【摘要】：大腸屬于消化系統(tǒng)的下段,它在人體消化系統(tǒng)是一個(gè)重要的組成部分,對于維持人體內(nèi)正常的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定有重要作用。在人體中,大腸的作用是能夠進(jìn)一步吸收糞便中的水分和電解質(zhì)等。大腸的炎癥或損傷會(huì)影響人體健康,目前經(jīng)常出現(xiàn)的腸炎類型有結(jié)腸炎和直腸炎,這些疾病都對人體造成危害。MiR-149-3p是一種小分子RNA,它的主要作用是和目標(biāo)靶mRNA中的3' UTR或5' UTR結(jié)合,從而調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)翻譯以及mRNA的降解等作用。目前對于mRNA的研究越來越深入,更多的研究側(cè)重于microRNA與細(xì)胞信號(hào)通路結(jié)合,本實(shí)驗(yàn)中主要研究的是NF-κB信號(hào)通路。NF-κB信號(hào)通路是一種經(jīng)典的信號(hào)通路,已經(jīng)有許多研究發(fā)現(xiàn)NF-κB信號(hào)通路與多種炎癥和癌癥有密切的關(guān)系。在我們的研究中也發(fā)現(xiàn),miR-149-3p對腸炎的抑制作用與NF-κB信號(hào)通路密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中,我們主要通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)兩大部分對miR-149-3p在腸炎中的作用進(jìn)行研究。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,我們主要采用小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn),用DSS誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生腸炎,構(gòu)建出了小鼠腸炎模型,并取出其大腸組織,采用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測小鼠組織中炎癥因子的表達(dá)情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組小鼠與對照組相比,炎癥因子IL-2,IL-8,TNF-α,MCP-1的表達(dá)量均明顯上升,進(jìn)行HE染色后發(fā)現(xiàn),miR-149-3p-/-小鼠比WT野生型小鼠對DSS誘導(dǎo)的大腸炎癥損傷更加嚴(yán)重,更加敏感。此外我們測量了小鼠的表型特征,處理組中miR-149-3p-/-小鼠的大腸長度明顯短于WT野生型小鼠,miR-149-3p-/-DSS組小鼠的體重下降比例明顯高于野生型DSS組小鼠,也就是說miR-149-3p-/-小鼠對DSS誘導(dǎo)的腸炎更加敏感。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,我們采用人腸癌細(xì)胞caco2進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,實(shí)時(shí)定量PCR檢測細(xì)胞中炎癥因子的表達(dá),轉(zhuǎn)入miR-149-3p的處理組能夠抑制COX-2、iNOS、MCP-1、IP-10、IL-1α和TNF-α的表達(dá),加入TNF-α誘導(dǎo)后,這些基因的表達(dá)水平顯著降低。Western Blot實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),miR-149-3p可以抑制IκBα蛋白的磷酸化。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)表明,轉(zhuǎn)入miR-149-3p核酸模擬物后,能夠抑制NF-κB報(bào)告質(zhì)粒的活性。綜上可以得出結(jié)論,miR-149-3p可以通過抑制NF-κB信號(hào)通路抑制腸炎。
【圖文】：

圖３－１實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ逡逑注：圖３－２中，ＷＴ為野生型小鼠，ＫＯ為ｍｉＲ－ＭＭｐＶ？小鼠。逡逑ＷＴ野生型小鼠實(shí)驗(yàn)對照組與ＤＳＳ實(shí)驗(yàn)處理組比較，ｍｉＲ－１４９－３ｐ－／－小鼠實(shí)驗(yàn)逡逑對照組與ＤＳＳ實(shí)驗(yàn)處理組比較，ＩＬ－２，邋ＩＬ－８，邋ＴＮＦ－ｃｔ，邋ＭＣＰ－１均明顯上升，ＷＴ逡逑野生型小鼠的炎癥因子表達(dá)上升量沒有ｍｉＲ－ＭＷｐＶ？小鼠顯著，說明ｍｉＲ－１４９－３ｐ逡逑可以抑制ＮＦ－ｋＢ下游基因的表達(dá)。ＷＴ野生型小鼠與ｍｉＲ－１４９－３ｐｖ？小鼠相比，逡逑ｍｉＲ－Ｍｇｊｐ－７？小鼠的ＩＬ－２，ＩＬ－８，邋ＴＮＦ－ａ，ＭＣＰ－１這四種炎癥因子的表達(dá)量均上逡逑升，同樣地，再比較ＷＴ野生型小鼠ＤＳＳ處理組與ｍｉＲ－ＭＷｐ—？小鼠ＤＳＳ處理逡逑組，ｍｉＲ－１４９－３ｐｖ＿小鼠ＤＳＳ處理組的基因表達(dá)水平顯著升高，由此可說明ｍｉＲ－逡逑１４９－３ｐ對小鼠腸炎具有抑制作用

圖３－２小鼠體重稱量逡逑Ｆｉｇ．３－２邋Ｗｅｉｇｈｔ邋ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ逡逑注：圖３－２中，ＷＴ為野生型小鼠，ＫＯ為ｍｉＲ－ＭＷｐ－ｚ？小鼠。逡逑取出小鼠模型的大腸組織，并測量大腸的長度，我們發(fā)現(xiàn)ＤＳＳ實(shí)驗(yàn)處理組逡逑的大腸長度比實(shí)驗(yàn)對照組短，在實(shí)驗(yàn)處理組中，，ｎｉｉＲ－Ｍ＋ＳｐＶ？小鼠的大腸長度明逡逑顯短于ＷＴ野生型小鼠。如圖３－３。逡逑１．４邋－Ｉ逡逑ｌｌ．２邋－逡逑Ｉ：邐｜邐Ｉ逡逑ＩＩ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ逡逑ＷＴ邐＋邐＋邐－邐－逡逑Ｋ０邐＋邐＋逡逑ＤＳＳ邐－邐＋邐－邐＋逡逑圖３－３小鼠大腸長度測量逡逑Ｆｉｇ．３－３邋Ｍｏｕｓｅ邋ｃｏｌｏｎ邋ｌｅｎｇｔｈ邋ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ逡逑３３逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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1 丁醫(yī)峰;袁瓊瓊;侯一民;干安建;;細(xì)菌性腸炎的病原菌分布及藥敏分析[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2015年08期

2 朱云;張南征;江興松;馬文青;;成人真菌性腸炎的臨床特點(diǎn)及療效分析[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年05期

本文編號(hào)：2665828