【摘要】：橙皮素是二氫黃酮中的一種,主要存在于蕓香科柑橘屬植物果實(shí)干皮中,曬干后取果皮,提取其中的有效成份,得到的一種呈淡黃色針狀結(jié)晶或粉末。研究表明橙皮素具有抗炎癥反應(yīng)、抗氧化反應(yīng)、降血脂作用、抗腫瘤作用、心血管保護(hù)和免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)等多種藥理活性。另外橙皮素還可以用于其他的用藥方面比如保健系列,暢銷的保健品安利的系列產(chǎn)品都添加有一定量的橙皮素。還有美國近幾年非�；鸨＝∑坊盍�50,其主要成分含量也是橙皮素。在日本,一些食品也與橙皮素的成分相關(guān)聯(lián),它主要是作為一種添加劑使用添加到維生素p中,發(fā)揮其功能特效。另外,在中國橙皮素主要是作為原料藥使用,相關(guān)的藥物應(yīng)用包括健胃、祛痰、鎮(zhèn)咳、驅(qū)風(fēng)、利尿、止逆和止胃痛等。因此橙皮素廣泛引起了植物學(xué)家和藥理學(xué)家的關(guān)注�；谙惹暗难芯亢臀墨I(xiàn)調(diào)研,我們已知橙皮素能通過抑制NF-κB信號(hào)通路的激活、抑制腫瘤壞死因子(TNF)-α,白介素6(IL-6)的生成而減輕呼吸機(jī)引起的急性肺損傷。在另一研究中作者根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)在C-6號(hào)位上進(jìn)行曼尼希修飾引入胺基,當(dāng)其中引入的胺為異丙胺、異丁胺、乙基哌嗪時(shí),結(jié)果顯示化合物表現(xiàn)出更好的TNF-α和IL-6的表達(dá)抑制作用。Bozena Kaminska發(fā)現(xiàn)MAPK信號(hào)通路可以作為抗炎的分子治療靶向目標(biāo),因此我們?cè)O(shè)想橙皮素及其衍生物是否能通過對(duì)NF-κB和MAPK信號(hào)通路上的雙重作用影響達(dá)到特殊的抗炎效果。然而橙皮素本身的利用率比較低,只有大劑量才會(huì)起到一定的作用,橙皮素作為直接治療藥物的期望還有很大距離。目前可開發(fā)作為藥用的化合物較少,生物活性和機(jī)制研究也很缺乏。因此對(duì)橙皮素的結(jié)構(gòu)進(jìn)一步修飾,對(duì)于橙皮素的成藥性研究具有重大的意義。本文以橙皮素為原料,目的在C-7號(hào)位上引入具有酰胺側(cè)鏈取代的衍生物�；衔锏暮铣墒紫壤萌〈磻�(yīng)與溴巴豆酸乙酯反應(yīng)在酸熱下水解得到取代酸橙皮素,然后與一級(jí)胺和二級(jí)胺發(fā)生酰胺化反應(yīng),本部分共合成三級(jí)系列共31個(gè)橙皮素衍生物,包括側(cè)鏈末端是雜環(huán)胺、直鏈胺、芳香胺的橙皮素化合物。目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)特征都經(jīng)過質(zhì)譜和核磁共振氫譜得到確證。研究以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(RAW264.7)為模型,進(jìn)行衍生物體外抗炎活性篩選,并總結(jié)化合物的構(gòu)效關(guān)系。利用Griess reagent(一氧化氮測(cè)定試劑盒)以及ELISA方法測(cè)定不同濃度化合物對(duì)RAW264.7細(xì)胞上清液中炎癥因子NO、TNF-α和IL-6濃度的影響。結(jié)果表明,化合物7-O-巴豆酰N-乙基哌嗪基橙皮素(5b)抗炎活性最高,具有進(jìn)一步研究的價(jià)值。根據(jù)抗炎活性篩選的結(jié)果,初步探討了衍生物抗炎的相關(guān)機(jī)制,結(jié)果發(fā)現(xiàn),化合物5b可以通過影響NF-κB和MAPK兩條信號(hào)通路產(chǎn)生抗炎效果。具體研究包括以下三個(gè)部分:1、橙皮素衍生物的合成:以橙皮素為原料,在橙皮素C-7號(hào)位上引入酰胺基,產(chǎn)物通過橙皮素與溴巴豆酸乙酯在與一級(jí)胺、二級(jí)胺或脂肪胺反應(yīng)所得到。2、抗炎活性的篩選,體外培養(yǎng)小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞(RAW264.7)并給與不同濃度的化合物,用Griess reagent格里斯試劑革利士試劑一氧化氮測(cè)定試劑盒測(cè)定不同濃度化合物對(duì)RAW264.7細(xì)胞上清液中NO的表達(dá),ELISA方法觀察對(duì)細(xì)胞上清液中TNF-α和IL-6濃度的影響。3、Western blot方法探究化合物抗炎活性的可能機(jī)制:化合物可以通過NF-κB信號(hào)通路抑制下游相關(guān)蛋白(p-IκBα,p-p65)表達(dá)或者通過另外一種MAPK信號(hào)通抑制下游相關(guān)蛋白(ERK,p38)表達(dá)達(dá)到抗炎活性。
【圖文】：

11圖 1 合成路線反應(yīng)條件: (A) 96% H2SO4, MeOH, 80 °C. (B) Ethyl -4-bromocrotonate, DMF, K2CO3, 25 °C. (C)10% NaOH, 冰浴。(D1) CH3Cl, EDC, HOBt, amines, 40 °C. (D2) CH3Cl, EDC, HOBt, amines,25 °C.4a:R=吡咯烷基/Pyrolidine (C4H9N)4b:R=糠氨基/Furfurylamine(C5H7NO)5a:R=嗎啉基/Morpholino (C4H8NO)

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文RAW264.7 在受到脂多糖刺激時(shí)會(huì)釋放炎癥因子 NO，通過一氧化氮試劑盒可以檢測(cè)細(xì)胞受到刺激時(shí)釋放的 NO 含量。首先我們檢測(cè)所有化合物在較小濃度梯度下一氧化氮的釋放含量，如果實(shí)驗(yàn)中濃度導(dǎo)致細(xì)胞死亡究在降低濃度梯度進(jìn)行篩選，最后選用的濃度梯度為（5、10、20、30、40μM）。結(jié)果表明，在加入橙皮素和其衍生物后會(huì)抑制細(xì)胞釋放 NO，如見圖 1 所示，橙皮素衍生物 4a b,5b c, 7g, 7i 和 7k 都能夠有效的抑制 NO的釋放。然后又計(jì)算了各個(gè)濃度下化合物抑制一氧化氮釋放的抑制率，發(fā)現(xiàn)在濃度為 30μM 時(shí)，化合物的抑制率大并且抑制率都達(dá)到了 70%以上，特別是化合物 5b 和 7i 在濃度為 30μM 時(shí)抑制率達(dá)到85%以上，，體結(jié)果見表 2。4.結(jié)果4.1 橙皮素及其衍生物對(duì) LPS 誘導(dǎo) RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生 NO 含量的測(cè)定
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R914;R96

【參考文獻(xiàn)】

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1 王曉晨;吉愛國;;NF-κB信號(hào)通路與炎癥反應(yīng)[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2014年01期

2 郭桂芳;鄧彥宏;王建鋒;黎宏宇;梅妹;;橙皮素對(duì)金黃葡萄球菌α-溶血素表達(dá)的抑制作用[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2013年12期

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