【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer disease, AD)，即老年性癡呆癥，是較為常見的神經(jīng)衰退病癥，患者的主要癥狀是認知功能、視空間功能、記憶功能等出現(xiàn)障礙，導致個人生活能力、社會能力和情感人格等明顯降低。到目前為止，“膽堿能缺失學說”仍是AD最為廣泛接受的病理學說。此學說認為AD的關(guān)鍵病因是患者大腦內(nèi)乙酰膽堿的缺失，導致神經(jīng)興奮無法正常傳遞，目前，依據(jù)此學說研發(fā)的擬膽堿藥物仍是臨床治療AD的主要藥物。 查爾酮是一種具有多種生物活性的天然產(chǎn)物，其柔性結(jié)構(gòu)使其能較好地結(jié)合生物大分子，我們結(jié)合“膽堿能缺失學說”發(fā)病機理、乙酰膽堿的結(jié)構(gòu)特點及擬膽堿藥設(shè)計原理，首先對卡瓦胡椒素B含氮衍生物進行了體外生物活性初步研究，，然后根據(jù)活性篩選結(jié)果，為進一步探索構(gòu)效關(guān)系，我們采用簡化結(jié)構(gòu)法，設(shè)計并合成了一系列不同鏈長的含氮查爾酮衍生物，并對其生物活性進行初步的探討，以期能夠篩選出對乙酰膽堿酯酶具有高抑制作用的化合物。 本論文包括以下幾方面的內(nèi)容： (1)對羥胺三氯化鐵法和Ellman法進行了優(yōu)化對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ellman法具有靈敏度高，用酶量少，直接作用于反應產(chǎn)物的顯色方式等優(yōu)點。 (2)使用優(yōu)化的Ellman法篩選了卡瓦胡椒素B含氮衍生物對乙酰膽堿酯酶的活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與母體化合物卡瓦胡椒素B相比，其衍生物對乙酰膽堿酯酶均有一定的抑制活性，其中化合物A6對乙酰膽堿酯酶的抑制活性最強，IC50值達到了4.15μM，接近利斯的明的兩倍，化合物A2、A3、A5、A8也均具有較高活性，其IC50分別為18.8、15.1、16.1、12.4μM；然后，將具有較高活性的化合物A2、A3、A5、A6、A8進行酶動力學實驗，研究其與酶抑制作用的機理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們對乙酰膽堿酯酶均表現(xiàn)為混合型抑制作用；采用MOE2008軟件對化合物A1~A8進行了分子對接實驗，探索小分子化合物與乙酰膽堿酯酶在分子水平上的結(jié)合方式，分子模擬結(jié)果表明較高活性的化合物A2、A3、A5、A6、A8均能與酶催化中心（CAS）和外周活性位點（PAS）同時結(jié)合，為雙位點酶抑制劑，并證明了酶動力學實驗的結(jié)論。 (3)為探究含氮卡瓦胡椒素B衍生物透血腦屏障的能力，采用搖床法結(jié)合HPLC法對其油水分布系數(shù)（log P）進行了測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)此類衍生物的log P值都存在于最適中樞神經(jīng)系統(tǒng)值（2.0±0.7）之間，可初步預測其具有較好的透血腦屏障能力。 (4)為進一步探究構(gòu)效關(guān)系，根據(jù)簡化結(jié)構(gòu)法設(shè)計合成了一系列不同鏈長的含氮查爾酮衍生物，并利用1H NMR，紅外等手段進行了結(jié)構(gòu)表征。 (5)使用Ellman法篩選了含氮查爾酮類衍生物對AChE的活性，測定結(jié)果表明該類衍生物均對乙酰膽堿酯酶具有一定的抑制活性，其中鏈長為4時，化合物活性表現(xiàn)最高，含氮取代基對活性的影響為吡啶環(huán)、四氫吡咯環(huán)要高于直鏈的二甲氨基和二乙氨基，其中化合物B5c對乙酰膽堿酯酶的IC50值達到了0.85μM，其次是化合物B5d，對乙酰膽堿酯酶的IC50為1.42μM，高于最高抑制活性的卡瓦胡椒素B衍生物A6。同時通過酶動力學實驗研究最高活性的化合物B5c對乙酰膽堿酯酶抑制作用的機理，研究結(jié)果表明化合物B5c為混合型抑制劑，分子模擬結(jié)果表明化合物B5c能與酶催化中心（CAS）和外周陰離子（PAS）同時結(jié)合，為雙位點酶抑制劑，這一結(jié)果與酶動力學結(jié)論相照應。
【學位授予單位】：湖南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R914;R96

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王淑月,劉亞妹,姚道魯,高記華;乙酰膽堿酯酶抑制劑的研究現(xiàn)狀[J];承德醫(yī)學院學報;2002年04期

2 鄭皓;王曉靜;;葛根的藥理作用研究概況[J];光明中醫(yī);2006年03期

3 邢宏義,孫圣剛;Alzheimer病的膽堿能系統(tǒng)研究進展[J];國外醫(yī)學.神經(jīng)病學神經(jīng)外科學分冊;2000年05期

4 盛一珉,杭漢翔;乙酰膽堿酯酶抑制劑的研究進展[J];海峽藥學;2005年04期

5 賈宏瑛;楊更亮;辛培勇;陳義;;用膠束液相色譜模擬生物膜預測藥物的醇-水分配系數(shù)log P[J];化學學報;2007年08期

6 郭權(quán),王希誠,李純蓮;藥物分子對接中應用網(wǎng)格的研究與進展[J];計算機研究與發(fā)展;2004年12期

7 施明安,袁建忠,唐振華;乙酰膽堿酯酶的晶體結(jié)構(gòu)及功能位點[J];農(nóng)藥學學報;2000年03期

8 金磊;閆聰彥;甘淋玲;周成合;;查爾酮類化合物生物活性研究新進展[J];中國生化藥物雜志;2010年05期

9 鄒磊;全明海;程永強;李里特;;乙酰膽堿酯酶抑制劑的研究進展[J];食品科學;2005年S1期

10 陳妍;朱麗萍;陳美娟;;影響Aβ聚集的分子伴侶的研究進展[J];精神醫(yī)學雜志;2013年02期

本文編號：2673386