【摘要】：癌癥是一種難檢測(cè)、難預(yù)防,具有很高致死率的疾病,已經(jīng)嚴(yán)重威脅人類的生命健康。癌癥也是當(dāng)今化學(xué)生物學(xué)及生命科學(xué)等學(xué)科的重點(diǎn)研究對(duì)象。而在眾多的癌癥治療方法中,化療是最有效也是使用最多的方法之一,化療即通過化學(xué)類藥品來治療癌癥患者。由于癌癥的種類十分繁多,而不同的化學(xué)藥物在治療不同的癌癥種類上有明顯的差異性,所以針對(duì)于不同的癌癥,往往使用不同的藥物。在諸多治療癌癥的藥物中,順鉑因其抗癌譜廣,抗癌效果顯著,被廣泛用于癌癥治療,尤其對(duì)于睪丸癌、卵巢癌等癌癥有極好治療效果。但順鉑在臨床治療中表現(xiàn)出神經(jīng)毒性、腎臟毒性、耳毒性的毒副作用,以及在治療過程中產(chǎn)生耐藥性等問題,極大的限制了其使用。所以研究順鉑的抗癌機(jī)理以及順鉑產(chǎn)生毒性和耐藥性等機(jī)理顯得尤為重要,通過研究這些機(jī)理能夠一定程度減少毒副作用、克服耐藥性,能更有效的利用順鉑治療癌癥。而且也能夠指導(dǎo)新型鉑類藥物的開發(fā)研究。順鉑治療癌癥的機(jī)理主要包括順鉑在細(xì)胞內(nèi)累積、順鉑在細(xì)胞內(nèi)水解活化、順鉑和靶點(diǎn)DNA反應(yīng)三個(gè)過程。其中順鉑在細(xì)胞內(nèi)的累積包括順鉑的攝入和排出,順鉑的水解活化是氯原子被水分子取代,順鉑與靶點(diǎn)DNA反應(yīng)是通過順鉑和DNA鏈上相鄰腺嘌呤或者鳥嘌呤N7原子配位,形成穩(wěn)定的鉑-DNA復(fù)合物,致使DNA發(fā)生扭曲,造成DNA損傷,最終促使癌細(xì)胞發(fā)生凋亡,達(dá)到治療的效果。在最近的研究中發(fā)現(xiàn),順鉑發(fā)揮抗癌活性的三個(gè)過程都和一些蛋白質(zhì)相關(guān),比如銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CTR1、ATP7A/ATP7B跟順鉑的攝取和泵出有關(guān)。順鉑在細(xì)胞內(nèi)被水解活化后易和含巰基、含氮的分子反應(yīng),比如谷胱甘肽、蛋白質(zhì)等反應(yīng)。順鉑和蛋白質(zhì)的反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能受損,從而會(huì)導(dǎo)致該蛋白相關(guān)的信號(hào)通路改變,影響細(xì)胞的功能,所以研究清楚癌細(xì)胞內(nèi)主要有哪些蛋白質(zhì)會(huì)和順鉑發(fā)生反應(yīng),對(duì)于研究順鉑的抗癌機(jī)理、毒副作用、耐藥性等問題都有十分重要的意義。但細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)種類眾多、含量低,不容易富集和分離,難于用常規(guī)手段來分析。我們?cè)O(shè)計(jì)了一個(gè)基于順鉑結(jié)構(gòu)衍生的化學(xué)探針來研究分析細(xì)胞內(nèi)有哪些蛋白質(zhì)能夠和順鉑發(fā)生反應(yīng)。該探針可以在細(xì)胞內(nèi)結(jié)合蛋白,通過裂解細(xì)胞,得到順鉑探針與蛋白質(zhì)的復(fù)合物。在順鉑探針的報(bào)告基團(tuán)端可以與鐵磁納米顆粒表面的活性基團(tuán)進(jìn)行點(diǎn)擊反應(yīng)交聯(lián)。再利用納米顆粒的磁性來分離蛋白質(zhì)和探針形成的復(fù)合物,然后獲得細(xì)胞內(nèi)與順鉑結(jié)合的蛋白質(zhì)。最后,用質(zhì)譜進(jìn)行分析鑒定,得到完整的順鉑蛋白組學(xué)信息。首先,我們?cè)O(shè)計(jì)了一個(gè)順鉑類似物的探針,用丙二胺代替了順鉑的兩個(gè)氨基,并將其延伸出一個(gè)炔基,作為連接用的官能團(tuán)。為了保證官能團(tuán)的唯一性,我們用叔丁氧羰基來保護(hù)氨基,然后在延伸出新的活性氨基作為連接反應(yīng)的活性位點(diǎn)。然后,我們?cè)僦苽淞艘粋�(gè)具有磁性分離效果的四氧化三鐵納米顆粒體系,并對(duì)其表面進(jìn)行了修飾,使其含有一個(gè)疊氮基,疊氮基和炔基可以在一價(jià)銅的催化下進(jìn)行點(diǎn)擊反應(yīng),從而連接兩個(gè)部分。再后,我們計(jì)劃將順鉑探針和細(xì)胞進(jìn)行孵育,使其進(jìn)入細(xì)胞與胞內(nèi)蛋白等結(jié)合,再通過設(shè)計(jì)中的裂解富集分離等步驟來獲取相應(yīng)的蛋白。最后,我們計(jì)劃對(duì)蛋白進(jìn)行檢測(cè),從而獲得細(xì)胞內(nèi)和順鉑反應(yīng)的蛋白質(zhì)組的信息。
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R96

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1 王丹;劉傳勇;龍s，

本文編號(hào)：2674919