【摘要】：目的:包含δ亞基的γ-氨基丁酸A型受體(δ-GABA_ARs,δ-subunit-containingγ-Aminobutyric acid type A receptors)位于突觸外膜,對神經(jīng)元興奮性有著持久的負性調(diào)控作用。有研究發(fā)現(xiàn),δ-GABA_ARs在脊髓背角神經(jīng)元中表達。外周神經(jīng)損傷引發(fā)脊髓δ-GABA_ARs的表達減少,使GABA能持久性抑制(tonic inhibition)減弱,構(gòu)成了中樞敏化的重要因素。中樞敏化不僅與神經(jīng)元興奮性有關(guān),還與突觸效能的持續(xù)增強密切相關(guān)。然而,δ-GABA_ARs是否調(diào)控突觸效能并不清楚,本研究將利用δ-GABA_ARs的特異性激動劑4,5,6,7-tetrahydroisoxazolo[5,4-c]pyridine-3-ol(THIP),探究脊髓背角的δ-GABA_ARs對痛覺突觸傳遞、突觸可塑性以及福爾馬林誘發(fā)疼痛的可能作用及其機制。方法:通過細胞外記錄脊髓背角初級傳入C纖維誘發(fā)的場電位,探究δ-GABA_ARs的激活對痛覺突觸傳遞和突觸可塑性的影響。利用后足皮下注射福爾馬林建立自發(fā)性疼痛模型,探究δ-GABA_ARs的激活對動物自發(fā)性疼痛及機械性痛覺過敏的影響。利用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blotting),探究δ-GABA_ARs調(diào)控福爾馬林誘發(fā)疼痛的可能分子機制。結(jié)果:(1)給正常大鼠脊髓背角滴加0.1-0.5μg THIP,可劑量依賴性地縮減C纖維誘發(fā)突觸反應(yīng)的面積(C反應(yīng)面積)。提示:THIP抑制脊髓背角痛覺突觸傳遞。(2)給脊髓滴加0.2μg THIP預(yù)處理1 h,顯著抑制LFS引起的C反應(yīng)面積的增大。提示:THIP抑制脊髓背角C纖維誘發(fā)電位LTP的產(chǎn)生。(3)在LFS誘發(fā)LTP 30 mins后,給脊髓滴加0.2μg THIP,可顯著抑制C反應(yīng)面積的增大,并且此效應(yīng)可維持至記錄結(jié)束。提示:THIP抑制脊髓背角誘發(fā)電位LTP的早期維持。(4)在LFS誘發(fā)LTP 3 h后,給脊髓背角滴加0.2μg THIP,也顯著抑制C反應(yīng)面積的增大。提示:THIP抑制脊髓背角誘發(fā)電位LTP的晚期維持。(5)足底注射50μl 2.5%福爾馬林可誘發(fā)出LTP。脊髓滴加0.2μg THIP預(yù)處理1 h則明顯抑制福爾馬林的這種效應(yīng)。提示:THIP可抑制福爾馬林誘發(fā)的LTP。(6)給大鼠鞘內(nèi)注射0.1-0.5μg THIP,30 mins后左足注射福爾馬林,不影響Ⅰ相反應(yīng)(0-15 mins),但可劑量依賴性地抑制Ⅱ相反應(yīng)(15-60 mins)。給小鼠注射0.01-0.2μg THIP也產(chǎn)生相同效應(yīng)。提示:THIP可有效抑制福爾馬林誘發(fā)的Ⅱ相自發(fā)性痛覺反應(yīng)。(7)給動物右后足足背皮下注射福爾馬林3天后,鞘內(nèi)注射THIP(0.1-0.5μg),顯著抑制250 m N Von Frey纖維引發(fā)的撤足現(xiàn)象,提示:THIP緩解福爾馬林所誘發(fā)的機械性痛覺過敏。(8)大鼠足底注射福爾馬林作用30 mins,顯著提高脊髓背角α-氨基-3-羥基-5-甲基-4異惡唑受體(AMPARs,α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid receptor)Glu A1亞基的突觸含量和第831位絲氨酸(Ser 831)的磷酸化水平,但顯著降低AMPARs Glu A2亞基的突觸含量;提前鞘內(nèi)注射THIP可顯著抑制福爾馬林的這些作用。提示:THIP激活δ-GABA_ARs后,抑制Glu A1-AMPARs的突觸表達并使突觸中的AMPARs由Glu A2缺乏型變成Glu A2富集型。(9)給大鼠足底注射福爾馬林作用30mins,可顯著提高N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDARs,N-methyl-D-aspartate receptor)亞基Glu N1的突觸含量和第896位絲氨酸(Ser 896)的磷酸化水平,而提前鞘內(nèi)注射THIP則顯著抑制福爾馬林的這種效應(yīng)。提示:THIP激活δ-GABA_ARs可抑制NMDARs的突觸表達。結(jié)論:脊髓中的δ-GABA_ARs對C纖維介導(dǎo)的痛覺突觸傳遞以及突觸可塑性起負性調(diào)控作用,其激活可有效減緩福爾馬林誘發(fā)的Ⅱ相自發(fā)性疼痛和機械性痛覺過敏。
【圖文】：

第三章 實驗結(jié)果 THIP 對脊髓背角痛覺突觸傳遞的影響為了驗證δ-GABAARs 是否調(diào)控痛覺突觸傳遞，給動物左側(cè)坐骨神經(jīng)測testing-stimuli：0.5-ms duration, 25V, 1-min interval），將記錄電極插輕物脊髓淺層 300 μm 左右，穩(wěn)定記錄 30 mins 基線，隨后在暴露的脊髓加人工模擬腦脊液（ACSF）作為空白對照組，記錄 3h。采集記錄圖形。結(jié)果顯示（圖 1）：滴加 ACSF 前后 C 反應(yīng)面積沒有發(fā)生任何顯著性變直到記錄結(jié)束�；�階段的 C 反應(yīng)面積是 100±1.8%，而滴加 ACSF ±3.1%，在整個記錄階段的 C 反應(yīng)面積僅有輕微幅度的波動。提示：AC正常的突觸傳遞。

大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 δ-GABAA受體對脊髓背角 LTP 及炎性疼痛的抑制作在穩(wěn)定記錄基線 30 mins 后，給脊髓背角滴加 0.1 μg 的 THIP。結(jié)果 2）：在滴加藥物后，C 反應(yīng)面積在第 30 mins 左右僅有輕微幅度的下這個下降僅持續(xù)了 10 mins 后就開始回升，約在第 60 mins 左右，，恢復(fù)水平。經(jīng)統(tǒng)計：0.1 μg THIP 組的 C 反應(yīng)面積是 103.8±6.8% ，與 ACSF 應(yīng)面積 102±3.1% 相比沒有任何顯著性變化（p > 0.05）。提示：0.1 μIP 不影響痛覺突觸傳遞。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R965

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 崔存德;;刺激藍斑對脊髓背角痛敏單位放電的影響[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1987年03期

2 方宗仁;李麗娜;;電針鎮(zhèn)痛和脊髓P物質(zhì)的關(guān)系[J];中國針灸;1988年01期

3 王希濤;吳景蘭;;電針及納洛酮阻斷電針鎮(zhèn)痛對豚鼠腎上腺和脊髓腦啡肽樣物質(zhì)影響的免疫組化觀察[J];針刺研究;1988年03期

4 劉慶瑩;朱長庚;劉漢濤;盧金活;;脊髓背角5-羥色胺纖維的來源和超微結(jié)構(gòu)分布——HRP與免疫細胞化學(xué)結(jié)合法研究和免疫電鏡觀察[J];解剖學(xué)報;1988年04期

5 吳葆孫;江豚(Neophocaena phocaenoides)脊髓的研究[J];獸類學(xué)報;1989年01期

6 周敬修;黃登凱;李寬[M;田啟;陸世鐸;笪翠娣;盧毓青;;向脊髓下行性投射的細胞起源[J];針刺研究;1989年Z1期

7 施靜;艾民康;關(guān)新民;;電針對脊髓背角內(nèi)ACh代謝的影響[J];針刺研究;1989年Z1期

8 崔存德;張虹;張慧;邱承海;;脊髓背角單位放電的記錄及其計算機處理方法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1989年02期

9 張?zhí)煜?張建身;牛漢璋;;脊髓背角會聚神經(jīng)元與痛覺的調(diào)制[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1989年04期

10 王嘉琪;王圣明;嚴育東;孔牧;羅世城;楊靜;戴春秋;楊雁靈;王亞云;;脊髓背角Ⅰ-Ⅲ層疼痛神經(jīng)環(huán)路的研究進展[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2017年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李云慶;馮宇鵬;;神經(jīng)加壓素在脊髓背角參與鎮(zhèn)痛的機制[A];中國解剖學(xué)會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

2 胡能偉;楊紅衛(wèi);胡曉東;張紅梅;張彤;劉先國;;脊髓背角C~-纖維誘發(fā)電位LTP表達機制的初步研究[A];中國生理學(xué)會第21屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

3 吳江;上官守琴;胡祁生;;嗎啡減弱電刺激誘發(fā)大鼠脊髓背角長時程電位[A];湖北省生理學(xué)會2007年度年會暨學(xué)術(shù)報告會論文集[C];2007年

4 信文君;劉先國;胡能偉;楊紅衛(wèi);周利君;張彤;;離子型谷氨酸受體在脊髓背角LTP誘導(dǎo)和維持中的作用[A];中南地區(qū)第六屆生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

5 張紅梅;胡能偉;楊紅衛(wèi);劉先國;;脊髓背角C-纖維誘發(fā)電位LTP的產(chǎn)生和維持機制的研究[A];中國生理學(xué)會張錫鈞基金會第八屆全國青年優(yōu)秀生理學(xué)學(xué)術(shù)論文綜合摘要[C];2003年

6 胡曉東;劉先國;張紅梅;楊紅衛(wèi);周利君;張彤;;抑制酪氨酸蛋白激酶可減弱切斷坐骨神經(jīng)大鼠脊髓背角A纖維誘發(fā)的興奮性突觸后電流[A];中南地區(qū)第六屆生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

7 李云慶;張華;郭軍;吳利平;王文;;中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)-延髓吻段腹側(cè)區(qū)-脊髓背角間接神經(jīng)加壓素能通路的形態(tài)學(xué)證明[A];中國解剖學(xué)會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

8 劉風(fēng)雨;邢國剛;徐Ym;韓濟生;萬有;;5-羥色胺受體亞型調(diào)節(jié)大鼠脊髓背角廣動力范圍神經(jīng)元C串放電的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會第六屆年會論文摘要[C];2005年

9 周利君;鐘yN;任文杰;劉先國;;BDNF對脊髓背角C-纖維誘發(fā)電位的影響及其機制的探討[A];中國生理學(xué)會張錫鈞基金會第十屆全國青年優(yōu)秀生理學(xué)學(xué)術(shù)論文綜合摘要[C];2009年

10 李云慶;;內(nèi)嗎啡肽在脊髓背角通過突觸前機制發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用[A];中華醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會第八屆年會暨CASP成立二十周年論文集[C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 袁維秀;氯胺酮治療慢性神經(jīng)源性疼痛作用機制的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2004年

2 張習(xí)春;脊髓痛覺可塑性的一氧化氮信號通路[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

3 何農(nóng);N-甲基-D-天門冬氨酸[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

4 徐峰;大鼠脊髓NMDA受體NR2B參與炎性痛的機理研究[D];蘇州大學(xué);2006年

5 梁U

本文編號：2664976