【摘要】：肥胖是由于脂肪代謝紊亂導(dǎo)致脂肪組織增生的一種現(xiàn)象,與胰島素抵抗、II型糖尿病、動脈粥樣硬化以及高血壓血脂等代謝疾病有密切聯(lián)系。大量研究數(shù)據(jù)顯示,農(nóng)藥等環(huán)境污染物對上述代謝疾病的發(fā)生發(fā)展有重要作用。高效氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin,LCT)屬于擬除蟲菊酯類殺蟲劑,具有慢性毒性,能促進(jìn)脂肪生成和積累,對人體內(nèi)脂肪代謝穩(wěn)態(tài)具有破壞作用。目前,高效氯氟氰菊酯對脂肪代謝影響機(jī)制尚不完全清楚。本課題以3T3-L1脂肪前驅(qū)細(xì)胞系為實驗材料,通過地塞米松、胰島素和3-異丁基-1-甲基黃嘌呤的誘導(dǎo)分化為成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞,在兩種濃度20μM和100μM的LCT、不同時間的作用下,從細(xì)胞活性、細(xì)胞分化和脂肪生成等方面對LCT的作用機(jī)制進(jìn)行了研究。1)用CCK8方法檢測LCT是否對3T3-L1脂肪細(xì)胞增殖有毒副作用,以20μM和100μM的LCT分別作用3T3-L1脂肪細(xì)胞24 h、48 h和72 h,檢測細(xì)胞活力;2)以20μM和100μM的LCT分別處理3T3-L1脂肪細(xì)胞4、6、8天,利用油紅染色觀察LCT對細(xì)胞分化影響,用甘油三酯試劑盒檢測脂滴積累量的變化。在此基礎(chǔ)上,用實時定量PCR和western-blot方法檢測LCT對脂肪代謝相關(guān)基因PPARγ、C/EBPα、Fsp27、ADRP、Perilipin、Fabp4、Adiponectin表達(dá)的影響;3)利用抑制劑GW9662抑制PPARγ通路,觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴積累的變化,并檢測通路相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平。CCK8檢測數(shù)據(jù)顯示,兩種濃度20μM和100μM的LCT作用脂肪細(xì)胞48 h和72 h后,均對3T3-L1脂肪細(xì)胞活力有明顯的抑制作用。油紅染色和甘油三酯含量檢測數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)兩種濃度的LCT均能夠促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化和脂滴積累。定量PCR和WB數(shù)據(jù)表明,兩種濃度的LCT引起PPARγ、C/EBPα、Fsp27、ADRP、Perilipin、Fabp4、Adiponectin基因的高表達(dá)。當(dāng)PPARγ信號通路被GW9662有效抑制后,脂肪代謝相關(guān)基因PPARγ、C/EBPα、Perilipin、Fabp4、Adiponectin的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著下降,并且細(xì)胞內(nèi)脂滴積累量明顯降低。本課題結(jié)果提示,LCT可能通過激活PPARγ信號通路,促進(jìn)脂滴過度積累,引起脂代謝紊亂,從而導(dǎo)致肥胖的發(fā)生。本研究為更好的理解高效氯氟氰菊酯(LCT)對脂肪代謝影響機(jī)制提供了重要的參考。
【圖文】：

圖 1-1 脂滴的結(jié)構(gòu)和功能[18]脂滴的生產(chǎn)是一種高度復(fù)雜的程序，它的形成包括游離脂肪酸、甘油、甘油三酯等小分子轉(zhuǎn)入進(jìn)細(xì)胞，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成甘油三酯并以小脂滴的形式分泌到細(xì)胞基質(zhì)中，小的脂滴通過融合作用變成大脂滴，停留在細(xì)胞質(zhì)里，充當(dāng)能量儲存的細(xì)胞器[18],并且脂滴上的中性脂核心是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成[19]。對于脂滴形成于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，存在三種假說：其一是出芽假說，脂滴直接在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)里積累后，通過出芽的方式來離開內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，包裹在脂滴上面的磷脂雙分子層會重新排布，形成磷脂單分子層。第二種假說認(rèn)為脂滴首先合成于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中，隨后由兩邊的單分子膜縊裂之后形成一個包裹著單分子層膜的脂滴。第三種假說結(jié)合前兩個假說，，支持在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中形成脂滴后，由一種與出芽相類似的方式由外層的質(zhì)膜斷裂而從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上分離出來[20]。脂滴大小差異明顯，直徑的大小由 20 nm 到 100 nm 不等，大脂滴通常由小脂滴不斷融合產(chǎn)生，研究發(fā)現(xiàn)一種脂滴結(jié)合蛋白 FSP27 在這個脂滴的融合過程中發(fā)揮著重要的作用[21]。另有研究表明，供體膜上的 synaptobrevin 提供一束 a 螺旋結(jié)構(gòu)，受體膜上的 sytaxin 和 SNSP25 分別提供一束和兩束 a 螺旋

哈爾濱工業(yè)大學(xué)工學(xué)碩士學(xué)位論文且擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的結(jié)合殘留量比較高些畜產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留引起的中毒事件，就曾氟氰菊酯農(nóng)藥不易分解，非常容易累積，世界各個國家積極通過規(guī)定食品中的氯氟嚴(yán)重的農(nóng)藥殘留難題。例如，我國規(guī)定韭菜超過 0.5 mg/kg[74]，歐盟規(guī)定的則是 0.3 mg氰菊酯及對動物和人體的影響菊酯（ -cyhalothrin, LCT），又稱為 -三氟分子量為 449.9，圖 1-4 是它的結(jié)構(gòu)式圖。色粉末），熔點 49.2 ℃，對光穩(wěn)定，可溶，具有強(qiáng)烈的觸殺和胃毒作用[76]，可防治、桃蚜、柑橘潛葉蛾等，除此之外對衛(wèi)生害功效，也能消滅傳播疾病的媒介害蟲。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R99

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