【摘要】：腦膠質(zhì)瘤起源于神經(jīng)膠質(zhì)細胞,具有高侵襲性、預后差、致死率高等特點。常用的治療腦膠質(zhì)瘤的方法有手術(shù)切除、射線治療和藥物化療。但是在腫瘤放化療過程中,由于射線不敏感性,單一治療模式的局限性,由血腦屏障造成的藥物低滲透性、以及化療藥物的毒副作用等,導致治療效果不理想。采用納米載體系統(tǒng),同時包載放療增敏劑與化療藥物,制備一種能同時實現(xiàn)膠質(zhì)瘤靶向治療、靶向部位觸發(fā)釋藥、同步放化療的多功能納米載體,作為一種新型治療策略,是解決該問題的重要策略之一。本課題首次探討了四氫姜黃素(Tetrahydrocurcumin,THC)對腦膠質(zhì)瘤細胞的放療增敏作用及其作用機制。采用MTT實驗檢測THC對C6和U251細胞增殖的影響;分別采用克隆實驗、劃痕法、流式細胞術(shù)檢測THC結(jié)合射線對C6膠質(zhì)瘤細胞射線敏感性、細胞遷移、細胞凋亡以及胞內(nèi)周期分布的影響;微板酶標法檢測給予不同處理后C6細胞還原型谷胱甘肽(GSH)的表達水平;免疫細胞化學染色和Western blot分別檢測膠質(zhì)瘤細胞內(nèi)增殖細胞核抗原(PCNA)和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表達含量。結(jié)果顯示,四氫姜黃素通過增強射線對C6細胞原發(fā)性損傷,抑制胞內(nèi)GSH的表達,誘導細胞發(fā)生G0/G1期阻滯來實現(xiàn)放療增敏作用。在上述研究基礎(chǔ)上,以聚乙二醇-聚乳酸-聚乙醇酸(Poly(ethyleneglycol)-poly(lactic-co-glycolic acid),PEG-PLGA)為基礎(chǔ)載體材料,以碳酸氫鈉(NaHCO3)為產(chǎn)氣介質(zhì),以轉(zhuǎn)鐵蛋白為靶向修飾基團,采用W/O/W兩步乳化蒸發(fā)法制備轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin,Tf)修飾的共載四氫姜黃素(Tetrahydrocurcumin,THC)和阿霉素(Doxorubicin,DOX)的多功能納米遞送系(Tf-NPs-DOX-THC);分別考察有機溶劑、投藥量、共聚物用量等因素對納米制劑載藥量及包封率的影響,篩選優(yōu)化處方;于透射電鏡下觀察納米制劑的微觀形態(tài);采用DLS激光散射粒度分析儀檢測納米粒的粒徑和Zeta電位;透析袋法測定藥物釋放;MTT比色法評價不同制劑組對C6細胞的增殖抑制作用以及材料的細胞安全性;熒光倒置相差顯微鏡下觀察MCF-7細胞和C6細胞對游離DOX和轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向納米制劑的攝取情況;應(yīng)用小動物活體成像儀定性觀察載藥納米制劑在不同組織器官的分布;分別構(gòu)建皮下膠質(zhì)瘤模型和原位膠質(zhì)瘤模型評估了納米制劑聯(lián)合X射線(Radiation,RAD)的體內(nèi)抑瘤效果。結(jié)果顯示,當投藥量為1mg,共聚物用量為15mg,有機溶劑為二氯甲烷時,得最優(yōu)處方。納米制劑外觀圓整,粒徑分布均在250nm左右,載藥量為6.71%,表面帶負電荷;藥物釋放呈現(xiàn)pH依賴性;載體材料對腫瘤細胞無明顯毒副作用,不同制劑組在C6細胞中均表現(xiàn)出劑量時間依賴的細胞毒性,且Tf-NPs-DOX-THC制劑組的細胞毒性顯著高于其他制劑組;轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的靶向納米制劑組(Tf-NPs)的細胞熒光強度明顯高于非靶向納米制劑組(NPs);Tf-NPs組通過轉(zhuǎn)鐵蛋白受體介導的主動靶向作用提高了藥物在腦中的分布聚集,改善了體內(nèi)分布;在皮下瘤和原位瘤模型中,Tf-NPs-DOX-THC+RAD治療組呈現(xiàn)出最為顯著的抑瘤效果,且無明顯毒副作用;上述結(jié)果表明,轉(zhuǎn)鐵蛋白介導的pH響應(yīng)的多功能納米制劑在體內(nèi)外腦膠質(zhì)瘤模型中均呈現(xiàn)良好的治療效果。
【圖文】：

３．１課題設(shè)計及研究意義逡逑本課題首次探討ＴＨＣ對膠質(zhì)瘤細胞的放射增敏作用及機制，在此基礎(chǔ)之上，逡逑構(gòu)建多功能納米載體用于改善膠質(zhì)瘤的放化療效果（圖３），，實現(xiàn)放射增敏劑四逡逑氫姜黃素和化療藥物阿霉素的共遞送，同時，通過以碳酸氫鈉為ｐＨ敏感材料，逡逑以轉(zhuǎn)鐵蛋白為靶向基團，改善藥物體內(nèi)分布、提高藥物靶向蓄積、控制藥物釋放，逡逑實現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤的同步放化療。逡逑１４逡逑

邐＾邐山東大學碩士學位論文邐逡逑（１邋）按上述常規(guī)操作培養(yǎng)Ｃ６和Ｕ２５１細胞；逡逑（２）將Ｃ６腦膠質(zhì)瘤細胞以每孔５０００個細胞的密度接種于９６孔板，過夜孵育逡逑使細胞貼壁；逡逑（３）給藥刺激：向細胞中加入１００ｐＬ系列濃度（３、２７、５４、８１、１０７、１６１邋ｐＭ）逡逑的ＴＨＣ的ＤＭＳＯ溶液，將９６孔板繼續(xù)置于培養(yǎng)箱中分別孵育１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、逡逑７２ｈ；逡逑（４）藥物孵育后，向％孔板每孔加入２０隊濃度為５ｍｇ／ｍＬ的ＭＴＴ溶液，繼逡逑續(xù)置于培養(yǎng)箱中孵育４ｈ；逡逑（５）取出培養(yǎng)板，吸去上清液，每孔精密加入１５０卩ＬＤＭＳＯ，搖床避光充分振逡逑蕩，然后于５７０ｎｍ波長處測定各孔的吸光度（ＯＤ），計算細胞存活率。逡逑Ｃ６邐Ｕ２５１逡逑
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R943;R96

【參考文獻】

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本文編號：2664971