【摘要】：本研究采用細(xì)胞培養(yǎng)、DAPI和MDC染色、RNA干擾、熒光蛋白標(biāo)記、Western blotting等細(xì)胞分子生物學(xué)方法和技術(shù),以PC12細(xì)胞和小鼠原代神經(jīng)元為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,綜合研究了魚(yú)藤酮對(duì)神經(jīng)細(xì)胞自噬水平的影響,并深入探討了魚(yú)藤酮誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡與自噬抑制的關(guān)系。結(jié)果如下:1魚(yú)藤酮誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞自噬抑制PC12細(xì)胞和小鼠原代神經(jīng)元、或感染Ad-GFP-LC3的PC12細(xì)胞和小鼠原代神經(jīng)元,以不同濃度魚(yú)藤酮(0-1 μM)處理24 h,或用魚(yú)藤酮(1 μM)處理(0-24 h),觀察細(xì)胞 GFP-LC3puncta 變化;Western blot 分析 Atg5、P62、LC3 蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示:魚(yú)藤酮以濃度和時(shí)間依賴地方式誘導(dǎo)細(xì)胞GFP-LC3 puncta數(shù)量減少,以及LC3-Ⅱ減少和p62表達(dá)增加。提示:魚(yú)藤酮引起神經(jīng)細(xì)胞PD模型中自噬抑制。2魚(yú)藤酮誘導(dǎo)自噬抑制導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡PC12細(xì)胞和小鼠原代神經(jīng)元、或感染shRNA LC3-Ⅰ/Ⅱ、shRNA Atg5、shRNA GFP、Ad-GFP-LC3的PC12細(xì)胞,用不同濃度魚(yú)藤酮(0-1 μM)處理24h、或用雷帕霉素(0.2 μg/ml)預(yù)處理2 h后魚(yú)藤酮(1 μM)處理24 h,MDC染色和GFP-LC3熒光拍照評(píng)估細(xì)胞自噬體變化,DAPI染色分析細(xì)胞凋亡,Western blot檢測(cè) Atg5、P62、LC3、Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP 表達(dá)。結(jié)果顯示:雷帕霉素逆轉(zhuǎn)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞MDC熒光強(qiáng)度降低和凋亡增加;下調(diào)LC3-Ⅰ/Ⅱ或Atg5強(qiáng)化魚(yú)藤酮誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞MDC熒光強(qiáng)度或GFP-LC3 puncta數(shù)量降低以及調(diào)亡增加。提示:魚(yú)藤酮誘導(dǎo)自噬抑制導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

邐第一部分邋文獻(xiàn)綜述邐ｍ逡逑養(yǎng)條件存在特異性差異和雙向作用，或許對(duì)自噬流的情況進(jìn)行片面分析可能導(dǎo)致逡逑錯(cuò)誤的結(jié)論｜９］。在魚(yú)藤酮的情況下，毒素對(duì)自噬流的可變作用可能取決于體內(nèi)和逡逑體外分析的劑量，持續(xù)時(shí)間和細(xì)胞類型。這種現(xiàn)象可以部分地由ＲＯＳ水平和魚(yú)逡逑藤酮引起的線粒體損傷程度來(lái)解釋［６２＿６４］。魚(yú)藤酮對(duì)神經(jīng)元存活具有上述的不利影逡逑響，對(duì)自噬流產(chǎn)生兩面效應(yīng)。報(bào)道魚(yú)藤酮在大多數(shù)情況下阻斷自噬，因?yàn)橛蒙侥五义戏踊蚶着撩顾兀瓘?qiáng)自噬誘導(dǎo)劑處理小鼠－有效地減弱魚(yú)藤酮介導(dǎo)的毒性［６５］。為逡逑進(jìn)一步支持這一觀點(diǎn)，用高劑量的魚(yú)藤酮處理ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細(xì)胞阻斷ＡＴＧ５依賴性逡逑自噬，致使細(xì)胞內(nèi)溶酶體功能紊亂，Ｐ６２蛋白水平增加以及ａ－突觸核蛋白的異常逡逑積累１６４１。￣此同時(shí)，只心少數(shù)研究認(rèn)為負(fù)藤酮是自噬流的誘導(dǎo)因子（圖２）。例逡逑如，用魚(yú)藤酮處理ＨｅＬａ細(xì)胞會(huì)通過(guò)上調(diào)自嗤和線粒體自噬來(lái)引發(fā)細(xì)胞死亡，這逡逑－過(guò)程是由線粒體超氧化物引發(fā)的［６６］。此外，在用低劑量魚(yú)藤酮處理的原代皮逡逑

邐第二章細(xì)胞自噬及其在神經(jīng)變性疾病發(fā)生中的作用邐１９逡逑自噬期間涉及膜動(dòng)力學(xué)的獨(dú)特分子組［１８］。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中己經(jīng)發(fā)現(xiàn)了三種類型逡逑的自嗤途徑：巨自j（Ｍａｃｒｏａｕｔｏｐｈａｇｙ），微自嗤（Ｍｉｃｒｏａｕｔｏｐｈａｇｙ）以及分子伴逡逑侶介導(dǎo)的自嗤（Ｃｈａｐｅｒｏｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ邋ａｕｔｏｐｈａｇｙ，ＣＭＡ）邋［１９－２３］，如圖邋２－１邋所示丨９］。逡逑＂＂＂＂＂邐＇
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R99

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 譚輝;魏太陽(yáng);任少鵬;;魚(yú)藤酮在農(nóng)藥應(yīng)用中的專利技術(shù)綜述[J];河南科技;2019年15期

2 黃培鑫;;魚(yú)藤酮產(chǎn)品登記概況及未來(lái)展望[J];農(nóng)藥市場(chǎng)信息;2017年28期

3 楊林濤;葉姣;陳曉東;胡艾希;王超;;魚(yú)藤酮肟氨基羧酸酯的合成、表征及生物活性[J];精細(xì)化工;2011年09期

4 張帥;曾鑫年;熊忠華;;表魚(yú)藤酮光穩(wěn)定性的研究[J];農(nóng)藥;2007年04期

5 鄧寶;王彥永;王銘維;;魚(yú)藤酮與帕金森病動(dòng)物模型[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2006年02期

6 劉紅;葛曉群;;魚(yú)藤酮與帕金森病動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J];中藥藥理與臨床;2006年05期

7 江定心;張信旺;劉志誠(chéng);徐漢虹;;魚(yú)藤酮腙的合成及生物活性[J];農(nóng)藥;2006年12期

8 J. M. Palmer;迎春;;電子通過(guò)魚(yú)藤酮敏感的脫氫酶流動(dòng)的調(diào)節(jié)[J];長(zhǎng)沙水電師院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1987年04期

9 俞泉;胡一鴻;;魚(yú)藤酮的提取和應(yīng)用概述[J];華中昆蟲(chóng)研究;2019年00期

10 陳樹(shù)欣;3.5%高滲魚(yú)藤酮乳油防治番茄蚜蟲(chóng)效果好[J];植保技術(shù)與推廣;1999年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 葉姣;胡艾希;;魚(yú)藤酮衍生物的合成與生物活性研究[A];2011年全國(guó)藥物化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議——藥物的源頭創(chuàng)新論文摘要集[C];2011年

2 黃金莎;王濤;曹學(xué)兵;郝麗君;熊念;孫圣剛;;干擾GAPDH的過(guò)表達(dá)對(duì)PC12細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制[A];第十一屆全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

3 葉姣;陳曉東;胡艾希;;新型魚(yú)藤酮衍生物的合成與抗腫瘤活性[A];第六屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

4 黃曉峰;尹文;王爽;李永強(qiáng);亢君君;;魚(yú)藤酮通過(guò)線粒體氧化應(yīng)激途徑誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元凋亡[A];中國(guó)活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集（第一冊(cè)）[C];2011年

5 劉玲;韓超;張國(guó)新;徐小云;黃金莎;熊念;王濤;;組蛋白去乙�；敢种苿⿲�(duì)帕金森病動(dòng)物模型的保護(hù)作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)峰會(huì)暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)中青年神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2015年

6 劉玲;張國(guó)新;郭可心;韓超;徐小云;黃金莎;熊念;王濤;;組蛋白去乙�；敢种苿⿲�(duì)帕金森病動(dòng)物模型的保護(hù)作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2015年

7 趙洪銳;張穎冬;高擎;曹潔;;血管緊張素Ⅱ干預(yù)對(duì)魚(yú)藤酮處理多巴胺能神經(jīng)元氧化應(yīng)激的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2014年

8 劉巖;孫建棟;苑玉和;陳乃宏;;魚(yú)藤酮接觸式給藥致小鼠帕金森氏病模型的建立[A];2011全國(guó)老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

9 劉巖;苑玉和;孫建棟;陳乃宏;;魚(yú)藤酮接觸式給藥致小鼠帕金森氏病模型的建立[A];第二屆中國(guó)藥理學(xué)會(huì)補(bǔ)益藥藥理專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2012年

10 楊嬌龍;熊念;劉玲;韓超;張國(guó)新;姜海洋;李杰;徐小云;沈巖;王濤;黃金莎;;高遷移率族蛋白通過(guò)阻礙自噬流促進(jìn)α-synuclein的聚集[A];中華醫(yī)學(xué)峰會(huì)暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)中青年神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2015年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前7條

1 徐錚奎;魚(yú)藤酮與帕金森病[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

2 ;科研全面突破多項(xiàng)指標(biāo)翻番[N];南方日?qǐng)?bào);2010年

3 本報(bào)記者 葉青 通訊員 粵科宣;廣東，民生科技有魅力[N];廣東科技報(bào);2011年

4 本報(bào)記者楊樂(lè) 通訊員林仁恭;南寧科技邁出國(guó)際合作步伐[N];南寧日?qǐng)?bào);2012年

5 天涯;如何用中醫(yī)原理梳理農(nóng)業(yè)[N];農(nóng)資導(dǎo)報(bào);2018年

6 記者 季杰;“我們帶來(lái)了‘秘密武器’”[N];深圳商報(bào);2010年

7 張為農(nóng);農(nóng)藥行情看好[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王越;魚(yú)藤酮誘導(dǎo)SH-SY5Y帕金森模型中對(duì)FOXO3a在自噬凋亡中作用的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

2 賽燕;多巴胺代謝功能障礙在魚(yú)藤酮多巴胺神經(jīng)元毒性中作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 趙黔魯;魚(yú)藤酮損傷PC12細(xì)胞的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

4 韓威;魚(yú)藤酮對(duì)PC12細(xì)胞毒性作用機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2007年

5 劉輝;魚(yú)藤酮對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的作用及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

6 彭凱歌;線粒體質(zhì)量控制在魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的多巴胺神經(jīng)元變性損傷中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2017年

7 陳曉東;魚(yú)藤酮結(jié)構(gòu)改造、類似物合成與生物活性研究[D];湖南大學(xué);2013年

8 熊御云;帕金森樣神經(jīng)損傷的線粒體機(jī)制及積雪草酸神經(jīng)保護(hù)作用的研究[D];江蘇大學(xué);2012年

9 高峰;魚(yú)藤酮對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞激活的機(jī)制研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

10 梁亞萍;紫穗槐果實(shí)殺蟲(chóng)活性物質(zhì)及其作用機(jī)理研究[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王雪微;魚(yú)藤酮對(duì)大鼠肝毒性及其線粒體損傷機(jī)制的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

2 董歡;原花青素和番茄紅素對(duì)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制探討[D];西北師范大學(xué);2016年

3 曾茹;基于SIRT3研究淫羊藿苷對(duì)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷的作用機(jī)制[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

4 凌衡濱;魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的帕金森病大鼠具有認(rèn)知功能障礙及抑郁樣行為[D];南華大學(xué);2018年

5 朱翠蘭;魚(yú)藤酮誘導(dǎo)自噬抑制介導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡分子機(jī)理研究[D];南京師范大學(xué);2018年

6 朱薛偉;魚(yú)藤酮對(duì)PrP敲出小鼠的毒性影響及其機(jī)理研究[D];華東師范大學(xué);2016年

7 孫中鋒;魚(yú)藤酮誘導(dǎo)家蠶帕金森疾病模型的初探[D];西南大學(xué);2015年

8 馬希珍;慢性魚(yú)藤酮小鼠模型中鐵與alpha-突觸核蛋白分布的相關(guān)性研究[D];青島大學(xué);2018年

9 劉上;楊梅黃酮保護(hù)魚(yú)藤酮造成的MES23.5細(xì)胞損傷的機(jī)制探討[D];青島大學(xué);2018年

10 劉鑫;Ndfip1對(duì)魚(yú)藤酮處理的SH-SY5Y細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制研究[D];青島大學(xué);2018年

，

本文編號(hào)：2641782