驗(yàn):與對照組或藥物單用組相比,藥物聯(lián)用組的生存率明顯升高。對照組與藥物單用組無明顯變化;聯(lián)用組的大蠟螟幼蟲生存率約為單用組與對照組的一倍。與此同時(shí),通過對比氟康唑分別與四種鈣通道阻滯劑聯(lián)用結(jié)果可以看出,FLC與氨氯地平聯(lián)用時(shí)的大蠟螟生存率要明顯高于其他三組,提高生存率效果最好。載菌量試驗(yàn):對照組與鈣通道阻滯劑單用組無明顯差異;相比于對照組,氟康唑藥物單用組的載菌量相對減少;而藥物聯(lián)用組的載菌量則明顯大幅度降低,聯(lián)用效果最好。組織病理學(xué)試驗(yàn):與對照組或藥物單用組相比,大蠟螟幼蟲體內(nèi)的感染斑塊在藥物聯(lián)用組中明顯減少。卵黃培養(yǎng)基法:與對照組的Pz值(0.77±0.03)相比,藥物單用組無明顯差異。氟康唑組:0.79 ± 0.01;貝尼地平組:0.76 ± 0.06;氨氯地平組:0.74 土0.08;硝苯地平組:0.75 ± 0.09;氟桂利嗪組:0.76 ± 0.04;而藥物聯(lián)用組中白色念珠菌的胞外磷脂酶活性則顯著降低,其中,FLC與氨氯地平聯(lián)用組未出現(xiàn)沉淀圈,則表明該組合能夠完全抑制胞外磷脂酶的活性。結(jié)論以上結(jié)果提示,氟康唑與鈣通道阻滯劑(氟桂利嗪、硝苯地平、貝尼地平、氨氯地平)聯(lián)用與藥物單用組相比作用于白色念珠菌感染,其抗真菌作用明顯增強(qiáng)。其作用機(jī)制可能與抑制耐藥白色念珠菌胞外磷脂酶的活性有關(guān)。其中,氟康唑與氨氯地平聯(lián)用組的體內(nèi)聯(lián)合抗白色念珠菌作用最為明顯。這些結(jié)果與先前的體外研究一致,均表明氟康唑與鈣通道阻滯劑聯(lián)用能夠?qū)鼓退幇咨钪榫?且其作用機(jī)制與白色念珠菌胞外磷脂酶的活性有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R96

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 林愷樂;;鈣通道阻滯劑和癌癥風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系[J];心血管病防治知識(科普版);2014年05期

2 高柳;郭穎;賈友宏;李一石;;T型鈣通道阻滯劑的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2014年09期

3 ;兩種鈣通道阻滯劑對高血壓病左室肥厚患者心率變異的影響[J];嶺南心血管病雜志;2000年04期

4 李以欣;鈣通道阻滯劑的安全性[J];國外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊);1998年03期

5 馬壯,侯顯明,于潤江;鈣通道阻滯劑致癌之爭辯[J];中國臨床醫(yī)學(xué)雜志;1998年02期

6 SitbonO,肖永營,鄭聞,施毅;吸入NO是一種判斷原發(fā)性肺動脈高壓患者口服鈣通道阻滯劑是否有反應(yīng)的安全篩選方法[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊);1999年10期

7 錢韶紅;鈣通道阻滯劑在眼科疾病中的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊;1996年04期

8 ;FDA咨詢委員會對鈣通道阻滯劑安全性的規(guī)定[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊;1996年05期

9 李維碧;鈣通道阻滯劑與老年人癌發(fā)病率[J];中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報(bào);1996年22期

10 陳薇;;鈣通道阻滯劑與癌癥無關(guān)?[J];國外醫(yī)學(xué)情報(bào);1997年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 葛均波;;鈣通道阻滯劑的過去、現(xiàn)在和未來[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病中青年醫(yī)師論壇論文匯編[C];2008年

2 郭樹忠;王臻;魯開化;張琳西;劉劍波;;鈣通道阻滯劑維拉帕米對增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的作用[A];新世紀(jì) 新機(jī)遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊）[C];2001年

3 于麗平;楊新春;張麟;周亦倫;劉秀蘭;魏妤;李靜;那開憲;趙亞光;;二氫吡啶鈣通道阻滯劑對細(xì)胞凋亡的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2006年

4 郭文娟;;鈣通道阻滯劑治療高血壓引起嚴(yán)重浮腫二例[A];2005年中國高血壓年會論文匯編[C];2005年

5 槐勇;趙連友;李煒;鄭強(qiáng)蓀;劉靜;郭麗;丁璐;浦奎;;鈣通道阻滯劑改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制壓力過負(fù)荷高血壓大鼠的心肌重構(gòu)[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國心血管病學(xué)大會論文匯編[C];2013年

6 黃子旭;王遠(yuǎn)洋;肖婷婷;謝利劍;黃敏;沈捷;;T型鈣通道阻滯劑對野百合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動脈高壓的影響[A];第十三屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會議暨2016年浙江省醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2016年

7 梁建輝;李俊旭;王緒華;陳碧;劉銳克;陸穎;張盼;鄭繼旺;;L-型鈣通道阻滯劑增加5-羥色胺酸(5-HTP)的抗傷害作用[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

8 梁建輝;李俊旭;王緒華;陳碧;劉銳克;陸穎;張盼;鄭繼旺;;L-型鈣通道阻滯劑增加5-羥色胺酸(5-HTP)的抗傷害作用[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會論文摘要集（第二部分）[C];2002年

9 張心中;牛義凱;張英凱;王玉方;;鈣通道阻滯劑對支氣管哮喘患者血小板聚集功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國呼吸病學(xué)術(shù)會議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

10 樊碧發(fā);司馬蕾;徐仲煌;張挺杰;賈東林;;神經(jīng)病理性癌痛的治療策略——鈣通道阻滯劑與阿片藥物的隨機(jī)對照研究[A];中華醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會第十二屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2016年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 朱國旺;第四代鈣通道阻滯劑具有更高安全性[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

2 莊愉;鈣通道阻滯劑可影響老年人的認(rèn)知功能[N];中國醫(yī)藥報(bào);2001年

3 趙彤;如何指導(dǎo)冠心病患者選藥[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

4 王鐘林;舉足輕重的鈣通道阻滯劑[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

5 傅德明;鈣通道阻滯劑在皮膚科的應(yīng)用[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

6 國訊;鈣通道阻滯劑與克拉霉素可能發(fā)生相互作用引起急性腎損傷[N];中國醫(yī)藥報(bào);2014年

7 國訊;鈣通道阻滯劑與克拉霉素可能發(fā)生藥物相互作用引起急性腎損傷[N];中國醫(yī)藥報(bào);2014年

8 孫成春 郝俊文;降壓雙雄 各顯神通[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

9 安徽蚌埠 吳延佳;平穩(wěn)降壓，，安全過年[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年

10 是明啟;硝笨吡啶用途廣[N];廣東科技報(bào);2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 程曉玲;肺動脈高壓血流動力學(xué)和右心功能與預(yù)后的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

2 王如興;不同旋體氨氯地平對大鼠心室肌細(xì)胞電生理作用及對心肌和血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響[D];蘇州大學(xué);2007年

3 汪一;T型鈣通道阻滯劑強(qiáng)化加巴噴丁治療糖尿病神經(jīng)病理性疼痛的效果及可能的機(jī)制[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

4 李思秀;抗驚厥藥物致未成熟腦損傷防治措施的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

5 蔡茹;吡喹酮抗血吸蟲的藥物靶點(diǎn)及其作用機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃子旭;T型鈣通道阻滯劑對野百合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動脈高壓的影響[D];上海交通大學(xué);2017年

2 高明;鈣通道阻滯劑與氟康唑聯(lián)用抗白色念珠菌的體內(nèi)作用及對毒力因子的影響[D];山東大學(xué);2019年

3 孫靜磊;不同鈣通道阻滯劑對骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞基質(zhì)代謝的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2018年

4 劉書源;氟康唑和鈣通道阻滯劑聯(lián)合對抗耐藥白色念珠菌的作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 李雪;T型鈣通道阻滯劑對高血壓患者腎臟保護(hù)作用的薈萃分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

6 吳亞陵;鈣通道阻滯劑對骨代謝影響的系統(tǒng)評價(jià)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

7 黃維;鈣通道阻滯劑維拉帕米鹽酸鹽的工藝改進(jìn)及其衍生物的設(shè)計(jì)和合成[D];四川大學(xué);2006年

8 馬玉秀;地爾硫卓的合成工藝研究[D];沈陽藥科大學(xué);2004年

9 張延慧;單純牙周基礎(chǔ)治療對藥物性牙齦增生的療效觀察[D];山東大學(xué);2009年

10 李戰(zhàn)軍;鹽酸依福地平乙醇化物合成工藝與晶型研究[D];鄭州大學(xué);2016年

本文編號：2686925