【摘要】：[目的]研究锝亞甲基二膦酸鹽(99Tc-MDP)對RAW264.7及MC3T3-E1細胞的影響,為臨床治療頜骨成釉細胞瘤等破骨細胞引起的相關(guān)性骨吸收疾病提供理論依據(jù)。[方法]采用不同濃度的99Tc-MDP作用于小鼠單核巨噬細胞白血病細胞(RAW264.7)及小鼠胚胎成骨細胞前體細胞(MC3T3-E1),通過CCK-8檢測細胞增殖抑制率,流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡及細胞周期,免疫細胞化學(xué)及Western blot檢測RANKL、OPG和RANK蛋白的表達情況。[結(jié)果]0.01 μg/ml 和100μg/ml 濃度99Tc-MDP 作用 RAW264.7 細胞 48h后,抑制率分別為6.09±2.38%和52.57±8.38%,不同濃度的99Tc-MDP對RAW264.7細胞的抑制作用明顯強于對照組(P0.05),并誘導(dǎo)細胞凋亡,降低RANK 蛋白的表達。0.01μg/ml 和 100μg/ml 濃度99Tc-MDP 作用 MC3T3-E1 細胞48h后,存活率分別為123.08±2.87%和76.64±4.29%,與對照組比較,低濃度0.01 μg/ml 99Tc-MDP對MC3T3-E1細胞具有明顯增殖作用(P0.05),促進OPG和RANKL蛋白的表達。而高濃度1000μg/m199Tc-MDP對MC3T3-E1細胞具有明顯抑制作用,抑制OPG和RANKL蛋白的表達。不同濃度的唑來膦酸(ZOL)對RAW264.7細胞和MC3T3-E1細胞的抑制作用明顯強于對照組(P0.05)。[結(jié)論]99Tc-MDP對RAW264.7細胞有抑制作用,隨濃度和作用時間的延長而增大,誘導(dǎo)其凋亡和抑制RANK蛋白的表達。0.01μg/ml低濃度99Tc-MDP對MC3T3-E1細胞作用有促增殖作用,并增加OPG蛋白的表達。ZOL對RAW264.7細胞和MC3T3-E1細胞均有抑制作用,且隨濃度和作用時間的延長而增強。99Tc-MDP對頜骨成釉細胞瘤開窗治療可能具有一定的輔助治療作用。
【圖文】：

結(jié)果逡逑１．細胞生長曲線逡逑通過ＭＴＴ法檢測細胞的生長曲線（圖１，２），ＲＡＷ２６４．７細胞以ｌｘｌ0４個／逡逑孔、２ｘｌ0４個／孔、３ｘｌ0４個／孔、私１0４個／孔、５＞＜１0４個／孔、６ｘｌ0４個／孔、７ｘｌ0４個逡逑／孔、８ｘｌ0４個／孔的密度分別接種于９６孔板中培養(yǎng)２４ｈ均達到對數(shù)生長期；４８ｈ逡逑時ｌｘｌ0４個／孔、２ｘｌ0４個／孔、３ｘｌ0４個／孔、４ｘｌ0４個／孔四組仍成對數(shù)生長，其余逡逑各組趨于穩(wěn)定；７２ｈ時ｌｘｌ0４個／孔、２ｘｌ0４個／孔兩組仍成對數(shù)生長，３ｘｌ0４個／逡逑孔、４ｘｌ0４個／孔、５ｘｌ0４個／孔、６＞＜１0４個／孔四組趨于穩(wěn)定，７ｘｌ0４個／孔、８＞＜１０４逡逑個兩組趨于下降。因此，ＲＡＷ２６４．７細胞選擇３ｘｌ０４個／孔為接種密度（圖１）。逡逑二灥＿逡逑。５邋邐：＝逡逑0邋－—．邋邐邋邐邐邋—邋邐８ｎ0４逡逑１２ｈ邐２４ｈ邐３６ｈ邐４８ｈ邐６０ｈ邐７２ｈ邐８４ｈ邐９６ｈ逡逑時間逡逑圖１邐ＲＡＷ２６４．７細胞的生長曲線逡逑Ｆｉｇ．邋１．邋Ｇｒｏｗｔｈ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ＲＡＷ２６４．７邋ｃｅｌｌｓ逡逑ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１邋細胞以邋ｌｘｌ0３邋個／孔、２ｘｌ0３邋個／孔、３ｘｌ0３邋個／孔、４ｘｌ0３邋個／孔、５ｘｌ0３逡逑個／孔、６ｘｌ0３個／孔、７ｘｌ0３個／孔、８ｘｌ0３個／孔的密度分別接種于９６孔板中培養(yǎng)逡逑２４ｈ時ｌｘｌ0３個／孔、２ｘｌ0３個／孔兩組未達對數(shù)期，其余各組均達對數(shù)期；４８ｈ后逡逑均達到對數(shù)生長期；７２ｈ時ｌｘｌＯ４個／孔、２ｘｌ0４個／孔兩組仍成對數(shù)生長

ｌＯＯ＾ｇ／ｍｌ）及對照組作用ＲＡＷ２６４．７細胞和ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞４８ｈ后，對照組逡逑ＲＡＷ２６４．７細胞細胞貼壁生長狀態(tài)良好，均勻平鋪于培養(yǎng)瓶底部，細胞成類圓形，逡逑形態(tài)大小不一，培養(yǎng)瓶中細胞漂浮物較少（圖３．ａ）。０．０１｜ｉｇ／ｍｒＴｃ－ＭＤＰ濃度組，逡逑ＲＡＷ２６４．７細胞生長受到輕微抑制，細胞貼壁生長，形態(tài)大小不一，培養(yǎng)瓶中見逡逑少量細胞漂�。▓D３．ｂ）。１０0ｎｇ／ｍｌ＂Ｔｃ－ＭＤＰ濃度組，ＲＡＷ２６４．７細胞細胞生長逡逑受到顯著抑制，，細胞皺縮體積變小，培養(yǎng)瓶中見大量細胞碎片及漂�。▓D３．ｃ）。逡逑■■■逡逑ａ．對照組；ｂ．邋０．０１邋ｎｇ／ｍｌ濃度組；ｃ．邋ｌＯＯｐｇ／ｍｌ濃度組逡逑圖３邋ｗＴｃ－ＭＤＰ對ＲＡＷ２６４．７細胞生長影響的觀察０２００）逡逑Ｆｉｇ．邋３．邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋＂Ｔｃ－ＭＤＰ邋ｏｎ邋ｇｒｏｗｔｈ邋ｏｆ邋ＲＡＷ２６４．７邋Ｃｅｌｌｓ邋（ｘ２００）逡逑對照組ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞貼壁生長狀態(tài)良好，均勻平鋪于培養(yǎng)瓶底部，逡逑２０逡逑
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R96

【參考文獻】

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本文編號：2638409