發(fā)布時(shí)間：2020-04-02 02:05

【摘要】：第一部分:Catha edulis F.(Khat)對(duì)消化道運(yùn)動(dòng)的影響,有效成份分析及作用機(jī)制背景和目的Catha edulis(Vahl)Forssk.Ex.Endal(Khat,卡塔)是一種常綠植物,廣泛種植于東非和阿拉伯半島�？ㄋ~子對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有輕微的興奮作用,咀嚼會(huì)產(chǎn)生欣快感,因此咀嚼卡塔葉在這些地區(qū)非常盛行,且逐漸擴(kuò)散到其他國家。除了中樞神經(jīng)系統(tǒng)以外,研究提示卡塔葉可以抑制腸道的運(yùn)動(dòng),產(chǎn)生便秘等不良反應(yīng),但機(jī)制不清。故此我們?cè)O(shè)計(jì)研究卡塔葉提取物對(duì)動(dòng)物腸道運(yùn)動(dòng)的影響,并探討可能的作用機(jī)制。方法和研究?jī)?nèi)容在體實(shí)驗(yàn)部分選取瑞士白化小鼠,喂食不同劑量的卡塔葉提取物(100 mg/kg,200 mg/kg和400mg/kg),觀察其對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的影響。carmine red溶液給小鼠灌胃,通過記錄紅色糞便排出時(shí)間反應(yīng)全腸推進(jìn)時(shí)間(GI transit time,GITT);灌胃碳粉,計(jì)算碳粉推進(jìn)率記錄小腸推進(jìn)功能;通過觀察結(jié)腸玻璃珠排出時(shí)間反映結(jié)腸推動(dòng)能力;記錄糞便的含水量。離體實(shí)驗(yàn)部分采用小鼠結(jié)腸和大鼠回腸制備離體肌條,觀察卡塔葉對(duì)離體腸道平滑肌收縮的影響。結(jié)果在體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),不同劑量的卡塔葉提取物(100mg/kg,200 mg/kg和400mg/kg)均顯著升高GITT(P0.001for 100 mg/kg and 200 mg/kg vs對(duì)照組,,P0.01 mg/kg for 400 mg/kg vs對(duì)照組),延長結(jié)腸玻璃珠排出時(shí)間(P0.01 vs對(duì)照組for 200 mg/kg,P0.05 vs對(duì)照組for 100 mg/kg and 400 mg/kg),提示抑制結(jié)腸排空�？ㄋ~提取物100 mg/kg,200 mg/kg and 400 mg/kg)后小腸內(nèi)碳末推進(jìn)率分別減少了 67%(P0.01),52%(P0.01)和80%(P0.05,vs對(duì)照組)。和對(duì)照組相比,喂食卡塔葉后糞便含水量顯著降低(P0.001)。在體實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示卡塔葉提取物可以抑制胃腸道運(yùn)動(dòng)。離體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),卡塔葉提取物以劑量依賴性模式抑制小鼠結(jié)腸和大鼠回腸肌條的收縮反應(yīng)(p0.05,vs對(duì)照組)。三個(gè)劑量的卡塔葉提取物(0.01 mg/mL,0.1 mg/mL和1 mg/mL對(duì)小鼠結(jié)腸肌條自發(fā)性收縮的抑制分別為10%、22%和 50%,IC50為 0.1986 mg/mL(CI 95%:0.07853-0.5023 mg/mL,n=8)。陽性對(duì)照藥物維拉帕米(0.01-0.1 μM)抑制小鼠結(jié)腸肌條的自發(fā)性收縮�？ㄋ~提取物(0.2 mg/ml)和維拉帕米(0.05 μM)對(duì)對(duì)結(jié)腸自主收縮的抑制分別為28%和33%。TTX(10 μM)預(yù)處理不影響卡塔葉的粗提取物(0.2 mg/ml)對(duì)小鼠結(jié)腸和大鼠回腸縱行肌的收縮抑制效應(yīng)�？ㄋ~提取物(0.05 mg/mL-0.5 mg/mL)和維拉帕米(0.01μM-0.1 μM)均可劑量依賴性抑制高鉀誘發(fā)的小鼠結(jié)腸肌條收縮,卡塔葉提取物和維拉帕米的效應(yīng)類似。鈣蓄積實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示卡塔葉提取物(0.05 mg/mL-0.5 mg/mL)和陽性對(duì)照藥維拉帕米(0.01 μM-0.1 μM)可降低小鼠結(jié)腸和大鼠回腸對(duì)鈣離子濃度升高的反應(yīng),使鈣離子濃度反應(yīng)曲線右移。結(jié)論卡塔葉的粗提取物抑制腸道運(yùn)動(dòng),這可能是咀嚼卡塔葉人群易發(fā)便秘的原因,其作用可能是通過阻斷鈣離子通道實(shí)現(xiàn)的。第二部分:卡塔葉提取物對(duì)大鼠結(jié)腸縱行肌運(yùn)動(dòng)的影響及其有效成份分析背景和目標(biāo)動(dòng)物和臨床研究結(jié)果均提示khat抑制胃腸道運(yùn)動(dòng)�？ㄋ~含生物堿、單寧、維生素、礦物質(zhì)和黃酮類多種化合物,對(duì)不同系統(tǒng)產(chǎn)生特異性影響。有研究發(fā)現(xiàn)單寧和類黃酮可抑制胃腸的運(yùn)動(dòng)。我們第一部分的研究證實(shí)卡塔葉提取物抑制動(dòng)物的胃腸道運(yùn)動(dòng),抑制結(jié)腸排空,可能與鈣通道有關(guān)。在這一部分中,我們利用觀察大鼠結(jié)腸縱肌收縮的方法,設(shè)計(jì)明確卡塔葉抑制腸道運(yùn)動(dòng)的有效成分。方法制備大鼠結(jié)腸縱行平滑肌條,記錄離體肌條收縮,用于評(píng)價(jià)卡塔葉提取物和不同組分的效應(yīng)。為了鑒定有效化合物,我們將粗提取物分級(jí)并使用柱色譜(CC)和高效液相色譜(HPLC)進(jìn)行亞分級(jí)分離。在分餾過程中,將部分粗提物用MCI-凝膠(MeOH-H20,30:70至90:10)進(jìn)行分離,得到12個(gè)亞級(jí)分,Fr.1-Fr.12,通過Sephadex LH-20(MeOH)進(jìn)一步分離活性級(jí)分,得到11個(gè)亞級(jí)分,Fr.2.1-Fr.2.11,然后通過半制備型HPLC(MeOH-H 2 0,32:68,1.5mL/min)進(jìn)一步純化活性亞組份。評(píng)估所有組份和亞組份對(duì)結(jié)腸縱行肌條運(yùn)動(dòng)的影響以鑒定發(fā)揮作用的化合物。質(zhì)譜和NMR光譜數(shù)據(jù)闡明用于鑒定活性化合物。結(jié)果卡塔葉粗提取物(0.05mg/mL～0.5mg/mL)抑制大鼠結(jié)腸縱肌條的自發(fā)收縮達(dá)16%～68%(P0.001-0.05)。在第一輪分級(jí)分離期間獲得的12個(gè)組分中,Fr.1和Fr.2(0.5mg/mL)可以抑制大鼠結(jié)腸條的自發(fā)收縮,而只有Fr.2在低劑量(O.1mg/mL和0.05mg/mL)顯著抑制結(jié)腸肌條的自發(fā)性收縮(P0.05)。因此,基于這些結(jié)果,我們用Sephadex LH-20(MeOH)進(jìn)一步分離Fr.2,得到1 1個(gè)亞級(jí)分(Fr.2.1-Fr.2.11)。在第二輪亞組分中,Fr.2.7,Fr.2.9,Fr.2.10和Fr.2.11 在0.1mg/mL劑量下顯著抑制結(jié)腸運(yùn)動(dòng),抑制效能分別達(dá)到41%、50%、42%和29%,而對(duì)照組僅被抑制6%(P0.05,0.01)。較低劑量的Fr.2.7、Fr.2.9和Fr.2.10(0.05mg/mL)也可抑制結(jié)腸肌條的收縮(P0.05)。通過半制備型HPLC(MeOH-H 2 O,32:68,1.5mL/min)進(jìn)一步純化 Fr.2.7、Fr.2.9和 Fr.2.10,得到5種化合物,用NMR和質(zhì)譜鑒定化合物。通過文獻(xiàn)比對(duì)NMR和質(zhì)譜數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),來自Fr.2.7,Fr.2.9和Fr.2.10和Fr.2.11的純化化合物是黃酮類化合物,包括楊梅素、槲皮素、山奈酚、三葉草和sepinol。在五種已鑒定的黃酮類化合物中,槲皮素、山奈酚和楊梅素(0.1 mg/mL)抑制結(jié)腸縱肌條的自發(fā)收縮達(dá)49%、44%和29%(P0.01-0.05)。結(jié)論卡塔葉提物松弛大鼠結(jié)腸縱行肌的有效成份是黃酮類化合物,包括槲皮素,山奈酚和楊梅素。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R965
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本文編號(hào)：2611288