【摘要】：癌癥即惡性腫瘤,涉及到100多種疾病,全世界每分鐘有5人會(huì)死于癌癥,并且癌癥患者通常會(huì)有疲勞的發(fā)生。目前治療癌癥的主要方式仍是放療和化療,但是放化療會(huì)產(chǎn)生明顯的副作用,尤其是對(duì)血細(xì)胞和造血組織的破壞性對(duì)其有效性和廣泛應(yīng)用具有嚴(yán)重的限制。因此尋找對(duì)造血功能具有保護(hù)作用的治療劑、有益于患者放化療后的愈后的藥物意義重大。小牛脾提取物注射液(Calf spleen extractive injection,CSEI)是從出生24 h之內(nèi)的健康小牛脾臟中提取制備而成的小分子多肽富集物,CSEI的藥理作用基礎(chǔ)為激活機(jī)體非特異性免疫,刺激骨髓干細(xì)胞的增殖和提升造血功能。研究表明,CSEI在臨床上大約有40%被用于改善癌癥的治療,它能夠減輕放化療引起的患者骨髓抑制現(xiàn)象,增強(qiáng)患者體力,提升患者的生活質(zhì)量。本論文采用多種生物學(xué)方法對(duì)CSEI的抗疲勞活性及其促進(jìn)造血功能進(jìn)行研究,并系統(tǒng)的闡述CSEI保護(hù)造血功能的作用機(jī)制。研究?jī)?nèi)容如下:1.CSEI抗疲勞活性及其初步機(jī)制研究采用健康Balb/c小鼠,進(jìn)行小鼠運(yùn)動(dòng)耐力試驗(yàn),檢測(cè)運(yùn)動(dòng)后小鼠血漿中疲勞和氧化應(yīng)激相關(guān)生化指標(biāo)以及激素水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn):腹腔給藥21天后,CSEI能夠顯著提高小鼠的跑步和負(fù)重游泳時(shí)間,提高小鼠的疲勞轉(zhuǎn)棒時(shí)間;CSEI能夠同時(shí)降低血漿、肝臟和肌肉中的LD含量,降低肝臟和肌肉中的LDH含量,提高肝糖原和肌糖原含量;另外,CSEI能夠提高小鼠血漿、肝臟、肌肉中的SOD和GSH-Px的水平,降低肝臟和肌肉中的ROS水平,調(diào)節(jié)血漿中激素睪酮、雌二醇和皮質(zhì)醇的水平。因此得出結(jié)論CSEI具有抗疲勞活性,可能是通過(guò)抗氧化和調(diào)節(jié)體內(nèi)激素水平實(shí)現(xiàn)的。2.CSEI體外促進(jìn)造血功能研究為了初步研究CSEI的提升造血功能,選取K562和CHRF兩種造血模型細(xì)胞,分別對(duì)細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分化以及與造血功能相關(guān)蛋白的表達(dá)進(jìn)行研究,結(jié)果表明CSEI能夠促進(jìn)K562和CHRF細(xì)胞的增殖,但是不會(huì)誘導(dǎo)這兩種細(xì)胞的凋亡;CSEI能夠誘導(dǎo)K562向紅細(xì)胞的分化;CSEI能夠促進(jìn)兩種造血模型細(xì)胞中與造血細(xì)胞增殖及功能相關(guān)蛋白P-RSK1p90、ELK1、c-Myc蛋白的表達(dá)水平;同時(shí),CSEI促進(jìn)了兩種細(xì)胞中分化和成熟相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子GATA-1和GATA-2蛋白的表達(dá)水平,說(shuō)明CSEI促進(jìn)造血細(xì)胞功能的作用可能是通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。3.CSEI對(duì)造血功能低下小鼠的保護(hù)作用及機(jī)制研究為了進(jìn)一步探究CSEI對(duì)造血功能的提升作用,采用環(huán)磷酰胺(CTX)建立造血功能低下小鼠模型,在體內(nèi)研究CSEI對(duì)造血功能的提升作用及其可能的作用機(jī)制,再在原代培養(yǎng)的骨髓單核細(xì)胞(BMNCs)中對(duì)其可能的機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證,結(jié)果表明:在造血功能低下小鼠中,CSEI作用3周后,能夠提升小鼠體重和胸腺指數(shù),抑制小鼠脾臟的腫大;CSEI能夠顯著提高小鼠骨髓中造血干/祖細(xì)胞(HSC/HPCs)數(shù)量,提高B淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞比例,提升小鼠骨髓細(xì)胞密度,調(diào)節(jié)外周血細(xì)胞表達(dá);抗體芯片結(jié)合ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CSEI能夠調(diào)節(jié)脾臟和血漿中細(xì)胞因子的表達(dá),尤其是G-CSF及其相關(guān)因子;另外,CSEI能夠激活小鼠脾臟中及原代培養(yǎng)的BMNCs中G-CSF及其下游STAT3的磷酸化。得出結(jié)論:CSEI通過(guò)G-CSF介導(dǎo)的JAK2/STAT3信號(hào)通路改善小鼠的造血功能。綜上所述,CSEI具有抗疲勞作用,并且是一種安全有效的提升造血功能藥物,它能夠通過(guò)G-CSF介導(dǎo)的JAK2/STAT3信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)對(duì)造血功能的促進(jìn)作用。本研究為CSEI抗疲勞及在臨床上作為癌癥放化療的輔助用藥以及其他造血功能不足等癥狀提供藥理學(xué)基礎(chǔ)。
【圖文】：

ＵｌＵ逡逑ＣＴＲＬ邋＿＿0邋２４邋＿邐２．２５邐４．５０邐９．００逡逑Ｔａ１（ｍｇ／ｋｇ）邐ＣＳＥＩ（ｍｇ／ｋｇ）逡逑圖２．１邋ＣＳＥＩ對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．１邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＣＳＥＩ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ邋ａｃｔｉｖｉｔｙ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ．逡逑２．５．１．２邐ＣＳＥＩ對(duì)小鼠跑步時(shí)間的影響逡逑１００邋ｒ逡逑★★★逡逑８０邋－邐Ｉ逡逑ＣＯ邐＊＊逡逑ｆ：ｌｉｉｉｉｌ逡逑ＣＴＲＬ邋＿邋0邋？４邐２２５邐４．５０邐９．００逡逑Ｔａ１（ｍｇ／ｋｇ）邐ＣＳＥＩ（ｍｇ／ｋｇ）逡逑圖２．２邋ＣＳＥＩ對(duì)小鼠跑步時(shí)間的影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＣＳＥＩ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｒｕｎｎｉｎｇ邋ｔｉｍｅ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ．邋＊邋＾＜０．０５，邋＊＊邋＾＜０．０１邋ａｎｄ逡逑＊＊＊邋／＞＜0邋00！邋ｖｅｒｓｕｓ邋ＣＴＲＬ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑小鼠結(jié)束給藥后，通過(guò)跑步實(shí)驗(yàn)初步研宄ＣＳＥＩ對(duì)小鼠抗疲勞活性的影響，跑步逡逑時(shí)間結(jié)果見(jiàn)圖２．２。由圖２．２可知，Ｔａｌ和ＣＳＥＩ低、中、高劑量組均能夠顯著的提高逡逑小鼠的跑步時(shí)間（Ｐ＜０．０５），并且ＣＳＥＩ對(duì)跑步時(shí)間的提高作用呈現(xiàn)出劑量依賴性，逡逑其中與空白組相比，ＣＳＥＩ高劑量組提高了邋１２４．５％，，初步說(shuō)明ＣＳＥＩ和Ｔａｌ對(duì)小鼠具逡逑有抗疲勞的活性。逡逑２．５．１．３邐ＣＳＥＩ對(duì)小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間的影響逡逑１３逡逑

Ｔａ１（ｍｇ／ｋｇ）邐ＣＳＥＩ（ｍｇ／ｋｇ）逡逑圖２．２邋ＣＳＥＩ對(duì)小鼠跑步時(shí)間的影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＣＳＥＩ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｒｕｎｎｉｎｇ邋ｔｉｍｅ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ．邋＊邋＾＜０．０５，邋＊＊邋＾＜０．０１邋ａｎｄ逡逑＊＊＊邋／＞＜0邋00！邋ｖｅｒｓｕｓ邋ＣＴＲＬ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑小鼠結(jié)束給藥后，通過(guò)跑步實(shí)驗(yàn)初步研宄ＣＳＥＩ對(duì)小鼠抗疲勞活性的影響，跑步逡逑時(shí)間結(jié)果見(jiàn)圖２．２。由圖２．２可知，Ｔａｌ和ＣＳＥＩ低、中、高劑量組均能夠顯著的提高逡逑小鼠的跑步時(shí)間（Ｐ＜０．０５），并且ＣＳＥＩ對(duì)跑步時(shí)間的提高作用呈現(xiàn)出劑量依賴性，逡逑其中與空白組相比，ＣＳＥＩ高劑量組提高了邋１２４．５％，初步說(shuō)明ＣＳＥＩ和Ｔａｌ對(duì)小鼠具逡逑有抗疲勞的活性。逡逑２．５．１．３邐ＣＳＥＩ對(duì)小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間的影響逡逑１３逡逑
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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1 黃媚賢;劉文君;;HOX基因A簇對(duì)造血干/祖細(xì)胞增殖分化的影響及其與白血病的關(guān)系[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2009年03期

2 羅琳,劉文勵(lì);骨髓微環(huán)境造血調(diào)控的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);2004年02期

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1 賈東旭;小牛脾提取物注射液抗肝癌和免疫調(diào)節(jié)作用的研究[D];吉林大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2657614