【摘要】：目的本文通過建立阿霉素心臟毒性小鼠模型,同時給予熊果酸預(yù)處理,探討熊果酸預(yù)防阿霉素心臟毒性作用的機制,尋找既能拮抗阿霉素心臟毒性又不影響其抗腫瘤活性的途徑。方法將45只小鼠隨機分成3組:空白對照組(Sham組)、阿霉素組(DOX組)和熊果酸+阿霉素組(UA+DOX組),n=15只/組。小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,開始給藥。將阿霉素溶解在賦形劑DMSO(2%)中。Sham組、DOX組,皮下注射含2%DMSO的生理鹽水0.1ml/日;UA+DOX組,皮下注射熊果酸(80mg/kg/日)0.1ml/日。給藥一周后,DOX組及UA+DOX組小鼠給予一次性腹腔注射阿霉素15mg/kg,Sham組腹腔注射等量含2%DMSO的生理鹽水。分別選擇阿霉素注射后的第7天和第28天作為阿霉素早期和晚期心臟損傷的時間點。在阿霉素注射前及阿霉素誘導(dǎo)的兩個損傷時間點,超聲心動圖分別檢測三組小鼠的心功能指數(shù),以評估其心臟功能。為評估熊果酸對心臟早期損傷的影響,在阿霉素注射后的第7天,每組分別處死10只小鼠,獲取心臟樣本,用于CK-MB檢測、TUNEL染色和Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白。為了評估熊果酸對阿霉素晚期心臟損傷的影響,每組剩余的5只小鼠在阿霉素注射后第28天時處死,獲取心臟樣本并石蠟包埋,進(jìn)行HE和Masson染色。結(jié)果1、熊果酸保護(hù)阿霉素處理小鼠的心功能在阿霉素注射后的第7天和第28天,與DOX組相比,UA+DOX組顯著改善了小鼠心臟FS和EF(P0.05)。2、熊果酸降低阿霉素處理小鼠的心臟CK-MB水平為了評估熊果酸對阿霉素處理后小鼠心臟中CK-MB的影響,在阿霉素注射后第7天收集心臟標(biāo)本測每組CK-MB水平:與DOX組相比,熊果酸顯著降低阿霉素處理小鼠心臟中CK-MB的釋放(P0.05)。3、熊果酸預(yù)處理降低阿霉素誘導(dǎo)的小鼠心臟細(xì)胞凋亡與DOX組相比,UA+DOX組顯著減少阿霉素處理小鼠心臟中的凋亡細(xì)胞數(shù)(P0.01)。此外,與DOX組相比,UA+DOX組明顯抑制心臟中cleaved caspase-3的表達(dá)(P0.01)。4、熊果酸抑制阿霉素處理后小鼠心臟中的炎癥和纖維化與Sham組相比,DOX組小鼠心臟組織炎性浸潤較嚴(yán)重;而與DOX組相比,UA+DOX組可明顯降低炎性細(xì)胞的浸潤程度(圖4A);與DOX組相比,UA+DOX組顯著降低纖維化(P0.01)。5、熊果酸增強阿霉素處理后小鼠心臟中AKT和eNOS的磷酸化水平熊果酸對AKT和p-AKT的作用:與Sham組相比,DOX組阿霉素顯著降低AKT磷酸化水平(P0.05);與DOX組相比,UA+DOX組顯著增加AKT的磷酸化水平(P0.05)。熊果酸對p-eNOS的作用:與Sham組相比,DOX組顯著降低P-eNOS的表達(dá)(P0.01);與DOX組相比,UA+DOX組顯著提高P-eNOS在阿霉素處理后小鼠心臟中的表達(dá)(P0.01)。6、熊果酸下調(diào)阿霉素處理小鼠心臟NOX4的表達(dá)并抑制阿霉素處理小鼠心臟的eNOS解偶聯(lián)熊果酸對eNOS的影響:與Sham組相比,DOX組顯著增加了eNOS的表達(dá)(P0.05);與DOX組相比,UA+DOX組顯著增加eNOS的表達(dá)(P0.01)。熊果酸對NOX4的影響:與Sham組相比,DOX組顯著增加NOX4表達(dá)(P0.01);與DOX組相比,UA+DOX組顯著降低NOX4表達(dá)(P0.01)。結(jié)論熊果酸能夠改善阿霉素處理小鼠的心臟短軸縮短率(FS)和射血分?jǐn)?shù)(EF),并減少阿霉素所致心肌細(xì)胞凋亡。其機制可能是熊果酸通過增強AKT和eNOS的磷酸化水平,并增強eNOS的表達(dá),同時下調(diào)NOX4來抑制阿霉素誘導(dǎo)的eNOS解偶聯(lián)。最終,這些效應(yīng)使熊果酸對阿霉素致心臟損傷起到拮抗作用。
【圖文】：

21圖1 小鼠心功能指數(shù)EF和FS的比較注：A..心臟超聲心動圖。上圖，阿霉素+熊果酸組（UA+ DOX）; 下圖，阿霉素組（DOX）。LVID.d，舒張期左心室內(nèi)徑; LVID.s，收縮期左心室內(nèi)徑。B：FS值：與DOX組比較，*P<0.05。C：EF值：與DOX組比較，*P<0.05。二、熊果酸降低阿霉素處理后心臟中的 CK-MB 水平為了評估熊果酸對用阿霉素處理后心臟中 CK-MB 產(chǎn)生的影響，，將每組小鼠在阿霉素處理后一周處死并收集心臟標(biāo)本。結(jié)果如圖 2 所示

23圖3 小鼠心臟組織TUNEL染色（A/B）、蛋白Cleaved caspase-3的表達(dá)（C/D）注： A. 心臟樣品的TUNEL染色。 a. Sham組; b. UA+DOX組; c. DOX組（Bar=20μm）。B. 凋亡細(xì)胞核染成棕色（箭頭所示）。C.泳道1至3分別代表Sham組，DOX組和UA+DOX組。四、熊果酸抑制阿霉素處理后小鼠心臟中的炎癥和纖維化為了進(jìn)一步評估熊果酸在阿霉素?fù)p傷晚期對心臟的影響，在第28天處死小鼠，獲得心臟樣品并石蠟包埋。切片進(jìn)行H&E及Masson's染色。結(jié)果顯示，與DOX組相比，熊果酸明顯減少炎性細(xì)胞浸潤（圖4A）及心臟組織纖維化（n = 5，* P <0.01，圖4B和C）。結(jié)果表明
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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1 姜雪;史磊;;丹參活性成分及藥理作用研究進(jìn)展[J];藥學(xué)研究;2017年03期

本文編號：2674927