【摘要】：本研究中,通過納米沉淀法和脂質(zhì)體擠壓法制備出了葉酸修飾的紅細(xì)胞膜包裹PLGA納米粒(FA-RBCm-PLGA)藥物載體,并負(fù)載紫杉醇(PTX)和第三代P-gp抑制劑Tariquidar(TQR),以此構(gòu)建一種同時(shí)具備腫瘤靶向和抗腫瘤多藥耐藥雙重作用的新型納米給藥系統(tǒng)(FA-RBCm-PLGA-PTX-TQR)。該載藥系統(tǒng)利用天然紅細(xì)胞膜的安全性,葉酸配體的靶向性和TQR的抗腫瘤多藥耐藥特性,以望在降低毒副作用的前提下提高PTX的抗腫瘤效果,使癌癥得到更有效的治療。本文從載藥系統(tǒng)的制備工藝、理化性質(zhì)、體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)和體外抗腫瘤活性等方面進(jìn)行評價(jià),具體研究內(nèi)容如下。采用納米沉淀法制備PLGA-PTX納米粒,并以包封率和載藥量為指標(biāo),對藥載比、油水體積比和超聲強(qiáng)度這三個(gè)水平進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),確定最佳制備工藝。結(jié)果顯示當(dāng)藥載比為1:5,油水體積比為1:5,500 W探頭超聲10 min時(shí),PLGA-PTX納米粒具有最佳的包封率和載藥量。采用低滲裂解法提取得到RBCm,再通過脂質(zhì)擠壓的方法制備FA-RBCm-PLGA-PTX納米粒。從包封率、粒徑、電位和透射電鏡下的形貌、體外釋藥特性等方面對PLGA-PTX和FA-RBCm-PLGA-PTX納米粒進(jìn)行表征和對比,同時(shí)考察FA-RBCm-PLGA-PTX的膜蛋白特性和儲存穩(wěn)定性。結(jié)果表明PLGA-PTX的包封率、粒徑和電位分別為76.1%、138.7nm、-4.45 mV,FA-RBCm-PLGA-PTX的包封率、粒徑和電位分別為67.6%、159.8 nm、-10.98 mV,且在透射電鏡下兩者都是粒徑均一的球形顆粒。體外釋放實(shí)驗(yàn)表明,與PTX游離藥相比,PLGA-PTX和FA-RBCm-PLGA-PTX均能緩慢釋放,但FA-RBCm-PLGA-PTX具有最明顯的緩釋特性。FA-RBCm-PLGA-PTX的膜蛋白種類與天然紅細(xì)胞相比無明顯減少,且穩(wěn)定性良好,在4°C下保存21天粒徑無明顯增大。大鼠尾靜脈注射FA-RBCm-PLGA-PTX,考察其在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為,結(jié)果顯示FA-RBCm-PLGA-PTX組的AUC為6.025 mg/L·h,MRT為7.359 h,C_(max)為3.328 mg/L,t_(1/2)為5.837 h,與PTX相比具有較好的長循環(huán)特性。小鼠尾靜脈注射FA-RBCm-PLGA-PTX,考察其在體內(nèi)的組織分布情況,結(jié)果顯示FA-RBCm-PLGA-PTX提高了藥物在肝臟、脾臟、腎臟中的分布,且在12 h時(shí)藥物含量明顯高于PTX注射液,提示納米混懸液組FA-RBCm-PLGA-PTX能延長藥物在體內(nèi)的滯留時(shí)間。采用納米沉淀法和脂質(zhì)體擠壓法制備雙載藥的葉酸修飾紅細(xì)胞膜包裹PLGA納米粒(FA-RBCm-PLGA-PTX-TQR),PTX和TQR的質(zhì)量比為10:1,其他制備條件不變。MTT法檢測FA-RBCm-PLGA-PTX-TQR的體外抗腫瘤活性,MCF-7/ADR細(xì)胞對納米粒的攝取行為通過熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀從定性和定量兩方面進(jìn)行考察,并對攝取機(jī)制進(jìn)行初步探索。結(jié)果表明FA-RBCm-PLGA-PTX-TQR、FA-RBCm-PLGA-PTX和RBCm-PLGA-PTX對于耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR的IC50值分別為17.88 μg/mL、39.52μg/mL和130.0μg/mL,提示葉酸靶向增加了細(xì)胞毒性,同時(shí)納米粒中TQR的存在使其具有抗腫瘤多藥耐藥的效果,逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為2.21倍。葉酸抑制實(shí)驗(yàn)表明FA-RBCm-PLGA-PTX-TQR可通過葉酸配體受體特異性結(jié)合作用被MCF-7/ADR細(xì)胞攝取,攝取機(jī)制的初步探索表明其可通過網(wǎng)格蛋白和小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,且這一過程受溫度、細(xì)胞內(nèi)ATP水平和pH值以及細(xì)胞膜流動(dòng)性的影響。綜上所述,雙載藥的FA-RBCm-PLGA-PTX-TQR納米粒制備工藝穩(wěn)定,安全性好,可延長PTX在大鼠體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間,提高在組織中的分布,同時(shí)具備腫瘤靶向性和抗腫瘤多藥耐藥特性,增強(qiáng)了治療效果又降低了PTX的毒副作用,是一種性能優(yōu)異有較好應(yīng)用前景的納米給藥系統(tǒng)。
【圖文】：

9圖 2-1 HPLC 色譜圖：FA-RBCm-PLGA（A）；FA-RBCm-PLGA-PTX（B）e 2-1 HPLC chromatograms of FA-RBCm-PLGA（A）；FA-RBCm-PLGA-PTX性范圍面積對濃度作圖，結(jié)果如圖 2-2 所示，PTX 在 0.05~10 μg/mL 范圍線性回歸方程為 y=23591x +201.4（R2= 0.9999）。

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文表 3-5 PLGA-PTX 和 FA-RBCm-PLGA-PTX 的粒徑和電位Table 3-5 The particle size and zeta potential of PLGA-PTX and FA-RBCm-PLGA-PTX納米粒 粒徑（nm） PDI 表面電位（mV）PLGA-PTX 138.7±2.9 0.176 - 4.45FA-RBCm-PLGA-PTX 159.8±1.4 0.124 - 10.98
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R943

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本文編號：2675108