發(fā)布時間：2020-04-25 10:01

【摘要】：目的刺激響應性的藥物載體由于具有較高藥物的生物利用率、可以降低藥物對正常細胞的毒副作用、可以藥物在病理部位實現靶向遞送、具有良好的生物相容性等,已經在生物醫(yī)學,藥物輸送、疾病診斷與治療領域具有廣闊的應用前景。病理部位微環(huán)境與正常環(huán)境之間的差異性使這些藥物載體可以用于設計藥物的遞送系統(tǒng),通常利用較低的pH和高濃度的谷胱甘肽或胰蛋白酶來刺激藥物載體,通過斷裂相應的化學鍵或分解載體使具有刺激響應性的藥物載體在病理部位因內部刺激促使藥物釋放并在健康組織環(huán)境中避免藥物對正常細胞的毒副作用。藥物的遞送系統(tǒng)可以改善所載藥物的治療效果和安全性;延長藥物在病理部位的作用時間;藥物優(yōu)先在病理部位富集;克服藥物非特異性靶向的缺陷。本文采用具有良好的生物相容性和生物可降解性的原料—碳酸鈣、牛血清蛋白和茶多酚,使用原位封裝法,制備出加載依達拉奉的碳酸鈣復合微球和加載阿霉素的復合納米球,復合顆粒因具有內部因子刺激性響應特性,可以用作藥物的刺激性響應遞送系統(tǒng)。方法用蛋清(Egg White)作為調控劑,制備裝載依達拉奉(Edaravone)的碳酸鈣復合微球(Eda@CaCO_3-EW復合微球)。牛血清白蛋白(BSA)和綠茶多酚(TP)自組裝制備加載多柔比星(DOX)的復合納米球,并用葉酸(FA)進一步修飾這些納米載體,簡稱為DOX@BSA-TP-FA納米球。通過掃描電子顯微鏡(SEM)和透射電子顯微鏡(TEM)對復合顆粒進行形態(tài)的表征。采用KBr壓片法,用傅立葉變換紅外光譜鑒定復合顆粒的組成。采用激光共聚焦掃描顯微鏡(CLSM)研究復合顆粒在不同條件下對細胞的影響。在微環(huán)境刺激因子存在條件下,通過藥物體外釋放和MTT實驗研究復合顆粒的智能響應特性和釋藥行為。結果(1)制備的Eda@CaCO_3-EW復合微球具有較好的形貌,表面粗糙,其是由許多小顆粒組成的聚集體,直徑范圍為7~10μm,有較好的單分散性;制備的DOX@BSA-TP-FA納米球尺寸均一,平均直徑為220 nm,具有良好的分散性。(2)Eda@CaCO_3-EW復合微球的載藥效率(DLE)和載藥量(DLC)分別為89.4%和19.2%;DOX@BSA-TP-FA納米球的DLE和DLC為86.4%和23.5%。(3)由傅里葉紅外光譜圖、TG分析和高效液相吸收光譜可知,依達拉奉已成功被包封進所制備的復合微球中;由傅里葉紅外光譜圖和紫外吸收光譜可知,DOX已成功被包封進所制備的納米球中。(4)依達拉奉體外釋放實驗中,Eda@CaCO_3-EW復合微球,在pH=7.4時,透析9 h后,依達拉奉的釋放量為5.4%;pH=5.0時,依達拉奉的釋放量在6 h內增加至94.4%。(5)阿霉素體外釋放實驗中,DOX@BSA-TP-FA納米球,在pH=7.4時,0.01 mmol GSH中透析16 h后,DOX的累積釋放僅為12.7%;pH=7.4時,10mmol GSH中透析16 h后,DOX釋放率接近61.4%;pH=7.4時,10 mmol GSH+0.04 mmol胰蛋白酶緩沖溶液中透析16 h,DOX的累積釋放量增加至85.5%。(6)MTT實驗顯示Eda@CaCO_3-EW復合微球在pH=5.0,H_2O_2(800μmol/L)的刺激下,可以的顯著地促進成骨細胞的增殖。(7)MTT實驗結果顯示DOX@BSA-TP-FA納米球顯示出比游離DOX更高的細胞毒性,且DOX@BSA-TP-FA納米球對正常細胞具有低細胞毒性,并且它可以減少由DOX引起的細胞損傷。結論(1)用蛋白質為調控劑制備具有pH敏感特征的CaCO_3載依達拉奉礦化微球,并用于微創(chuàng)骨髓炎的潛在治療。所制備的Eda@CaCO_3-EW復合微球可以在較低pH值的H_2O_2刺激下保護和促進成骨細胞的增殖。pH=7.4時,Eda@CaCO_3-EW復合微球較穩(wěn)定,只釋放出少量的依達拉奉;pH=5.0時,可逐漸降解,復合微球的CaCO_3部分用于中和酸性環(huán)境。同時,包封在CaCO_3微球中的依達拉奉被釋放以抵抗氧化應激。(2)基于BSA和TP自組裝成納米球用于加載DOX,并用FA進一步修飾后得到復合納米球(DOX@BSA-TP-FA納米球)。DOX@BSA-TP-FA納米球在0.01 mmol GSH中較穩(wěn)定;在10 mmol GSH中DOX釋放率接近61.4%;在10mmol GSH+0.04 mmol胰蛋白酶中DOX的累積釋放量增加的更多。且DOX@BSA-TP-FA納米球對腫瘤細胞具有較高的細胞毒性,還可以減少由DOX誘導的細胞損傷。
【圖文】：

CaCO3-EW 復合微球的 SEM（a，b）和 TEM（a@CaCO3-EW 復合微球的 SEM 和 TEM 圖像。圖，，產品直徑范圍為 7~10 μm。圖 1b 顯示了復合微合微球由許多納米小球組成。TEM 圖像（圖 1cEW 復合微球的實心結構。圖 1d 是圖 1c 的局部放面，進一步驗證了其由許多小顆粒組成的聚集體。@CaCO3-EW 復合微球的紅外和 XRD 分析

CaCO3-EW 復合微球的 SEM（a，b）和 TEM（a@CaCO3-EW 復合微球的 SEM 和 TEM 圖像。圖，產品直徑范圍為 7~10 μm。圖 1b 顯示了復合微合微球由許多納米小球組成。TEM 圖像（圖 1cEW 復合微球的實心結構。圖 1d 是圖 1c 的局部放面，進一步驗證了其由許多小顆粒組成的聚集體。@CaCO3-EW 復合微球的紅外和 XRD 分析
【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R943;R96

【參考文獻】

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1 高潔;李博華;;靶向抗腫瘤納米藥物研究進展[J];中國醫(yī)藥生物技術;2008年02期

本文編號：2640114