【摘要】：研究背景氯氮平(clozapine,CLZ)是臨床上應(yīng)用廣泛的非典型抗精神病藥物之一,通過(guò)細(xì)胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶系統(tǒng)催化代謝,其中CYP1A2催化氯氮平生成去甲氯氮平(N-desmethylclozapine,N-CZP)是主要的代謝途徑。與氯氮平相關(guān)的藥物相互作用機(jī)制主要是CYP1A2的誘導(dǎo)或抑制作用。研究報(bào)道氟伏沙明對(duì)CYP1A2抑制作用最強(qiáng),可作為研究CYP1A2的工具藥。辣椒是全世界范圍內(nèi)被廣泛喜愛(ài)的食品和調(diào)味品之一,其主要的辛辣成分是辣椒素(capsaicin,CAP),由于具有多種藥理作用而在不同的領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用[1]。隨著辣椒素的臨床研究不斷深入,辣椒素與藥物相互作用問(wèn)題日益凸現(xiàn)。劉金梅[2]等人研究證明辣椒素可能有誘導(dǎo)大鼠肝藥酶CYP1A2、CYP2C11和CYP3A活性,增強(qiáng)肝臟代謝能力的作用,但也有文獻(xiàn)報(bào)道[3]辣椒素在體外對(duì)大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A2具有抑制作用。研究顯示,辣椒素對(duì)多種藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體有顯著的誘導(dǎo)或抑制作用,通過(guò)多種因素影響合用藥物的體內(nèi)過(guò)程,進(jìn)而導(dǎo)致復(fù)雜的藥物相互作用的發(fā)生�；颊咴诜寐鹊綍r(shí),攝入辣椒素是否會(huì)對(duì)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)有影響?相互作用的機(jī)制是否由于辣椒素對(duì)CYP1A2的抑制作用?然而,目前關(guān)于體內(nèi)辣椒素-藥物相互作用的研究報(bào)道不多,辣椒素對(duì)氯氮平藥代動(dòng)力學(xué)的影響研究尚未見(jiàn)報(bào)道。研究辣椒素對(duì)CYP450酶活性的影響,以及辣椒素對(duì)氯氮平藥代動(dòng)力學(xué)的機(jī)制,對(duì)于揭示辣椒素與其他藥物間相互作用具有非常重要的意義。研究目的本項(xiàng)目擬通過(guò)建立HPLC-MS/MS法測(cè)定大鼠血漿中氯氮平及代謝物的濃度,研究不同劑量辣椒素對(duì)大鼠體內(nèi)氯氮平藥代動(dòng)力學(xué)特征,并考察辣椒素對(duì)CYP1A2的影響,旨在為氯氮平或辣椒素與其他的藥物-食物相互作用研究以及臨床合理用藥提供理論參考。研究方法1.建立大鼠血漿中氯氮平以及去甲氯氮平濃度的HPLC-MS/MS方法。2.按自身對(duì)照、雙周期方法設(shè)計(jì)。采用雄性SD大鼠為動(dòng)物模型,隨機(jī)分為4組,每組10只:低劑量辣椒素組、中劑量辣椒素組、高劑量辣椒素組和對(duì)照組。每組第一周期在大鼠禁食12 h后,予氯氮平混懸液(31.5 mg·m L-1)灌胃,整個(gè)實(shí)驗(yàn)的給藥劑量均按大鼠體重1 m L/100g給予。經(jīng)眼眶靜脈叢采集給藥前(0 h)及給藥后0.17、0.33、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12 h血樣1 m L/次待測(cè)。經(jīng)過(guò)7 d的清洗期后,第二周期將各組大鼠連續(xù)7 d分別給予低(0.2 mg·m L-1)、中(0.8 mg·m L-1)、高濃度(1.6 mg·m L-1)辣椒素混懸液或氟伏沙明(10 mg·m L-1)溶液灌胃,于第8 d分別灌胃含相應(yīng)濃度辣椒素或氟伏沙明與氯氮平的混合混懸液,同第一周期灌胃后經(jīng)眼框靜脈叢分別采集不同時(shí)間點(diǎn)血樣,采用HPLC-MS/MS法同時(shí)檢測(cè)氯氮平和去甲氯氮平的血藥濃度,并采用DAS 3.2.4軟件計(jì)算主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果1.HPLC-MS/MS法測(cè)定大鼠體內(nèi)氯氮平與去甲氯氮平標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為1-1000 ng·m L-1,定量下限為1 ng·m L-1,實(shí)驗(yàn)結(jié)果滿足藥代動(dòng)力學(xué)相關(guān)指導(dǎo)原則對(duì)測(cè)定的要求,適用于大鼠體內(nèi)氯氮平及去甲氯氮平藥代動(dòng)力學(xué)研究。2.不同劑量辣椒素組中,自身第二周期與第一周期比較,氯氮平及去甲氯氮平的藥-時(shí)曲線和主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)有著不同的變化:低劑量辣椒素組中,合用低劑量辣椒素后氯氮平的t1/2顯著延長(zhǎng)(p0.05)。氯氮平及去甲氯氮平的Cmax、AUC、Vd及CL等參數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。中劑量辣椒素組中,合用中劑量辣椒素后氯氮平及去甲氯氮平的Cmax和AUC0-12均有增加的趨勢(shì)。其中Cmax分別增加1.73倍和1.68倍(p0.05);AUC0-12分別增加1.19倍和1.54倍。去甲氯氮平的tmax和t1/2延長(zhǎng),CL/F和Vd/F降低(p0.05)。高劑量辣椒素組中,合用高劑量辣椒素后氯氮平及去甲氯氮平的Cmax和AUC0-12顯著增加(p0.05),t1/2延長(zhǎng),CL/F和Vd/F明顯降低。氯氮平及去甲氯氮平的Cmax分別增加1.92倍和1.78倍;AUC0-12分別增加2.05倍和1.98倍。3.對(duì)照組中,合用氟伏沙明后使氯氮平的CL/F和Vd/F均有減少趨勢(shì),Cmax、AUC0-12分別增加1.38和2.12倍。去甲氯氮平tmax減少,t1/2增加(p0.05)。4.在第二周期中,中、高劑量辣椒素組與對(duì)照組(氟伏沙明)比較,氯氮平的平均血藥濃度-時(shí)間曲線的變化趨勢(shì)基本一致,代謝物去甲氯氮平與原形藥物氯氮平濃度的比值也比較接近。結(jié)論1.本實(shí)驗(yàn)建立了一種快速、高效、簡(jiǎn)單、可靠的高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS),并可用于同時(shí)檢測(cè)大鼠體內(nèi)氯氮平及去甲氯氮平血藥濃度研究。2.辣椒素對(duì)大鼠體內(nèi)氯氮平藥代動(dòng)力學(xué)的影響與劑量有關(guān)。合用低劑量辣椒素對(duì)氯氮平的吸收、分布等過(guò)程無(wú)顯著影響。合用中、高劑量辣椒素后,氯氮平在吸收相和平衡相的藥時(shí)曲線下面積和峰濃度均顯著增加,總清除率顯著減小,同時(shí)去甲氯氮平體內(nèi)暴露量也有明顯增加的趨勢(shì)。3.合用中、高劑量辣椒素與合用氟伏沙明比較,氯氮平的平均血藥濃度-時(shí)間曲線的變化趨勢(shì)基本一致,代謝物去甲氯氮平與原形藥物氯氮平濃度的比值也比較接近。提示中、高劑量辣椒素對(duì)氯氮平主要代謝酶活性的影響可能與氟伏沙明對(duì)CYP1A2的影響作用相當(dāng)。而辣椒素對(duì)CYP1A2的作用還需進(jìn)一步深入研究。4.本實(shí)驗(yàn)推測(cè)辣椒素和氯氮平之間的食物-藥物相互作用可能主要是由于辣椒素能促進(jìn)氯氮平的吸收,提高了生物利用度;而辣椒素對(duì)氯氮平代謝過(guò)程的機(jī)制還尚難以明確。提示氯氮平臨床應(yīng)用中,應(yīng)當(dāng)注意飲食含辣椒素餐食時(shí)可能會(huì)影響療效或藥物不良反應(yīng),并應(yīng)密切監(jiān)測(cè)氯氮平的血藥濃度。
【圖文】：

2.1 色譜條件色譜柱：美國(guó) Agilent Eclipse plus C18（4.6 mm×100 mm，5 μm）；甲醇-水（75:25v/v，含 5 mmoL·L-1甲酸銨和 0.1%甲酸）流速：0.5 mL·min-1；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣體積：5 μL。2.2 質(zhì)譜條件質(zhì)譜條件：電噴霧電離源（ESI），正離子化，毛細(xì)管電壓 4000 V，噴霧氣壓力 45 PSI，干燥氣體流速 10 L·min-1，干燥氣體溫度 350 ℃。掃描方式為選擇性離子監(jiān)測(cè)，氯氮平 m/z 327.05→269.80，N-去甲基氯氮平 m/z 313.05→191.75碰撞能量 14 eV，裂解電壓 105 eV，四級(jí)桿捕捉時(shí)間 0.2 s；內(nèi)標(biāo)氯氮平-d8 m335.05→274.85，碰撞能量 14 eV，裂解電壓 105 eV，四級(jí)桿捕捉時(shí)間 0.2 s。見(jiàn)圖 1。

辣椒素對(duì)大鼠體內(nèi)氯氮平藥代動(dòng)力學(xué)的影響研究.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制.3.1 氯氮平及 N-去甲氯氮平分別稱取氯氮平、N-去甲氯氮平適量（雙份，1 份用于配制標(biāo)準(zhǔn)用于配制質(zhì)控），用電子微量移液器吸取適量甲醇溶解，即配制g·mL-1的氯氮平和 N-去甲氯氮平溶液，再用 50 %甲醇分別稀釋成相曲線及質(zhì)控（QC）工作液（另一份），制備過(guò)程見(jiàn)圖 2 和圖 3。甲氯氮平工作液各濃度 1:1 混合，得到混合液，混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液濃，10，40，，70，100 μg·mL-1；混合 QC 工作液濃度為 0.4，20，80
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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