【摘要】：目的觀察雷帕霉素激活自噬對(duì)鈦顆粒誘導(dǎo)下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)成骨能力的影響。方法分別以0、1、5、10、20、50、100nM濃度雷帕霉素培養(yǎng)C57小鼠BMSCs細(xì)胞48小時(shí),CCK8法檢測(cè)不同濃度雷帕霉素處理后在各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞活力,確定最佳作用時(shí)間及濃度;設(shè)置對(duì)照組,選用最佳濃度的雷帕霉素(10nM)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞24小時(shí)后western blot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白Atg5、LC-3Ⅰ/Ⅱ表達(dá)水平,確定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自噬情況;之后實(shí)驗(yàn)分為4組:A組:成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基,B組:成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基+鈦顆粒,C組:成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基+雷帕霉素,D組:成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基+鈦顆粒+雷帕霉素。成骨分化培養(yǎng)各組細(xì)胞共21天,ALP含量在第7、14、21d時(shí)檢測(cè),各組的鈣沉積用茜素紅染色法檢測(cè);各組成骨分化相關(guān)蛋白R(shí)unx2和OCN的表達(dá)水平用western blot法檢測(cè)。結(jié)果10nM的雷帕霉素處理C57小鼠BMSCs24h時(shí),細(xì)胞活力最佳;以10nM濃度的雷帕霉素處理BMSCs24h后,Atg5、LC3-Ⅰ/Ⅱ表達(dá)量較對(duì)照組明顯增高;B組ALP活性、鈣沉積量、Runx2和OCN表達(dá)水平較A組明顯降低(P0.05),C組ALP活性、鈣沉積量、Runx2和OCN表達(dá)水平明顯高于其余各組(P0.05),而D組ALP活性、鈣沉積量、Runx2和OCN表達(dá)水平較C組低(P0.05)。結(jié)論:鈦顆粒抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨分化的能力,而雷帕霉素可有效減輕鈦顆粒對(duì)BMSCs成骨分化能力抑制,這可能與其增強(qiáng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自噬水平有關(guān)。
【圖文】：

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)結(jié)果1.雷帕霉素對(duì) BMSCs 生長(zhǎng)的最佳濃度和時(shí)間觀察為了確定不同濃度雷帕霉素對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作用的最佳濃度及時(shí)間，我們使了 CCK8 法檢測(cè)細(xì)胞活性。加入濃度為 0nM、5nM、10nM、20nM、50nM、100nM 的雷帕素，培養(yǎng)細(xì)胞于 12 小時(shí)、24 小時(shí)、36 小時(shí)、48 小時(shí)后收集并檢測(cè)。結(jié)果顯示，對(duì) 小鼠 BMSCs 生長(zhǎng)的最佳工作濃度和最佳工作時(shí)間分別為 10nM 和 24h，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P＜0.05），詳見圖 1。因此我們選擇此藥物濃度與作用時(shí)間處理細(xì)胞。

14圖 2 雷帕霉素對(duì) BMSCs 自噬相關(guān)蛋白 Atg5、LC3-Ⅰ/ⅡA:Western blot 法檢測(cè)細(xì)胞 Atg5 和 LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表達(dá)水平Ⅱ蛋白水平半定量分析。1：對(duì)照組；2：雷帕霉素處理組。aPvs 1表 1 Atg5 和 LC3-Ⅰ/Ⅱ在 A 組、B 組中的比3.各組鈣沉積量比較A 組 B 組 Atg5 0.3908±0.03574 0.7250±0.02857 LC3-Ⅰ/Ⅱ 0.1816±0.01823 0.3348±0.1964
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R965

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本文編號(hào)：2686628