【摘要】：肺損傷是由各種直接和間接致傷因素導(dǎo)致的疾病。肺損傷產(chǎn)生時(shí),肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮-上皮屏障受損、炎癥細(xì)胞浸潤以及氧化應(yīng)激損傷等使得肺內(nèi)聚集的大量中性粒細(xì)胞被激活;大量氧自由基和活性氧引起的氧化應(yīng)激,造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫及低氧性呼吸功能不全。嚴(yán)重時(shí)可誘發(fā)急性呼吸窘迫綜合征(ARDS),其發(fā)病率和死亡率一直居高不下,這對(duì)公共衛(wèi)生健康造成很大影響。肺損傷的誘導(dǎo)因素包括肺部感染、吸入性損傷(包括有毒氣體、胃酸反流、溺水等)、機(jī)械性損傷、放化療的醫(yī)源性肺損害、重癥胰腺炎、膿毒血癥或者嚴(yán)重非胸部創(chuàng)傷等。綠原酸是一種重要的生物活性物質(zhì),具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用,已成為天然產(chǎn)物研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。但是由于其具多個(gè)烷羥基和酚羥基,因此很不穩(wěn)定,受熱或者見光易分解,目前,綠原酸(CGA)在體內(nèi)的抗氧化作用研究也較少。本文分兩個(gè)部分:1基于綠原酸性質(zhì)和肺吸入給藥特點(diǎn),將綠原酸制備成綠原酸包合物,通過氣管插管給藥使藥物直接作用于肺組織,治療過氧化氫(H_2O_2)致急性肺損傷(ALI)并評(píng)價(jià)其藥效;2建立小鼠放射性肺損傷模型,并探討綠原酸口服是否能夠防治放射性肺損傷(RILI)),并初步探尋其潛在機(jī)制。1綠原酸包合物的制備及性質(zhì)研磨法制備綠原酸包合物。按綠原酸:β-環(huán)糊精(β-CD)(mol:mol)為1:1的處方量,經(jīng)冷凍干燥獲得綠原酸包合物(CGA-β-CD)白色粉末。用HPLC法測定綠原酸包合物載藥量達(dá)21.9%,漏斗法測定休止角為28.98±0.072°,流動(dòng)性較好。綠原酸包合物的粒徑D_(50)值為11.57±0.11μm。量筒法測定堆密度0.2040±0.0024g/cm~3,經(jīng)計(jì)算得,空氣動(dòng)力學(xué)粒徑(D_a)為5.35±0.046μm。掃描電鏡觀察CGA-β-CD粉末顆粒狀,較為均勻。體外沉積率的測定綠原酸包合物粉末在肺部的沉積率達(dá)23.9%,可有效進(jìn)入肺部深處。2綠原酸的細(xì)胞毒性四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法考察綠原酸對(duì)人支氣管上皮BEAS-2B細(xì)胞的細(xì)胞毒性。MTT實(shí)驗(yàn)顯示,在3.91~500μM濃度下的綠原酸對(duì)BEAS-2B細(xì)胞沒有明顯的毒性,綠原酸的安全性較好,在此濃度范圍內(nèi)可用于藥效學(xué)考察。3綠原酸及其包合物對(duì)急性肺損傷大鼠的保護(hù)作用采用H_2O_2溶液經(jīng)氣管噴入建立急性肺損傷(ALI)大鼠模型后,動(dòng)物分為5組:正常對(duì)照組;模型組;CGA-β-CD肺部給藥組;CGA肺部給藥組;地塞米松肺部給藥組。HE染色觀察肺組織病理變化,ELISA法檢測肺泡灌洗液中的TNF-α和IL-1β含量,檢測肺組織中還原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量。組織病理學(xué)顯示CGA-β-CD與CGA對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的ALI有明顯治療作用;與模型組相比,CGA-β-CD組肺泡灌洗液中TNF-α和IL-1β明顯降低,肺組織中MDA水平明顯降低,GSH水平明顯升高。CGA和CGA-β-CD能通過抑制炎性因子、減輕氧化損傷等作用減輕大鼠ALI。4放射性肺損傷模型的建立C57BL/6J小鼠全肺單次14、16、18Gy照射,劑量率為1.325Gy/min,觀察小鼠一般情況和4周、8周的組織病理學(xué)變化,通過蘇木精伊紅染色法(HE)染色、Masson染色、ELISA法檢測小鼠肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α、IL-1β的水平等確定成功建立放射性肺損傷模型。組織病理學(xué)顯示正常對(duì)照組小鼠的肺泡、毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)完整清晰,無滲血滲液等表現(xiàn)。模型組小鼠肺組織病理學(xué)在4周、8周均有組織間質(zhì)充血水腫,大量炎性細(xì)胞浸潤,及膠原纖維和細(xì)胞外基質(zhì)的廣泛沉積。模型組肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6和IL-1β明顯升高(P0.01)。5綠原酸對(duì)放射性肺損傷小鼠的保護(hù)作用C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、照射對(duì)照組、給藥治療組(照射+預(yù)防治療),陽性對(duì)照組氨磷汀(WR2721)組。照射對(duì)照組、給藥治療組(照射+預(yù)防治療)和陽性對(duì)照組WR2721組小鼠用自行設(shè)計(jì)的固定、屏蔽裝置對(duì)小鼠行單次X射線胸部照射,總劑量18Gy。分別于照射后4周、8周處死小鼠取材。照射后觀察小鼠的一般情況,取第4周、8周小鼠右肺組織采用HE染色和Masson染色,觀察各組小鼠肺組織病理學(xué)形態(tài)改變;采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法檢測各組小鼠在第4周、8周時(shí)采集的肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6和IL-1β含量;采用免疫組織化學(xué)染色法(IHC)檢測各組小鼠4周、8周的肺組織中TNF-α、IL-β1、α-SMA蛋白表達(dá)。組織病理學(xué)顯示CGA對(duì)RILI有明顯治療作用;與模型組相比,給藥治療組小鼠在4周、8周時(shí),CGA組肺泡灌洗液中IL-6和IL-1β明顯降低,表明CGA能通過抑制炎性因子等作用減輕小鼠RILI的早期肺損傷。6綠原酸對(duì)放射性損傷的Beas-2B細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制探討流式細(xì)胞凋亡檢測綠原酸體外對(duì)放射性損傷的Beas-2B細(xì)胞凋亡的影響;通過γH2AX染色顯示CGA對(duì)放射損傷Beas-2B細(xì)胞DNA損傷的保護(hù)作用;檢測照射后細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生熒光強(qiáng)度,表明加CGA預(yù)處理24h的Beas-2B細(xì)胞內(nèi)ROS明顯減少,從而保護(hù)肺上皮細(xì)胞。蛋白免疫印跡雜交(Western Blot)檢測炎癥蛋白TGF-β1及COX-2蛋白表達(dá),可以看到250μM CGA預(yù)處理組可以減少炎癥蛋白的表達(dá)。
【圖文】：

圖 1 綠原酸（A）和 β-環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)（B）Figure 1 Structure of Chlorogenic acid(A)and β-CD(B)3 包合物

圖 1-2 CGA、 β-CD、 CGA 和 β-CD 的物理混合物、 CGA-β-CD 的 X 衍射圖 注：A.CGA B.β-CD；C. CGA 和 β-CD 的物理混合物；D. CGA-β-CDFig.1-2 XRD curves of CGA, β-CD, the physical mixture of CGAand β-CD,CGA-β-CD. A.CGA
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R96

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊云漢;趙雪秋;杜瑤;楊俊麗;陳文;李燕華;楊麗娟;釧永明;;長春胺與羥丙基-β-環(huán)糊精包合物的制備、表征及理論研究[J];中草藥;2019年02期

2 程靜;張友智;;鹽酸黃連素羥丙基-β-環(huán)糊精包合物及其口腔崩解片的制備與評(píng)價(jià)[J];解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào);2016年05期

3 羅見春;陳學(xué)梁;張景R，

本文編號(hào)：2626428