【摘要】：達(dá)卡巴嗪(Dacarbazine,DTIC)是用于治療晚期黑色素瘤的經(jīng)典藥物,但是其治療效果并不理想。近年來(lái)DTIC聯(lián)合其他藥物如干擾素、抑瘤基因、蛋白等治療黑色素瘤的臨床研究正在進(jìn)行,并顯示出一定的效果。因此,為了DTIC的治療方案能夠得到進(jìn)一步擴(kuò)展,本研究將都具有抗黑色素瘤活性、且作用機(jī)制互補(bǔ)的經(jīng)典中藥有效組份青蒿素(Artemisinin,Art)與DTIC聯(lián)合應(yīng)用,并以脂質(zhì)體為載體,將二者制備成雙載脂質(zhì)體,以期產(chǎn)生較好的治療效果及其機(jī)制,為后期基于納米載體的聯(lián)合治療研究提供參考。實(shí)驗(yàn)方法:(1)MTT法考察經(jīng)Art和DTIC單獨(dú)處理和兩藥聯(lián)合處理后B16細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況。Gaddum模型和Chou-Talalay分析Art聯(lián)合DTIC協(xié)同作用時(shí)兩藥的比例。hoechst 33258染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法觀察Art、DTIC、Art聯(lián)合DTIC誘導(dǎo)B16細(xì)胞凋亡情況。(2)紫外分光光度法測(cè)定Art和DTIC在脂質(zhì)體混懸液中的藥物濃度,正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化Art-DTIC-LP制備處方。通過(guò)觀察脂質(zhì)體外觀、透射電鏡拍攝形態(tài)照片、粒度儀檢測(cè)粒徑和電位、測(cè)定包封率載藥量、穩(wěn)定性和釋放度試驗(yàn),對(duì)ArtDTIC-LP進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。(3)建立荷黑色素瘤B16小鼠腫瘤模型,觀察并比較各組小鼠經(jīng)藥物治療后體重和瘤重變化、生存情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論:(1)Art、DTIC作用B16細(xì)胞48 h時(shí)IC50值比例約為1:1。Gaddum模型公式計(jì)算得γ值小于1,Chou-Talalay分析得Art與DTIC聯(lián)用比例為1:1,1:2,2:1時(shí),協(xié)同指數(shù)CI值分別為0.58、0.70、0.78均小于1,提示兩藥聯(lián)用具有協(xié)同作用,且Art:DTIC濃度比為1:1時(shí)協(xié)同作用效果最佳。倒置熒光顯微鏡以及AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)Art和DTIC聯(lián)合處理后B16細(xì)胞的凋亡特征明顯強(qiáng)于ART和DTIC單獨(dú)給藥組。Art和DTIC聯(lián)合使用對(duì)B16細(xì)胞具有協(xié)同增殖抑制作用,且其作用機(jī)制可能是通過(guò)協(xié)同誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,當(dāng)Art與DTIC濃度比為1:1時(shí)協(xié)同作用效果最佳。(2)分別建立了Art、DTIC在脂質(zhì)體混懸液中藥物含量測(cè)定方法。采用薄膜超聲-硫酸銨梯度法制備Art-DTIC-LP,正交實(shí)驗(yàn)得到最佳制備方案為藥物與磷脂質(zhì)量比1:10、磷脂和膽固醇摩爾比3:2、磷脂濃度為30 mg/mL,Art和DTIC包封率分別為(92.15±0.95)%、(75.93±2.58)%,平均粒徑為(219.1±1.51)nm,Zeta電位為(-54.3±1.04)mV,多項(xiàng)分散系數(shù)(PDI)為0.342±0.02,于4℃條件保存兩周后穩(wěn)定性良好。(3)成功建立了荷黑色素瘤B16小鼠腫瘤模型,給藥后結(jié)果表明Art-DTIC溶液和Art-DTIC-LP混懸液與空白組比較對(duì)小鼠腫瘤有一定的治療效果,ArtDTIC-LP組小鼠腫瘤體積明顯低于其他組且小鼠中位生存期最長(zhǎng)為31天。
【圖文】：

B16細(xì)胞經(jīng)不同藥物處理后hoechst33258染色熒光顯微照片

AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測(cè)B16細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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