【摘要】：[目的]研究锝亞甲基二膦酸鹽(99Tc-MDP)對(duì)RAW264.7及MC3T3-E1細(xì)胞的影響,為臨床治療頜骨成釉細(xì)胞瘤等破骨細(xì)胞引起的相關(guān)性骨吸收疾病提供理論依據(jù)。[方法]采用不同濃度的99Tc-MDP作用于小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞(RAW264.7)及小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞(MC3T3-E1),通過(guò)CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期,免疫細(xì)胞化學(xué)及Western blot檢測(cè)RANKL、OPG和RANK蛋白的表達(dá)情況。[結(jié)果]0.01 μg/ml 和100μg/ml 濃度99Tc-MDP 作用 RAW264.7 細(xì)胞 48h后,抑制率分別為6.09±2.38%和52.57±8.38%,不同濃度的99Tc-MDP對(duì)RAW264.7細(xì)胞的抑制作用明顯強(qiáng)于對(duì)照組(P0.05),并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,降低RANK 蛋白的表達(dá)。0.01μg/ml 和 100μg/ml 濃度99Tc-MDP 作用 MC3T3-E1 細(xì)胞48h后,存活率分別為123.08±2.87%和76.64±4.29%,與對(duì)照組比較,低濃度0.01 μg/ml 99Tc-MDP對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞具有明顯增殖作用(P0.05),促進(jìn)OPG和RANKL蛋白的表達(dá)。而高濃度1000μg/m199Tc-MDP對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞具有明顯抑制作用,抑制OPG和RANKL蛋白的表達(dá)。不同濃度的唑來(lái)膦酸(ZOL)對(duì)RAW264.7細(xì)胞和MC3T3-E1細(xì)胞的抑制作用明顯強(qiáng)于對(duì)照組(P0.05)。[結(jié)論]99Tc-MDP對(duì)RAW264.7細(xì)胞有抑制作用,隨濃度和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增大,誘導(dǎo)其凋亡和抑制RANK蛋白的表達(dá)。0.01μg/ml低濃度99Tc-MDP對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞作用有促增殖作用,并增加OPG蛋白的表達(dá)。ZOL對(duì)RAW264.7細(xì)胞和MC3T3-E1細(xì)胞均有抑制作用,且隨濃度和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。99Tc-MDP對(duì)頜骨成釉細(xì)胞瘤開(kāi)窗治療可能具有一定的輔助治療作用。
【圖文】：

結(jié)果逡逑１．細(xì)胞生長(zhǎng)曲線逡逑通過(guò)ＭＴＴ法檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線（圖１，２），ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞以ｌｘｌ0４個(gè)／逡逑孔、２ｘｌ0４個(gè)／孔、３ｘｌ0４個(gè)／孔、私１0４個(gè)／孔、５＞＜１0４個(gè)／孔、６ｘｌ0４個(gè)／孔、７ｘｌ0４個(gè)逡逑／孔、８ｘｌ0４個(gè)／孔的密度分別接種于９６孔板中培養(yǎng)２４ｈ均達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；４８ｈ逡逑時(shí)ｌｘｌ0４個(gè)／孔、２ｘｌ0４個(gè)／孔、３ｘｌ0４個(gè)／孔、４ｘｌ0４個(gè)／孔四組仍成對(duì)數(shù)生長(zhǎng)，其余逡逑各組趨于穩(wěn)定；７２ｈ時(shí)ｌｘｌ0４個(gè)／孔、２ｘｌ0４個(gè)／孔兩組仍成對(duì)數(shù)生長(zhǎng)，３ｘｌ0４個(gè)／逡逑孔、４ｘｌ0４個(gè)／孔、５ｘｌ0４個(gè)／孔、６＞＜１0４個(gè)／孔四組趨于穩(wěn)定，７ｘｌ0４個(gè)／孔、８＞＜１０４逡逑個(gè)兩組趨于下降。因此，ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞選擇３ｘｌ０４個(gè)／孔為接種密度（圖１）。逡逑二灥＿逡逑。５邋邐：＝逡逑0邋－—．邋邐邋邐邐邋—邋邐８ｎ0４逡逑１２ｈ邐２４ｈ邐３６ｈ邐４８ｈ邐６０ｈ邐７２ｈ邐８４ｈ邐９６ｈ逡逑時(shí)間逡逑圖１邐ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線逡逑Ｆｉｇ．邋１．邋Ｇｒｏｗｔｈ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ＲＡＷ２６４．７邋ｃｅｌｌｓ逡逑ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１邋細(xì)胞以邋ｌｘｌ0３邋個(gè)／孔、２ｘｌ0３邋個(gè)／孔、３ｘｌ0３邋個(gè)／孔、４ｘｌ0３邋個(gè)／孔、５ｘｌ0３逡逑個(gè)／孔、６ｘｌ0３個(gè)／孔、７ｘｌ0３個(gè)／孔、８ｘｌ0３個(gè)／孔的密度分別接種于９６孔板中培養(yǎng)逡逑２４ｈ時(shí)ｌｘｌ0３個(gè)／孔、２ｘｌ0３個(gè)／孔兩組未達(dá)對(duì)數(shù)期，其余各組均達(dá)對(duì)數(shù)期；４８ｈ后逡逑均達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；７２ｈ時(shí)ｌｘｌＯ４個(gè)／孔、２ｘｌ0４個(gè)／孔兩組仍成對(duì)數(shù)生長(zhǎng)

ｌＯＯ＾ｇ／ｍｌ）及對(duì)照組作用ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞和ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞４８ｈ后，對(duì)照組逡逑ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)狀態(tài)良好，均勻平鋪于培養(yǎng)瓶底部，細(xì)胞成類(lèi)圓形，逡逑形態(tài)大小不一，培養(yǎng)瓶中細(xì)胞漂浮物較少（圖３．ａ）。０．０１｜ｉｇ／ｍｒＴｃ－ＭＤＰ濃度組，逡逑ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞生長(zhǎng)受到輕微抑制，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)大小不一，培養(yǎng)瓶中見(jiàn)逡逑少量細(xì)胞漂浮（圖３．ｂ）。１０0ｎｇ／ｍｌ＂Ｔｃ－ＭＤＰ濃度組，ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞細(xì)胞生長(zhǎng)逡逑受到顯著抑制，，細(xì)胞皺縮體積變小，培養(yǎng)瓶中見(jiàn)大量細(xì)胞碎片及漂浮（圖３．ｃ）。逡逑■■■逡逑ａ．對(duì)照組；ｂ．邋０．０１邋ｎｇ／ｍｌ濃度組；ｃ．邋ｌＯＯｐｇ／ｍｌ濃度組逡逑圖３邋ｗＴｃ－ＭＤＰ對(duì)ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞生長(zhǎng)影響的觀察０２００）逡逑Ｆｉｇ．邋３．邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋＂Ｔｃ－ＭＤＰ邋ｏｎ邋ｇｒｏｗｔｈ邋ｏｆ邋ＲＡＷ２６４．７邋Ｃｅｌｌｓ邋（ｘ２００）逡逑對(duì)照組ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)狀態(tài)良好，均勻平鋪于培養(yǎng)瓶底部，逡逑２０逡逑
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2638409