【摘要】：脂代謝異�？蓞⑴c許多重癥疾病導(dǎo)致的器官功能障礙或衰竭過(guò)程。肝臟是維持脂代謝穩(wěn)態(tài)的重要器官,在維持機(jī)體脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用,但也是膿毒癥多器官功能障礙中最容易受累的器官之一。膿毒癥肝損傷的發(fā)生發(fā)展與脂代謝穩(wěn)態(tài)及患者預(yù)后密切相關(guān),是膿毒癥患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因子。如何維持肝臟代謝穩(wěn)態(tài)、防治膿毒癥肝損傷逐漸成為重癥醫(yī)學(xué)的關(guān)注熱點(diǎn)。本研究著該熱點(diǎn)入手,共分為兩部分,第一部分采用腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的方法來(lái)構(gòu)建內(nèi)毒素血癥引發(fā)的肝損傷小鼠模型,探討糖皮質(zhì)激素(甲基強(qiáng)的松龍,簡(jiǎn)稱甲強(qiáng)龍,Methylprednisolone,MP)對(duì)膿毒癥肝損傷的治療作用及相關(guān)機(jī)制。第二部分在LPS誘導(dǎo)內(nèi)毒素血癥肝損傷條件下,探討甲基強(qiáng)的松龍(MP)通過(guò)調(diào)節(jié)自噬在LPS誘導(dǎo)的肝臟脂代謝紊亂中的作用。第一部分:甲基強(qiáng)的松龍減輕脂多糖誘導(dǎo)的肝功能損傷及高脂血癥【目的】探討甲基強(qiáng)的松龍(methylprednisolone,MP)對(duì)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)肝損傷的影響和機(jī)制�！痉椒ā�8周齡雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、LPS組(分腹腔注射LPS 2h,4h,8h,24h處理組)和MP+LPS組(n=5)。LPS組小鼠腹腔注射LPS(5 mg/kg)制作內(nèi)毒素血癥模型,MP+LPS組腹腔注射LPS(5 mg/kg)+MP(2 mg/kg/d)24h,對(duì)照組腹腔注射等容量生理鹽水。蘇木精-伊紅(HE)染色觀察各組肝組織病理學(xué)變化。檢測(cè)小鼠血清樣本ALT、AST、非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acid,NEFA)、甘油三酯(triglyceride,TG)、膽固醇(cholesterol,CHOL)水平。酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)肝組織Tnf-α、Il-1β、Il-6 mRNA水平�！窘Y(jié)果】(1)MP+LPS組小鼠精神萎靡,活動(dòng)減少,蜷縮冷戰(zhàn),疼痛刺激反應(yīng)情況較LPS處理各組好。(2)HE病理切片提示LPS處理可見(jiàn)小鼠肝組織損傷表現(xiàn),并隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸加重;與LPS處理小鼠相比,MP處理內(nèi)毒素血癥小鼠肝組織病理?yè)p傷均有不同程度改善。(3)LPS處理不同時(shí)間后,小鼠血清中ALT、AST、NEFA、TG、CHOL水平顯著高于正常小鼠。加入MP處理后血清中ALT、AST、NEFA、TG、CHOL水平較LPS組顯著下降(P0.05)。(4)LPS刺激條件下,小鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平整體呈上升趨勢(shì),并且在不同時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)最高水平。肝臟Tnf-α、Il-1β、Il-6 mRNA相對(duì)表達(dá)量整體呈增加趨勢(shì)。加入MP處理后,MP+LPS組肝臟Tnf-α、Il-1β、Il-6 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于單純LPS組(P0.05)�！窘Y(jié)論】甲基強(qiáng)的松龍能減輕LPS誘導(dǎo)的高炎癥因子反應(yīng)及高脂血癥,降低血脂和炎癥水平,改善膿毒癥肝損傷。第二部分:甲基強(qiáng)的松龍誘導(dǎo)自噬減輕肝臟脂肪累積及炎癥,緩解肝功能損傷【目的】研究LPS誘導(dǎo)的內(nèi)毒素血癥肝損傷條件下,甲基強(qiáng)的松龍(methylprednisolone,MP)調(diào)節(jié)自噬對(duì)肝臟脂肪代謝的影響�！痉椒ā�45只8周齡雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為9組(n=5)。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-qPCR)測(cè)肝臟Fasn、Scd-1、Ppar-γ、Ppar-α、Cpt-1、Tnf-α、Il-1β、Il-6的mRNA表達(dá)水平;免疫蛋白印跡法(western blot)測(cè)定肝臟FASN、SCD-1、PPAR-γ及自噬蛋白LC3 II/I和凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)水平�！窘Y(jié)果】(1)5 mg/kg LPS處理后,小鼠肝臟炎癥因子Tnf-α、Il-1β、Il-6 mRNA表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組,隨著刺激時(shí)間延長(zhǎng),仍維持在較高水平(P0.05)。加入MP處理后,LPS小鼠肝臟炎癥因子Tnf-α、Il-1β、Il-6 mRNA表達(dá)水平較LPS組表達(dá)下降(P0.05)。(2)LPS刺激下,肝臟Fasn、Scd-1、Ppar-γ、Ppar-αmRNA水平較對(duì)照組明顯下調(diào),Cpt-1mRNA表達(dá)出現(xiàn)一過(guò)性增加(P0.05)。與LPS組比較,加入MP處理后,MP+LPS組小鼠肝臟Fasn、Scd-1、Ppar-γ、Ppar-α、Cpt-1 mRNA表達(dá)水平較LPS組增加(P0.05)。(3)LPS處理24 h,FASN、SCD-1、PPAR-γ蛋白表達(dá)明顯被抑制,MP處理改善LPS對(duì)FASN、SCD-1、PPAR-γ蛋白表達(dá)抑制作用(P0.05)。(4)LPS處理顯著促進(jìn)小鼠肝臟Caspase-3蛋白表達(dá),肝組織自噬LC3 II/I蛋白表達(dá)呈2h內(nèi)激活而后抑制的變化趨勢(shì)。LPS處理24h,MP明顯增加LC3 II/I蛋白表達(dá),抑制凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)(P0.05)�！窘Y(jié)論】甲基強(qiáng)的松龍通過(guò)激活自噬調(diào)節(jié)肝臟脂代謝穩(wěn)態(tài),抑制肝臟炎癥反應(yīng),改善肝功能,減少肝細(xì)胞凋亡,緩解LPS誘導(dǎo)的內(nèi)毒素血癥肝損傷。
【圖文】：

物分組 注射5 mg/kg LPS制作小鼠內(nèi)毒素血癥肝損傷模型，制模條[60]。動(dòng)物隨機(jī)分批分組：A批處理為L(zhǎng)PS刺激不同時(shí)間點(diǎn)ontrol組），LPS組（LPS分別處理 2 h, 4 h, 8 h, 24 h后處果研究，分別為對(duì)照組（Control組）、LPS組（LPS處理22 mg/kg MP）、MP+LPS組（LPS處理1h后腹腔注射MP組按腹腔注射LPS后0h、2 h、4 h、8 h、24 h經(jīng)戊巴比妥麻醉組織；B批小鼠MP+LPS組按照LPS（5 mg/kg）處理1h后腹腔注射等量生理鹽水，，24 h經(jīng)戊巴比妥麻醉后處死并收取程圖見(jiàn)圖 6。血清存放于4℃冰箱，24h內(nèi)檢測(cè)。病理組織，肝組織經(jīng)液氮瞬時(shí)冷凍后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱，備用。

水組）比較P < 0.05；# 表示與LPS 組比較P < 0.05圖 9. 小鼠肝組織脂肪酸合成相關(guān)蛋白表達(dá)變化（24h）Figure 9. The protein levels of fatty acid synthesis in livers of mice組織脂肪氧化相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)常對(duì)照小鼠比較，LPS刺激小鼠其肝臟脂肪氧化相關(guān)基因包對(duì)表達(dá)水平受到明顯抑制，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著意義（P<0.05）；延長(zhǎng)，基因Cpt-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平在4h時(shí)出現(xiàn)一過(guò)性增高（小鼠24h，肝組織內(nèi)Ppar-α、Cpt-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量（0.76 0.19）與正常對(duì)照小鼠（1.02± 0.14，1.00 ± 0.09）無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)較，MP+LPS組Ppar-α、Cpt-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量（0.91 ± 0.升高（P=0.431，P=0.013）（圖10 II）。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 崔云;張育才;祝益民;;重視危重癥兒童急性肝功能衰竭的診斷與治療[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2015年06期

2 馬曉春;;應(yīng)提高對(duì)膿毒癥肝損傷的認(rèn)識(shí)[J];中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué);2013年04期

本文編號(hào)：2642866