【摘要】：葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)在多種腫瘤細(xì)胞中特異性高表達(dá),高表達(dá)的GRP78在腫瘤細(xì)胞中具有定位多樣性,且具有多樣化的促癌效應(yīng)。值得注意的是,GRP78不但可以定位于胞內(nèi),還可通過(guò)外泌體途徑被腫瘤細(xì)胞分泌到腫瘤微環(huán)境中,從而發(fā)揮促腫瘤作用。因此尋找能夠阻斷GRP78分泌的小分子抑制劑,將提高化療藥物的抗癌效率,為癌癥治療打開新的突破口。為了發(fā)現(xiàn)GRP78分泌的潛在抑制劑,我們將從以下幾個(gè)方面進(jìn)行研究:1.通過(guò)檢測(cè)多種結(jié)腸癌細(xì)胞系及正常腸上皮細(xì)胞的培養(yǎng)基中GRP78的含量,發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌細(xì)胞能特異性分泌GRP78,且結(jié)腸癌細(xì)胞系中DLD1分泌的GRP78含量較高,而HCT-116分泌的GRP78相對(duì)較少。而將GRP78的K633位點(diǎn)突變?yōu)楣劝滨０泛?腸癌細(xì)胞的GRP78分泌量明顯降低,表明K633位點(diǎn)對(duì)GRP78的分泌具有重要作用。此外,通過(guò)細(xì)胞共培養(yǎng)模型發(fā)現(xiàn),GRP78的分泌能促進(jìn)HUVEC細(xì)胞的血管生成能力。表明分泌型GRP78在微環(huán)境中能發(fā)揮促腫瘤相關(guān)血管生成的作用。2.運(yùn)用虛擬篩選及分子對(duì)接等技術(shù)在虛擬平臺(tái)創(chuàng)建多種小分子的藥物結(jié)構(gòu)與GRP78蛋白結(jié)構(gòu)間三維水平的相互作用模型,從而在51種中藥分子中發(fā)現(xiàn)了5種與GRP78相互作用力較強(qiáng)且結(jié)合方式多樣化的小分子。這5種中藥小分子分別是:丹酚酸A(Salvianolic acid A,SAA)、柚皮苷(Naringin)、桔梗皂苷D(Platycodin D)、地奧司明(Diosmin)和異牡荊素(Isovitexin)。3.通過(guò)使用蛋白免疫印跡在細(xì)胞水平的驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)丹酚酸A能夠有效抑制GRP78的分泌。此外,小分子與蛋白相互作用的研究揭示SAA可與GRP78的633位的賴氨酸殘基(K633)發(fā)生相互作用,且具有極強(qiáng)的親和力,從而發(fā)揮其抑制GRP78分泌的效應(yīng)。研究還發(fā)現(xiàn)丹酚酸A能夠通過(guò)阻斷GRP78的分泌干預(yù)腫瘤相關(guān)血管生成。4.研究發(fā)現(xiàn)SAA-GRP78復(fù)合物的形成,能夠促進(jìn)細(xì)胞溶質(zhì)中GRP78分選進(jìn)入溶酶體降解途徑而不是被外泌體分泌。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,丹酚酸A能降低瘤體內(nèi)VEGF表達(dá)量,抑制瘤塊生長(zhǎng),即丹酚酸A通過(guò)改善腫瘤微環(huán)境發(fā)揮抑癌作用。
【圖文】：

Figure 1.1 The tumor microenvironment at a glance1.1.2 腫瘤微環(huán)境在腫瘤發(fā)展中的作用生物體內(nèi)細(xì)胞與其微環(huán)境間的通訊機(jī)制對(duì)維持組織穩(wěn)態(tài)是至關(guān)重要的。此外，在實(shí)體瘤內(nèi)腫瘤細(xì)胞和相關(guān)基質(zhì)之間的相互作用影響著疾病發(fā)生、進(jìn)展和患者預(yù)后的強(qiáng)大網(wǎng)絡(luò)關(guān)系[19]。例如，在癌癥發(fā)展進(jìn)程中，癌細(xì)胞必須與攜帶膠原，透明質(zhì)酸（HA）和腫瘤促進(jìn)因子的ECM形成附著。腫瘤細(xì)胞和TME間的作用方式主要分為兩大類：接觸依賴性機(jī)制和非接觸依賴性機(jī)制，在非接觸依賴性機(jī)制中，可溶性分子如生長(zhǎng)因子，趨化因子和細(xì)胞因子和可溶性亞細(xì)胞器，包括微泡和外泌體，它們相互作用并通過(guò)旁分泌機(jī)制激活。腫瘤微環(huán)境通過(guò)連續(xù)的旁分泌通訊和基質(zhì)細(xì)胞與癌細(xì)胞同時(shí)進(jìn)入活化狀態(tài)，形成動(dòng)態(tài)信號(hào)回路，其中多種分子協(xié)同促進(jìn)腫瘤擴(kuò)張和侵襲，最終導(dǎo)致惡性進(jìn)程[20, 21]。在腫瘤免疫逃逸方面，腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞不僅失去了抗腫瘤效應(yīng)，反而還被用于促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。例如，存在于腫瘤微環(huán)境中的巨噬細(xì)胞被稱為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，它被重新編程通過(guò)釋放抑制性細(xì)胞因子，如 IL-10、前列腺素或活性氧（ROS）

圖 1.2 腫瘤相關(guān) 管 成 式[35]Figure 1.2 The way of tumor angiogenesis原發(fā)性癌很少導(dǎo)致患者死亡（肺癌和肝癌除外），而大多數(shù)癌相關(guān)死亡是由癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移引起的并發(fā)癥所導(dǎo)致。對(duì)于大多數(shù)惡性腫瘤，轉(zhuǎn)移的重要步驟之一是癌細(xì)胞必須形成新的血管系統(tǒng)。通常，瘤塊越大，瘤體內(nèi)的血管密度越高，腫瘤細(xì)胞逃逸幾率越大。對(duì)于離開血液循環(huán)的大多數(shù)單個(gè)癌細(xì)胞要么凋亡，要么被免疫細(xì)胞消除，要么只保持休眠狀態(tài)不實(shí)現(xiàn)繼發(fā)性腫瘤的形成[38]。論證腫瘤相關(guān)血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移的有力證據(jù)之一，是腫瘤微血管密度與幾乎所有形式的惡性腫瘤中轉(zhuǎn)移潛能的增加和存活率差相關(guān)。此外，血管生成對(duì)于癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移的形成至關(guān)重要。一些研究表明，骨髓來(lái)源的 EPC 有助于腫瘤轉(zhuǎn)移性生長(zhǎng)的早期血管生成[39]，而另一些研究則認(rèn)為正常血管的合并是轉(zhuǎn)移性血管形成的機(jī)制。此外，周細(xì)胞也在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用，，它有助于控制毛細(xì)血管腔的通暢性，MMP9敲除小鼠缺乏周細(xì)胞，血管形態(tài)塌陷，轉(zhuǎn)移減少。臨床前試驗(yàn)中的抗血管生成療法可
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：2651953