【摘要】：隨著人口數(shù)量的不斷增加,生態(tài)環(huán)境遭到破壞,導(dǎo)致環(huán)境中二氧化碳釋放量不斷的增加,最終全球變暖、臭氧空洞大量形成。因此,紫外線大量的透過空洞,輻射到地球表面。紫外線中的中波長紫外線UVB是主要造成皮膚損傷的紫外線,可以引起皮膚的光老化,造成皮膚損傷。所以保護(hù)皮膚免受UVB對皮膚的老化成為目前研究的熱點(diǎn)。本研究以兩種羅非魚皮肽TGAGT和LSGTGP為材料,研究其抑制UVB(UltravioletB)誘導(dǎo)HaCaT角質(zhì)細(xì)胞光老化的機(jī)制。以不同劑量的UVB輻射HaCaT細(xì)胞,通過噻唑藍(lán)比色法(MTT)篩選出導(dǎo)致細(xì)胞半數(shù)致死量劑量為30 mJ/cm~2,建立了細(xì)胞損傷模型;通過MTT法證實(shí)兩種羅非魚皮肽TGAGT和LSGTGP在10-100μM的濃度范圍內(nèi)沒有細(xì)胞毒性,并證實(shí)該濃度范圍內(nèi)有對UVB輻射后的細(xì)胞活力提高的作用。將兩種羅非魚皮肽分別作用于HaCaT細(xì)胞4h再經(jīng)UVB輻射后培養(yǎng)24h,DNA氧化損傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩種羅非魚皮肽對UVB輻射后的細(xì)胞氧化損傷的DNA具有保護(hù)作用;DCFH-DA法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兩種羅非魚皮肽對UVB輻射細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的產(chǎn)生起到抑制作用,蛋白免疫印跡法(WB)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩種羅非魚肽可以增加Glu和SOD含量的表達(dá),維持細(xì)胞內(nèi)抗氧化的水平;兩種羅非魚皮肽保護(hù)由UVB輻射后的HaCaT細(xì)胞,通過WB結(jié)果表明兩種肽經(jīng)過UVB輻射后,HaCaT細(xì)胞中MAPK信號通路中,p38、JNK和ERK蛋白表達(dá)量增加,當(dāng)細(xì)胞經(jīng)羅非魚皮肽TGAGT保護(hù)后,磷酸化的p38和JNK蛋白表達(dá)量下降。然而,對ERK的磷酸化沒有起到抑制性作用。隨著羅非魚皮肽LSGTGP的濃度升高,磷酸化的p38、JNK和ERK蛋白表答逐漸減少;WB實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明經(jīng)兩種肽保護(hù)后再UVB輻射后,磷酸化的p65和IκB蛋白的表達(dá)降低。通過細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,兩種羅非魚皮肽TGAGT和LSGTGP保護(hù)的HaCaT細(xì)胞,隨著肽濃度的增加,細(xì)胞中p65的入核情況逐漸減弱,這一結(jié)果直觀的說明了兩種羅非魚皮肽能夠抑制由UVB輻射HaCaT細(xì)胞p65的入核,抑制p65的表達(dá);ELISA實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證兩種肽可以降低受UVB輻射后HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-9的分泌,減少了MMP-1和MMP-9的過度表達(dá),使其不能對膠原蛋白過度的降解,因此對膠原起到了保護(hù)作用。同時,兩種羅非魚魚皮肽還可以提高I型膠原蛋白的含量,提高I型膠原蛋白自我的修復(fù)能力。因此,兩種羅非魚皮肽TGAGT和LSGTGP可以減緩因UVB輻射造成的皮膚損傷,對UVB造成的皮膚光老化起到保護(hù)的作用;因此,兩種羅非魚皮肽可以抑制通過ROS產(chǎn)生的氧化應(yīng)激,及其介導(dǎo)的MAPK和NF-κB信號通路,進(jìn)而控制細(xì)胞中的MMPs并提高細(xì)胞中膠原蛋白的含量,具有抑制UVB誘導(dǎo)HaCaT角質(zhì)細(xì)胞的光老化作用。
【圖文】：

圖 1-1 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線Fig 1-1 Experimental technical route1.8 本課題研究的目的和意義魚類廢棄物是蛋白質(zhì)，肽和氨基酸的重要來源，具有開發(fā)新型營養(yǎng)保健品的巨大潛力，可替代或?qū)⒑铣伤幬锏臐撛谟泻ψ饔米钚』�。此外，使用這種技術(shù)可以達(dá)到雙重目的，即從廉價和豐富的原料開發(fā)高附加值產(chǎn)品，并最大限度地減少魚類廢物的污染潛力。在過去幾十年中，關(guān)于魚類副產(chǎn)品回收及其潛在生物活性的知識大大增加。盡管如此，需要更多的研究來更好地理解魚類副產(chǎn)物蛋白質(zhì)水解物發(fā)揮其生物活性的機(jī)制。此外，必須進(jìn)行進(jìn)一步的體內(nèi)研究以回答它們在機(jī)體中的吸收和生物利用度的問題，以開發(fā)用于人類功能性食品的營養(yǎng)保健品和針對多種疾病的天然藥物的食品添加劑。本課題的研究，通過查閱大量關(guān)于羅非魚魚皮多肽的相關(guān)文獻(xiàn)，選取兩種羅非魚魚皮肽 TGAGT 和 LSGTGP[124-125]，并根據(jù)序列進(jìn)行合成。并對其跟蹤分析兩種樣品是否具備抑制光老化的作用，研究其活性機(jī)制。為預(yù)防 UVB 誘導(dǎo)皮膚光老化的海洋

圖 2-1 UVB 輻射對 HaCaT 細(xì)胞相對活力的影響Fig 2-1 Effect of UVB radiation on the relative viability of HaCaT cells性實(shí)驗(yàn)種羅非魚皮肽 TGAGT 和 LSGTGP 的毒性進(jìn)行檢測，分別的濃度為 10、20、50 和 100 μM 的兩種肽培養(yǎng)生長狀態(tài)良好的MT 法檢測細(xì)胞活力，，結(jié)果如圖 2-2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種羅SGTGP 濃度在 10、20、50 和 100 μM 時，與空白組相比，加樣力不受影響，表示在該濃度范圍內(nèi)，兩種樣品不具有細(xì)胞毒性進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，
【學(xué)位授予單位】：廣東海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R96

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 M. C. M. Beveridge;黃思帆;周秀坤;;羅非魚的育苗及其設(shè)施[J];國外水產(chǎn);1988年02期

2 劉躍;李樹瀅;張永根;韋鐵梅;劉成貴;;大伙房水庫網(wǎng)箱養(yǎng)殖羅非魚試驗(yàn)[J];水利漁業(yè);1988年05期

3 王麥林;;工廠余熱水養(yǎng)殖紅羅非魚生長的分析[J];水產(chǎn)養(yǎng)殖;1989年06期

4 王展鵬;;紅羅非魚海水養(yǎng)殖試驗(yàn)[J];黃渤海海洋;1989年02期

5 王文彬;;農(nóng)村土塘高效養(yǎng)殖羅非魚技術(shù)要點(diǎn)[J];漁業(yè)致富指南;2019年08期

6 王文彬;;羅非魚的土塘高效養(yǎng)殖[J];新農(nóng)村;2019年09期

7 莫有東;;冬季羅非魚營養(yǎng)性疾病的探討與防治[J];廣西水產(chǎn)科技;2001年01期

8 姜麗;;羅非魚池塘健康養(yǎng)殖技術(shù)[J];河南農(nóng)業(yè);2019年02期

9 梁龍子;陳振國;;羅非魚夏季養(yǎng)殖管理技術(shù)[J];養(yǎng)殖與飼料;2019年09期

10 余明海;;淺談如何提高羅非魚苗種培育階段成活率的關(guān)鍵技術(shù)點(diǎn)[J];當(dāng)代水產(chǎn);2017年12期

相關(guān)會議論文 前1條

1 代云云;袁永明;袁媛;張紅燕;;中國羅非魚出口貿(mào)易影響因素分析——基于引力模型的實(shí)證研究[A];2014中國漁業(yè)經(jīng)濟(jì)專家研討會論文集[C];2014年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 殷婷婷 林彥星;我國羅非魚拓國際市場須提高出口競爭力[N];中國國門時報;2017年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 歐陽茜茜;殼聚糖/羅非魚多肽生物醫(yī)用材料燙傷修復(fù)及止血性能研究[D];廣東海洋大學(xué);2019年

2 黃瑜;羅非魚NCC活性調(diào)控蛋白及效應(yīng)因子的鑒定與功能分析[D];廣東海洋大學(xué);2018年

3 楊慧贊;GnRH-A主動免疫對羅非魚生殖功能影響及其調(diào)節(jié)機(jī)理研究[D];廣西大學(xué);2019年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 趙立朝;廣西南部主要河流羅非魚建群狀況及形態(tài)差異分析[D];廣西大學(xué);2019年

2 梁鵬;兩種羅非魚皮肽抑制UVB誘導(dǎo)HaCaT角質(zhì)細(xì)胞光老化的機(jī)制研究[D];廣東海洋大學(xué);2018年

3 何潔;無乳鏈球菌對羅非魚頭腎損傷的病理學(xué)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

4 鐘丹丹;羅非魚耐寒相關(guān)基因PCR-SSCP多態(tài)性分析及其SNP位點(diǎn)篩選[D];廣西師范大學(xué);2016年

5 譚德階;羅非魚近緣種雜交系的建立及其性別連鎖分子標(biāo)記的篩選[D];西南大學(xué);2018年

6 蔣雄武;酶解羅非魚肉制備多肽的技術(shù)研究[D];廣東海洋大學(xué);2015年

7 盛周煌;羅非魚皮膠原蛋白降尿酸活性肽的研究[D];華南理工大學(xué);2018年

8 黃明;“三黃連”合劑預(yù)防羅非魚鏈球菌病的臨床藥效學(xué)研究及安全性評價[D];廣西大學(xué);2014年

9 曾斌昌;基于龍須菜寡糖的羅非魚片保鮮劑的開發(fā)及應(yīng)用[D];集美大學(xué);2015年

10 劉明濤;三種不同投飼策略對封閉型水體養(yǎng)殖羅非魚生長及水質(zhì)的影響[D];廣西大學(xué);2016年

本文編號：2606186