發(fā)布時(shí)間：2020-05-15 11:44

【摘要】：目的:包含δ亞基的γ-氨基丁酸A型受體(δ-GABA_ARs,δ-subunit-containingγ-Aminobutyric acid type A receptors)位于突觸外膜,對(duì)神經(jīng)元興奮性有著持久的負(fù)性調(diào)控作用。有研究發(fā)現(xiàn),δ-GABA_ARs在脊髓背角神經(jīng)元中表達(dá)。外周神經(jīng)損傷引發(fā)脊髓δ-GABA_ARs的表達(dá)減少,使GABA能持久性抑制(tonic inhibition)減弱,構(gòu)成了中樞敏化的重要因素。中樞敏化不僅與神經(jīng)元興奮性有關(guān),還與突觸效能的持續(xù)增強(qiáng)密切相關(guān)。然而,δ-GABA_ARs是否調(diào)控突觸效能并不清楚,本研究將利用δ-GABA_ARs的特異性激動(dòng)劑4,5,6,7-tetrahydroisoxazolo[5,4-c]pyridine-3-ol(THIP),探究脊髓背角的δ-GABA_ARs對(duì)痛覺(jué)突觸傳遞、突觸可塑性以及福爾馬林誘發(fā)疼痛的可能作用及其機(jī)制。方法:通過(guò)細(xì)胞外記錄脊髓背角初級(jí)傳入C纖維誘發(fā)的場(chǎng)電位,探究δ-GABA_ARs的激活對(duì)痛覺(jué)突觸傳遞和突觸可塑性的影響。利用后足皮下注射福爾馬林建立自發(fā)性疼痛模型,探究δ-GABA_ARs的激活對(duì)動(dòng)物自發(fā)性疼痛及機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏的影響。利用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blotting),探究δ-GABA_ARs調(diào)控福爾馬林誘發(fā)疼痛的可能分子機(jī)制。結(jié)果:(1)給正常大鼠脊髓背角滴加0.1-0.5μg THIP,可劑量依賴性地縮減C纖維誘發(fā)突觸反應(yīng)的面積(C反應(yīng)面積)。提示:THIP抑制脊髓背角痛覺(jué)突觸傳遞。(2)給脊髓滴加0.2μg THIP預(yù)處理1 h,顯著抑制LFS引起的C反應(yīng)面積的增大。提示:THIP抑制脊髓背角C纖維誘發(fā)電位LTP的產(chǎn)生。(3)在LFS誘發(fā)LTP 30 mins后,給脊髓滴加0.2μg THIP,可顯著抑制C反應(yīng)面積的增大,并且此效應(yīng)可維持至記錄結(jié)束。提示:THIP抑制脊髓背角誘發(fā)電位LTP的早期維持。(4)在LFS誘發(fā)LTP 3 h后,給脊髓背角滴加0.2μg THIP,也顯著抑制C反應(yīng)面積的增大。提示:THIP抑制脊髓背角誘發(fā)電位LTP的晚期維持。(5)足底注射50μl 2.5%福爾馬林可誘發(fā)出LTP。脊髓滴加0.2μg THIP預(yù)處理1 h則明顯抑制福爾馬林的這種效應(yīng)。提示:THIP可抑制福爾馬林誘發(fā)的LTP。(6)給大鼠鞘內(nèi)注射0.1-0.5μg THIP,30 mins后左足注射福爾馬林,不影響Ⅰ相反應(yīng)(0-15 mins),但可劑量依賴性地抑制Ⅱ相反應(yīng)(15-60 mins)。給小鼠注射0.01-0.2μg THIP也產(chǎn)生相同效應(yīng)。提示:THIP可有效抑制福爾馬林誘發(fā)的Ⅱ相自發(fā)性痛覺(jué)反應(yīng)。(7)給動(dòng)物右后足足背皮下注射福爾馬林3天后,鞘內(nèi)注射THIP(0.1-0.5μg),顯著抑制250 m N Von Frey纖維引發(fā)的撤足現(xiàn)象,提示:THIP緩解福爾馬林所誘發(fā)的機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏。(8)大鼠足底注射福爾馬林作用30 mins,顯著提高脊髓背角α-氨基-3-羥基-5-甲基-4異惡唑受體(AMPARs,α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid receptor)Glu A1亞基的突觸含量和第831位絲氨酸(Ser 831)的磷酸化水平,但顯著降低AMPARs Glu A2亞基的突觸含量;提前鞘內(nèi)注射THIP可顯著抑制福爾馬林的這些作用。提示:THIP激活δ-GABA_ARs后,抑制Glu A1-AMPARs的突觸表達(dá)并使突觸中的AMPARs由Glu A2缺乏型變成Glu A2富集型。(9)給大鼠足底注射福爾馬林作用30mins,可顯著提高N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDARs,N-methyl-D-aspartate receptor)亞基Glu N1的突觸含量和第896位絲氨酸(Ser 896)的磷酸化水平,而提前鞘內(nèi)注射THIP則顯著抑制福爾馬林的這種效應(yīng)。提示:THIP激活δ-GABA_ARs可抑制NMDARs的突觸表達(dá)。結(jié)論:脊髓中的δ-GABA_ARs對(duì)C纖維介導(dǎo)的痛覺(jué)突觸傳遞以及突觸可塑性起負(fù)性調(diào)控作用,其激活可有效減緩福爾馬林誘發(fā)的Ⅱ相自發(fā)性疼痛和機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏。
【圖文】：

第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 THIP 對(duì)脊髓背角痛覺(jué)突觸傳遞的影響為了驗(yàn)證δ-GABAARs 是否調(diào)控痛覺(jué)突觸傳遞，給動(dòng)物左側(cè)坐骨神經(jīng)測(cè)testing-stimuli：0.5-ms duration, 25V, 1-min interval），將記錄電極插輕物脊髓淺層 300 μm 左右，穩(wěn)定記錄 30 mins 基線，隨后在暴露的脊髓加人工模擬腦脊液（ACSF）作為空白對(duì)照組，記錄 3h。采集記錄圖形。結(jié)果顯示（圖 1）：滴加 ACSF 前后 C 反應(yīng)面積沒(méi)有發(fā)生任何顯著性變直到記錄結(jié)束�；�階段的 C 反應(yīng)面積是 100±1.8%，而滴加 ACSF ±3.1%，在整個(gè)記錄階段的 C 反應(yīng)面積僅有輕微幅度的波動(dòng)。提示：AC正常的突觸傳遞。

大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 δ-GABAA受體對(duì)脊髓背角 LTP 及炎性疼痛的抑制作在穩(wěn)定記錄基線 30 mins 后，給脊髓背角滴加 0.1 μg 的 THIP。結(jié)果 2）：在滴加藥物后，C 反應(yīng)面積在第 30 mins 左右僅有輕微幅度的下這個(gè)下降僅持續(xù)了 10 mins 后就開(kāi)始回升，約在第 60 mins 左右，，恢復(fù)水平。經(jīng)統(tǒng)計(jì)：0.1 μg THIP 組的 C 反應(yīng)面積是 103.8±6.8% ，與 ACSF 應(yīng)面積 102±3.1% 相比沒(méi)有任何顯著性變化（p > 0.05）。提示：0.1 μIP 不影響痛覺(jué)突觸傳遞。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965

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5 梁U

本文編號(hào)：2664976