【摘要】：目的:顱腦創(chuàng)傷(traumatic brain injury,TBI)是創(chuàng)傷中常見的病癥之一,統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明,TBI發(fā)病率位于各類創(chuàng)傷的首位,有著較高的病殘率和病死率,嚴(yán)重影響著人們的身體健康與生活質(zhì)量。而隨著社會(huì)交通的發(fā)展,TBI發(fā)病率也在逐年攀升。研究證明,TBI誘發(fā)的水腫、炎癥和氧化應(yīng)激等復(fù)雜的反應(yīng)會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞損傷。目前,在臨床中缺乏有效治療TBI的藥物。所以,繼續(xù)尋找開發(fā)出一種有效的藥物,并闡明其作用機(jī)制十分迫切。單核細(xì)胞遷移抑制因子(monocyte locomotion inhibitory factor,MLIF)是一種由溶組織阿米巴分泌的五肽,具有抗炎、抗氧化等藥理作用。本課題旨在研究MLIF對TBI的保護(hù)作用,并初步探討其作用機(jī)制。方法:1.MLIF對大鼠顱腦創(chuàng)傷的影響:(1)大鼠模型制備:采用液壓打擊法(打擊壓力:2.0 atm;打擊時(shí)程:20 ms)制備大鼠顱腦創(chuàng)傷模型。(2)動(dòng)物分組及給藥:大鼠分為假手術(shù)組、模型組、MLIF低劑量組(0.3mg/kg)、MLIF中劑量組(1mg/kg)、MLIF高劑量組(3mg/kg)。大鼠顱腦打擊后30min尾靜脈注射給藥,每24h給藥一次,大鼠連續(xù)給藥7天。(3)檢測指標(biāo):損傷后,各組于24h、3d、7d各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取大鼠血清檢測血清中SOD和MDA水平變化;取腦組織,利用干濕重法檢測腦含水量變化;利用HE染色、尼氏染色觀察腦組織病理改變;利用TUNEL染色檢測腦組織損傷24h細(xì)胞凋亡情況。利用免疫組化、免疫熒光檢測腦組織中AQP4表達(dá)情況;利用Real-time PCR檢測腦組織中IL-1β、IL-6及TNF-αmRNA水平的表達(dá);利用Western Blot檢測腦組織中AQP4、Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)變化。2.MLIF對小鼠顱腦創(chuàng)傷的影響:(1)動(dòng)物模型制備:采用落重法制備小鼠顱腦創(chuàng)傷模型(重量:20g;高度:50cm)。(2)動(dòng)物分組及給藥:小鼠分為假手術(shù)組、模型組、MLIF低劑量組(0.6mg/kg)、MLIF中劑量組(2mg/kg)、MLIF高劑量組(6mg/kg)。小鼠顱腦打擊后30min尾靜脈給藥,24h后取材。(3)檢測指標(biāo):造模后24h取小鼠腦組織利用干濕重法檢測腦含水量變化;利用HE染色、尼氏染色觀察腦組織病理改變。結(jié)果:1.采用液壓打擊制備大鼠顱腦創(chuàng)傷模型,打擊后30min大鼠分別給予MLIF:1mg/kg和3mg/kg,損傷24h后,MLIF組腦含水量均低于模型組,且MLIF(1mg/kg)組腦含水量明顯低于MLIF(3mg/kg)組。當(dāng)大鼠給予MLIF(1mg/kg),損傷24h和3d時(shí)間點(diǎn),與模型組相比,MLIF組腦含水量明顯降低(P0.05);HE染色和尼氏染色結(jié)果顯示,模型組大鼠腦組織病理損傷明顯,如水腫、細(xì)胞固縮等,而MLIF組大鼠腦組織病理損傷得到改善,如水腫程度降低、細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整等。損傷24h后,TUNEL染色結(jié)果顯示,較模型組,MLIF可以降低腦損傷導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。SOD和MDA結(jié)果顯示,與模型組相比,損傷24h和3d時(shí)間點(diǎn),MLIF能夠提高腦創(chuàng)傷后大鼠SOD活性(P0.01),同時(shí)降低MDA的含量(P0.05)。2.采用落重打擊制備小鼠顱腦創(chuàng)傷模型,打擊后30min小鼠給予MLIF,損傷24h后,與模型組相比,MLIF組腦含水量均低于模型組,且MLIF(2mg/kg)組腦含水量下降最為明顯(P0.05)。當(dāng)小鼠給予MLIF(2mg/kg),損傷24h后,HE染色和尼氏染色結(jié)果顯示,模型組小鼠腦組織出現(xiàn)水腫,病理損傷明顯,MLIF組小鼠腦組織水腫減輕,病理損傷得到改善。3.采用液壓打擊制備大鼠顱腦創(chuàng)傷模型,當(dāng)大鼠給予MLIF(1mg/kg),損傷在24h和3d時(shí)間點(diǎn),與模型組相比,給予MLIF后能夠明顯抑制大鼠腦組織中促炎癥因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的表達(dá)(P0.05)。AQP4免疫組化顯示,MLIF能夠減少AQP4蛋白的表達(dá)(P0.05)。4.采用液壓打擊制備大鼠顱腦創(chuàng)傷模型,大鼠給予MLIF(1mg/kg),在24h和3d時(shí)間點(diǎn),Western blot檢測大鼠腦組織中AQP4、Bax和Bcl-2表達(dá),與模型組相比,MLIF可以降低腦創(chuàng)傷大鼠腦組織中AQP4、Bax表達(dá)和升高Bcl-2表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:1.MLIF(1mg/kg)對大鼠顱腦創(chuàng)傷具有保護(hù)作用;MLIF(2mg/kg)對小鼠顱腦創(chuàng)傷具有保護(hù)作用。2.MLIF能夠抑制促炎癥因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的表達(dá),調(diào)節(jié)AQP4、Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)水平。MLIF發(fā)揮顱腦創(chuàng)傷后的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制可能與抑制炎癥因子表達(dá),抑制AQP4蛋白過表達(dá)及調(diào)節(jié)Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)水平有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 肖國民;;黃體酮對顱腦損傷神經(jīng)保護(hù)研究現(xiàn)狀[J];中華神經(jīng)外科雜志;2014年05期

2 楊璽;史忠;;顱腦創(chuàng)傷的藥物治療進(jìn)展[J];西部醫(yī)學(xué);2007年06期

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本文編號(hào)：2665650