【摘要】：背景:在惡性腫瘤中,肺癌是危害人類(lèi)生命健康的常見(jiàn)癌癥之一,特別是在我國(guó),其患病率、致死率均處于第一的位置。肺癌的治療除外科手術(shù)方式外,常采用化學(xué)治療的方式。用于臨床治療肺癌的藥物中,培美曲塞(Pemetrexed,PMX)常用于二線治療及與其他抗癌藥聯(lián)合用于一線治療,具有良好的效果。但國(guó)內(nèi)PMX的生產(chǎn)存在純度不高等問(wèn)題,且越來(lái)越多的不良反應(yīng)被逐漸發(fā)現(xiàn),對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造,以減少不良反應(yīng)的發(fā)生逐漸成為此類(lèi)藥物研究新的方向。目的:探討PMX新型衍生物體內(nèi)外對(duì)人肺癌細(xì)胞的抑制效果及其機(jī)理,以期發(fā)現(xiàn)療效較好的化合物進(jìn)行后續(xù)研究。方法:本研究選取12種PMX新型衍生物(A1-A12)及4株人肺癌細(xì)胞(H322細(xì)胞、H1299細(xì)胞、A549細(xì)胞、SPC-A1細(xì)胞),首先采用MTT比色法進(jìn)行體外抗肺癌活性篩選試驗(yàn),得到活性較好的1種衍生物及1株細(xì)胞株,并檢測(cè)該衍生物對(duì)該細(xì)胞株在不同作用時(shí)間及不同作用濃度條件下的抑制效果,同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞狀態(tài)觀察。隨后進(jìn)行體內(nèi)抗肺癌活性研究,選用BALB/c Nude裸鼠(SPF級(jí))作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,腫瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)擴(kuò)增至所需濃度后接種至裸鼠右側(cè)腋下,每只裸鼠接種瘤細(xì)胞數(shù)1×10~6個(gè)。試驗(yàn)設(shè)置3組,每組6只裸鼠,分別為(1)模型對(duì)照組,給0.9%氯化鈉注射液;(2)PMX對(duì)照組,給PMX(120 mg/Kg);(3)供試品組,給衍生物(120 mg/Kg),3組給藥方式均為尾靜脈注射,每2 d給藥1次。每組給藥體積為0.1 mL/10g,試驗(yàn)持續(xù)21 d,每次給藥后觀察裸鼠狀態(tài),每3 d測(cè)量移植瘤長(zhǎng)寬并稱(chēng)量攝食量及體重。給藥結(jié)束后處死裸鼠,剖出腫瘤稱(chēng)重并計(jì)算腫瘤抑制率。最后進(jìn)行抗肺癌細(xì)胞機(jī)制研究,主要研究衍生物對(duì)肺癌細(xì)胞的遷移活性(包括垂直遷移活性及水平遷移活性)、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡的影響,分別采用Transwell試驗(yàn)、劃痕愈合試驗(yàn)、PI單染試驗(yàn)、Annexin V-FITC/PI雙染試驗(yàn)進(jìn)行研究。結(jié)果:(1)MTT試驗(yàn)初篩結(jié)果表明雖然是同為PMX的衍生物,但各自對(duì)腫瘤細(xì)胞株的影響效果存在顯著地不同,同一種細(xì)胞株對(duì)不同的衍生物敏感性也不同,其中化合物A12對(duì)A549細(xì)胞的抑制效果最為顯著,IC_(50)為1.26±0.15μmol/L,且重復(fù)性較好。由此篩選得到化合物A12及A549細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步不同作用時(shí)間MTT試驗(yàn)及細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著作用時(shí)間的增加和作用濃度的提高,A549細(xì)胞的存活率逐漸降低,且發(fā)現(xiàn)A12能夠影響A549細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài),使細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變、皺縮。(2)體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí):至觀測(cè)終點(diǎn),與模型對(duì)照組相比較,PMX對(duì)裸鼠行為、活動(dòng)、體重及攝食量無(wú)明顯影響,而給予PMX的裸鼠,存在攝食量減少的現(xiàn)象。在對(duì)腫瘤的抑制方面,給予A12的裸鼠的腫瘤抑制率為41.73%,優(yōu)于PMX對(duì)照組(32.77%)。表明供試品即化合物A12能夠抑制人肺癌A549細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)(P0.01),且相同給藥劑量條件下,A12的抑瘤效果優(yōu)于PMX,不良反應(yīng)方面的表現(xiàn)也優(yōu)于PMX。(3)Transwell試驗(yàn)結(jié)果顯示經(jīng)A12作用8 h后,遷移至Transwell小室膜底部的A549細(xì)胞數(shù)較少,化合物A12對(duì)A549細(xì)胞具備明顯的抑制遷移活性(P0.01),并且此種活性對(duì)濃度具有依賴性,此結(jié)果通過(guò)劃痕愈合試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí);PI染色試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)A12能夠顯著升高G2/M期細(xì)胞的百分率(P0.01),即將A549細(xì)胞阻滯于G2/M期,使其無(wú)法進(jìn)入G0期及下一個(gè)復(fù)制周期,進(jìn)而無(wú)法執(zhí)行其生物學(xué)功能;Annexin V-FITC/PI雙染試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)A12能夠顯著提高A549細(xì)胞的早期凋亡率(P0.05)、晚期凋亡壞死率(P0.01)及總凋亡率(P0.05)。結(jié)論:本研究前期通過(guò)篩選得到了PMX新型衍生物A12,發(fā)現(xiàn)其對(duì)人肺癌A549細(xì)胞具有良好的體外抑制活性,并通過(guò)裸鼠A549細(xì)胞移植瘤模型,證實(shí)其亦能抑制A549細(xì)胞的體內(nèi)增殖。其發(fā)揮作用的機(jī)制與其影響A549細(xì)胞的遷移、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡進(jìn)程有關(guān)。
【圖文】：

圖 2.3.2 化合物 A12 對(duì) A549 細(xì)胞狀態(tài)影響結(jié)果（100×）物 A12 不同作用時(shí)間對(duì) A549 細(xì)胞毒性結(jié)果 法初篩結(jié)果得到的 PMX 衍生物 A12 進(jìn)行不同作用時(shí)間（8 h、24 h、

2化合物A12對(duì)荷瘤裸鼠攝食量的影響
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2677170