【摘要】：目的探討PM2.5致大鼠肺損傷的作用機(jī)制以及百里醌(Thymoq uino ne,TQ)對(duì)PM2.5致肺損傷的保護(hù)作用機(jī)制。方法選用42只雄性Wistar大鼠,采用隨機(jī)數(shù)字表法分為7組(n=6只),分別為:A組(空白對(duì)照組:不做任何處理)、B組:(生理鹽水對(duì)照組:生理鹽水氣管滴注)、C組(TQ對(duì)照組:生理鹽水氣管滴注+TQ 40 mg/kg)、D組(PM2.5染毒組:氣管滴注7.5mg/kg的PM2.5)、E組(溶劑對(duì)照組:氣管滴注7.5 mg/kg的PM2.5+等體積TQ溶劑)、F組(TQ低劑量組:氣管滴注7.5mg/kg的PM2.5+TQ 20mg/kg)以及G組(TQ高劑量組:氣管滴注7.5 mg/kg的PM2.5+TQ 40mg/kg)。氣管滴注PM2.5和生理鹽水的各組,每天一次,持續(xù)14天。TQ灌胃的各組需實(shí)驗(yàn)前1天給予20 mg/kg或40 mg/kg,每天1次,直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。在最后一次染毒及灌胃24h后處死大鼠,收集各組大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF),并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)與上清液中乳酸脫氫酶(LDH)、總蛋白(TP)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的測(cè)定;同時(shí)收集各組肺組織,HE染色觀察大鼠肺組織病理變化及進(jìn)行病理評(píng)分,PCR法測(cè)定肺組織炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA表達(dá),根據(jù)試劑盒或Weste rn blotting測(cè)定氧化與抗氧化指標(biāo)MDA、SOD、GSH-Px、胞漿Nrf2、核內(nèi)Nrf2及HO-1蛋白表達(dá),采用Western blotting測(cè)定自噬標(biāo)記蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1的蛋白表達(dá)以及TUNEL染色檢測(cè)肺組織細(xì)胞凋亡情況。此外,對(duì)A、B、D三組,采用Western blotting檢測(cè)TN F-α、IL-6、NF-κB p65(胞漿、胞核)、HO-1及ET-1的蛋白表達(dá)水平。采用SPSS 22.0和Graphpad prism 5.0分析和作圖,所有計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)的形式表示,細(xì)胞計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)采用非參數(shù)檢驗(yàn)里面的Kruskal-Wallis檢驗(yàn),其余各組均數(shù)比較采用單因素方差分析(One Way ANOVA),組間兩兩比較若方差齊采用Tukey檢驗(yàn),若方差不齊采用Games-Howell,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果1.實(shí)驗(yàn)大鼠的一般體征:實(shí)驗(yàn)期間大鼠均存活。與A、B組相比,PM2.5染毒組大鼠精神狀態(tài)較差、對(duì)外界刺激反應(yīng)不敏捷、呼吸較急促、口鼻分泌物增多、活動(dòng)減少、皮毛干枯無光澤、體重增長(zhǎng)較緩慢。TQ低、高劑量組與PM2.5染毒組大鼠癥狀相似,但嚴(yán)重程度較輕。2.病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),與A、B組相比,PM2.5染毒組大鼠肺泡連接出現(xiàn)斷裂,肺泡腔、間質(zhì)內(nèi)可見紅細(xì)胞滲出、顆粒物沉積,肺間質(zhì)有明顯增寬、水腫、大量炎性細(xì)胞聚集浸潤(rùn)現(xiàn)象,病理評(píng)分較高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。TQ高劑量組較PM2.5染毒組大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)上有明顯改善且病理評(píng)分較低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),TQ低劑量組大鼠肺組織病理變化介于兩組之間。3.與A、B組相比,PM2.5染毒組大鼠BALF中LDH及TP含量顯著升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),TQ高劑量組較PM2.5染毒組大鼠BALF中TP及LDH含量降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01或P0.05)。4.與A、B組相比,PM2.5染毒組大鼠肺組織MDA含量,核內(nèi)Nrf2、HO-1抗氧化蛋白表達(dá)升高,胞漿Nrf2蛋白、SOD及GS H-Px抗氧化酶含量下降,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。TQ低、高劑量組較PM2.5染毒組大鼠肺組織胞漿Nrf2降低,核內(nèi)Nrf2、HO-1抗氧化蛋白表達(dá)增高,呈現(xiàn)劑量依賴性,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),TQ高劑量組較PM2.5染毒組大鼠肺組織MDA含量下降(P0.05)、GSH-Px抗氧化酶含量升高,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。5.與A、B組相比,PM2.5染毒組大鼠肺組織中胞漿NF-κB p65蛋白表達(dá)降低,而胞核NF-κB p65蛋白、TNF-αmRNA、IL-1β mRNA、IL-6 mRNA、TN F-α蛋白、IL-6蛋白、HO-1蛋白、ET-1蛋白表達(dá)以及BALF中TN F-α、IL-6、IL-1β、TP及LDH含量升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01或P0.05)。TQ低、高劑量組較PM2.5染毒組大鼠肺組織TNF-αmRNA表達(dá)降低,呈現(xiàn)劑量依賴性,同時(shí)BALF中IL-6、TP含量顯著降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),此外TQ高劑量組較PM2.5染毒組大鼠肺組織IL-1βmRNA表達(dá)及BALF中TNF-α、IL-1β及LDH含量降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.與A或B組相比,PM2.5染毒組大鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、巨噬細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞顯著升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。TQ低、高劑量組有降低炎性細(xì)胞的趨勢(shì)。7.與A、B組相比,PM2.5染毒組大鼠TUNEL染色在支氣管上皮細(xì)胞及肺泡上皮細(xì)胞中可見大量黃色或棕黃色的陽性細(xì)胞。TQ高劑量組較PM2.5染毒組肺組織中只可見少量TUNEL 陽性細(xì)胞,TQ低劑量組變化介于兩組之間。8.與A、B組相比,PM2.5染毒組大鼠肺組織標(biāo)記自噬蛋白的LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1蛋白表達(dá)升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。TQ低、高劑量組較PM2.5染毒組大鼠肺組織LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1蛋白表達(dá)降低,呈劑量依賴性,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01或P0.05)。結(jié)論1.PM2.5染毒可引起大鼠肺組織血管內(nèi)皮及肺泡上皮-毛細(xì)血管屏障功能受損,可通過誘導(dǎo)大鼠肺組織發(fā)生氧化抗氧化失衡、激活NF-κB信號(hào)通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和嚴(yán)重的細(xì)胞自噬,從而導(dǎo)致肺損傷。2.TQ對(duì)PM2.5染毒致肺損傷的保護(hù)機(jī)制主要可能是激活Nrf2/HO-1/GSH-Px信號(hào)通路發(fā)揮抗氧化作用,抑制NF-κB信號(hào)通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)、抑制細(xì)胞凋亡以及嚴(yán)重的細(xì)胞自噬。3.TQ對(duì)PM2.5所致肺損傷的保護(hù)作用具有劑量依賴性。
【圖文】：

閣１邋Ａ－Ｇ組大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)變化（ＨＥ染色，１００ｘ及４００Ｘ邋）逡逑（２）各組大鼠肺組織病理學(xué)評(píng)分逡逑各組大鼠肺組織病理?yè)p傷評(píng)分結(jié)果，如圖２所示。與Ａ、Ｂ組比，，ＰＭ２．５染逡逑k兇櫸渭⒅±砥婪窒災(zāi)募櫻型臣蒲б庖澹ǎ校煎澹埃埃擔(dān)�，而ＴＱ竾`亮孔榻希校停玻靛義先緆屑⒉±恚簦娣紙檔�，具有统计学测牃eǎ校

本文編號(hào)：2629933