【摘要】：褐藻硫酸多糖組分因其具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗凝血等多種生物活性,受到了廣泛的關(guān)注。其中的褐藻多糖硫酸酯組分研究較多,但對硫酸雜多糖組分關(guān)注較少。本實驗室在前期實驗中通過對數(shù)十種海藻多糖神經(jīng)保護(hù)作用篩選,得到一種對帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)具有顯著作用的海帶低硫酸化雜多糖(Sulfated Hetero-Polysaccharides,UF)。UF是一種硫酸根含量較低、單糖組成復(fù)雜的雜多糖。由于其組成復(fù)雜,質(zhì)量控制困難,藥物代謝動力學(xué)進(jìn)展緩慢,已成為制約UF藥物開發(fā)過程中的瓶頸。采用高效液相色譜法初步建立了海帶低硫酸化雜多糖的指紋圖譜質(zhì)量控制技術(shù),對UF水解后的單糖組成色譜圖進(jìn)行分析,共鑒定出甘露糖、甘露糖醛酸、鼠李糖、巖藻糖等8個主要共有特征峰,且全譜相似度評價進(jìn)一步證實了該方法應(yīng)用于UF樣品質(zhì)量控制的可行性。針對低硫酸化雜多糖的結(jié)構(gòu)特征,以異硫氰基熒光素(FITC)為標(biāo)簽,制備得到熒光標(biāo)記多糖FITC-UF。通過紫外-可見光譜、紅外光譜等分析方法,對制備得到的FITC-UF樣品進(jìn)行分析,表明FITC已經(jīng)成功連接到了UF樣品上,熒光強(qiáng)度較強(qiáng)且穩(wěn)定。CCK-8法測定細(xì)胞活力實驗表明熒光標(biāo)記樣品FITC-UF對PC12細(xì)胞無細(xì)胞毒性,可用于后續(xù)動物實驗。方法學(xué)實驗表明該方法可準(zhǔn)確、快速、靈敏的對海帶低硫酸化雜多糖樣品進(jìn)行微量、定量檢測,為后續(xù)藥物代謝動力學(xué)實驗中大量生物樣本的檢測奠定了基礎(chǔ)。經(jīng)腹腔注射單次給藥后,在小鼠的血液及各臟器中均檢測到了海帶低硫酸化雜多糖。藥物代謝動力學(xué)數(shù)據(jù)分析可得,藥物在體內(nèi)吸收較快,達(dá)峰非常迅速;在體內(nèi)吸收程度較好,但代謝較快。海帶低硫酸化雜多糖在各器官中的分布比例較大,且能透過血腦屏障,在腦組織中有一定的蓄積。海帶低硫酸化雜多糖質(zhì)量控制方法的建立與初步的藥物代謝動力學(xué)研究為解決制約UF成藥過程中的瓶頸問題提供了一定的理論基礎(chǔ),可以在一定程度上加快UF作為創(chuàng)新型藥物的研發(fā)進(jìn)程。
【圖文】：

海帶低硫酸化雜多糖（UF）的指紋圖譜及藥代動力學(xué)初步研究TFA 濃度達(dá)到 4 mol/L 時，峰面積達(dá)到最大值，隨后峰面積開始下降，可能是因為 TFA 具有強(qiáng)氧化性，濃度過高時易導(dǎo)致樣品發(fā)生氧化，從而導(dǎo)致樣品被破壞，，水解后得到各單糖含量降低，各主要色譜峰的共有峰面積之和反而下降。因此水解樣品使用 TFA 濃度過高或者過低都無法準(zhǔn)確地對樣品中的各單糖組分含量進(jìn)行定量分析，可初步確定水解所用 TFA 濃度為 4 mol/L 時效果較好。

圖 2.2 不同衍生反應(yīng)時間對 UF指紋圖譜共有峰面積之和的影響Fig. 2.2 Effect of different derivative time on the sum of common peak areas of HPLCfingerprint for UF(2) PMP 衍生化試劑使用量的篩選在衍生化反應(yīng)的過程中，衍生化試劑 PMP 的使用量同樣會對衍生化反應(yīng)的程度產(chǎn)生一定影響。由圖 2.3 可知，隨著衍生化試劑使用量的增加，主要共有特征峰的峰面積之和呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。當(dāng)衍生化試劑的使用量高于 100μL時，隨著 PMP 使用量的繼續(xù)增加，各主要色譜峰的峰面積之和反而下降，說明在這種情況下，PMP 用量的增大影響了衍生化反應(yīng)的充分進(jìn)行，可能是由于過量的衍生化試劑導(dǎo)致反應(yīng)過程中副產(chǎn)物的生成，各特征峰的共有峰面積之和下降。因此可初步確定當(dāng)衍生化試劑 PMP 的使用量為 100μL 時，衍生化反應(yīng)效果
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院海洋研究所)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R914;R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2650048