【摘要】：目的研究背根神經(jīng)節(jié)TRPM8膜轉(zhuǎn)運(yùn)和P2Y1R調(diào)控NMDA受體磷酸化在瑞芬太尼痛覺過(guò)敏發(fā)生機(jī)制中的作用。內(nèi)容利用瑞芬太尼痛覺過(guò)敏大鼠模型,研究背根神經(jīng)節(jié)TRPM8膜轉(zhuǎn)運(yùn)、NMDA受體磷酸化和P2Y1R表達(dá)的改變,并明確TRPM8膜轉(zhuǎn)運(yùn)和P2Y1R在瑞芬太尼痛覺過(guò)敏發(fā)生機(jī)制中的具體作用及NMDA受體磷酸化對(duì)其的介導(dǎo)作用。方法第一部分:瑞芬痛敏(R)組尾靜脈輸注瑞芬太尼1 μg·kg-1·min-160min;對(duì)照(C)組輸注生理鹽水(NS)60 min。于尾靜脈輸注前24 h,輸注后2、6、24和48 h(T0-4),每組取8只大鼠測(cè)定右后爪機(jī)械縮足反應(yīng)閾(MWT)、熱縮足潛伏期(TWL)和冷板抬足次數(shù)(NPL)后處死,取右側(cè)L4-6背根神經(jīng)節(jié)(DRG),采用 RT-qPCR 測(cè) TRPM8、NMDA 受體亞型 NR1 和 NR2B 及 P2Y1R mRNA,western blot 測(cè)總蛋白 TRPM8、膜蛋白 TRPM8、pNR1、NR1、pNR2B、NR2B和P2Y1R水平,并計(jì)算膜蛋白和總蛋白TRPM8表達(dá)的比值(m/tTRPM8)。第二部分實(shí)驗(yàn)一:對(duì)照(C)組和TRPM8拮抗劑(RQ)組腹腔注射NS或RQ-00203078,尾靜脈輸注NS60min;瑞芬痛敏(R)和瑞芬痛敏+TRPM8拮抗劑(R+RQ)組腹腔注射NS或RQ-00203078,尾靜脈輸注瑞芬太尼1 μg·kg-1·min-160min。尾靜脈輸注前10min行腹腔注射。T0-4時(shí)測(cè)定右后爪MWT、TWL和NPL后處死大鼠,取右側(cè) L4-6 DRG,采用 RT-qPCR 測(cè) NR1 和 NR2B mRNA,western blot測(cè)pNR1、NR1、pNR2B和NR2B,免疫熒光測(cè)pNR1和pNR2B陽(yáng)性神經(jīng)元百分率。第二部分實(shí)驗(yàn)二:對(duì)照(NS+NS)組鞘內(nèi)和腹腔皆注射NS;TRPM8拮抗劑(NS+RQ)組鞘內(nèi)和腹腔注射NS和RQ-00203078;NMDA受體激動(dòng)劑(NMDA+NS)組鞘內(nèi)和腹腔注射NMDA和NS;NMDA受體激動(dòng)劑+TRPM8拮抗劑(NMDA+RQ)組鞘內(nèi)和腹腔注射NMDA和RQ-00203078。四組大鼠尾靜脈皆輸注瑞芬太尼1 μg·kg-1 · min-1 60 min。尾靜脈輸注前1 h和10 min分別行鞘內(nèi)和腹腔注射,T0-4時(shí)測(cè)NPL。第三部分實(shí)驗(yàn)一:對(duì)照(C)組和P2Y1R拮抗劑(MRS)組鞘內(nèi)注射NS或MRS2179,尾靜脈輸注NS 60 min;瑞芬痛敏(R)組和瑞芬痛敏+P2Y1R拮抗劑(R+MRS)組鞘內(nèi)注射NS或MRS2179,尾靜脈輸注瑞芬太尼1μg·kg-1 · min-160 min。尾靜脈輸注前10 min行鞘內(nèi)注射。T0-4時(shí)測(cè)右后爪MWT、TWL和NPL后處死大鼠,取右側(cè)L4-6 DRG,采用RT-qPCR測(cè) NR1 和 NR2B mRNA,western blot 測(cè) pNR1、NR1、pNR2B 和 NR2B,免疫熒光測(cè)pNR1和pNR2B陽(yáng)性神經(jīng)元百分率。第三部分實(shí)驗(yàn)二:對(duì)照(NS+NS)組鞘內(nèi)皆注射NS;P2Y1R拮抗劑(NS+MRS)組鞘內(nèi)注射NS和MRS2179;NMDA受體激動(dòng)劑(NMDA+NS)組鞘內(nèi)注射NMDA和NS;NMDA受體激動(dòng)劑+P2Y1R拮抗劑(NMDA+MRS)組鞘內(nèi)注射NMDA和MRS2179;四組大鼠尾靜脈皆輸注瑞芬太尼1 μg·kg-1 · min-1 60 min。尾靜脈輸注前1 h和10 min鞘內(nèi)分別注射 NMDA 和 MRS2179,T0-4 時(shí)測(cè) MWT、TWL 和 NPL。結(jié)果第一部分:與C組比較,R組T1-4MWT降低、TWL縮短、NPL增加,TRPM8、NR1、NR2B 和 P2Y1R mRNA 增加,總蛋白和膜蛋白 TRPM8、m/t TRPM8、pNR1、NR1、pNR2B、NR2B和P2Y1R蛋白增加。R組隨時(shí)間延長(zhǎng)MWT逐漸降低,TWL逐漸縮短,NPL逐漸增多;TRPM8、NR1、NR2B和P2Y1RmRNA逐漸提升,總蛋白和膜蛋白 TRPM8、m/tTRPM8、pNR1、NR1、pNR2B、NR2B和P2Y1R蛋白逐漸增加。第二部分實(shí)驗(yàn)一:與C組比較,R組T1-4MWT降低,TWL縮短,NPL增多;與R組比較,R+RQ組T1-4 NPL減少,MWT和TWL的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與C組比較,R組NR1和NR2B mRNA增加,pNR1、NR1、pNR2B和NR2B蛋白增加,pNR1和pNR2B陽(yáng)性神經(jīng)元百分率增加;與R 組比較,R+RQ 組 NR1 和 NR2B mRNA 下降,pNR1、NR1、pNR2B 和 NR2B蛋白下降,pNR1和pNR2B陽(yáng)性神經(jīng)元百分率降低。第二部分實(shí)驗(yàn)二:與NS+NS組比較,NS+RQ組T1-4NPL 減少,NMDA+NS 和 NMDA+RQ組T1-4 NPL 增加;與NMDA+NS組比較,NMDA+RQ組T1-4 NPL的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第三部分實(shí)驗(yàn)一:與C組比較,R組T1-4 MWT降低,TWL縮短,NPL增多;與R組比較,R+MRS組T1-4 MWT升高,TWL延長(zhǎng),NPL減少。與C組比較,R組NR1和 NR2B mRNA增加,pNR1、NR1、pNR2B 和 NR2B 蛋白增加,pNR1 和 pNR2B陽(yáng)性神經(jīng)元百分率增加;與R組比較,R+MRS組NR1和NR2B mRNA降低,pNR1、NR1、pNR2B和NR2B蛋白降低,pNR1和pNR2B陽(yáng)性神經(jīng)元百分率減少。第三部分實(shí)驗(yàn)二:與NS+NS組比較,NS+MRS組T1-4MWT增加、TWL延長(zhǎng)、NPL 減少,NMDA+NS 和 NMDA+MRS 組T1-4MWT 降低、TWL 縮短、NPL 增加;與 NMDA+NS 組比較,NMDA+MRS組T1-4MWT、TWL 和 NPL 的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論TRPM8膜轉(zhuǎn)運(yùn)的減少通過(guò)抑制NR1和NR2B的磷酸化削弱瑞芬太尼誘發(fā)的冷痛覺過(guò)敏。P2Y1R拮抗劑通過(guò)抑制NR1和NR2B的磷酸化削弱瑞芬太尼誘發(fā)的機(jī)械觸誘發(fā)痛、熱和冷痛覺過(guò)敏。
【圖文】：

圖１兩組大鼠不同時(shí)點(diǎn)ＭＷＴ、ＴＷＬ和冷板抬足次數(shù)的比較逡逑與Ｃ組比較，＊Ｐ＜０．０１；與Ｔ。時(shí)比較，＃Ｐ＜０．０１逡逑神經(jīng)節(jié)ＴＲＰＭ８邋ｍＲＮＡ水平的改變逡逑組比較，尺組�。迺r(shí)背根神經(jīng)節(jié)ＴＲＰＭ８邋ｍＲＮＡ水平增加（Ｐ＜較，Ｒ邋}D邋ＩＶ４邋時(shí)邋ＴＲＰＭ８邋ｍＲＮＡ邋水平Ｊ；調(diào)（Ｐ＜０．０１）；邋Ｒ邋組邋Ｔｍ邋時(shí)邋平隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加（Ｐ＜０．０１）。Ｃ組各時(shí)點(diǎn)ＴＲＰＭ８邋ｍＲＮＡ計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞0．0５）。見表８，圖２。逡逑１７逡逑

與邋Ｔ0邋時(shí)比較，Ｒ邋}D邋ＩＶ４邋時(shí)邋ＴＲＰＭ８邋ｍＲＮＡ邋水平Ｊ；調(diào)（Ｐ＜０．０１）；邋Ｒ邋組邋Ｔｍ邋時(shí)邋ＴＲＰＭ８逡逑ｍＲＮＡ水平隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加（Ｐ＜０．０１）。Ｃ組各時(shí)點(diǎn)ＴＲＰＭ８邋ｍＲＮＡ水平的逡逑差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞0．0５）。見表８，，圖２。逡逑１７逡逑
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 蘇林;宋程程;舒瑞辰;于泳浩;王國(guó)林;;神經(jīng)病理性痛大鼠冷痛覺過(guò)敏與背根神經(jīng)節(jié)TRPM8膜轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)系[J];中華麻醉學(xué)雜志;2017年05期

2 宋程程;張麟臨;趙亓;郭素倩;李晶;田靖;蘇林;李依澤;元元;于永浩;王國(guó)林;;瑞芬太尼誘發(fā)切口痛大鼠痛覺過(guò)敏時(shí)背根神經(jīng)節(jié)TRPV1表達(dá)的變化[J];中華麻醉學(xué)雜志;2017年02期

3 馬劍鋒;黃志蓮;李軍;胡社軍;連慶泉;;瑞芬太尼致術(shù)后患者痛覺過(guò)敏的隊(duì)列研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2011年14期

本文編號(hào)：2677993