發(fā)布時(shí)間：2020-03-24 12:15

【摘要】：目的:制備地塞米松PLGA磁性微球,考察其外觀、跨距、產(chǎn)率、包封率、載藥量、磁響應(yīng)性等參數(shù);考察其體外釋放的代謝模型以及穩(wěn)定性;考察其生物相容性;考察其在大鼠慢性炎癥模型是否成功及造模后局部注射地塞米松不同劑型后配合或不配合磁療的治療方案,觀察其局部外觀、機(jī)械痛閾及病理切片,以評估其療效。方法:(1)地塞米松PLGA磁性微球通過乳化-溶劑揮發(fā)法制備,采用光學(xué)顯微鏡觀察其粒徑分布,HPLC方法檢測其產(chǎn)率、包封率、載藥量,用4000GS的外部磁場來觀察其磁響應(yīng)性。(2)體外釋放實(shí)驗(yàn):分別精密稱取投料比為1:3,1:4,1:5的地塞米松PLGA磁性微球各10mg,分別置于具塞燒瓶中,其中放入50ml的PBS溶液(磷酸緩沖鹽,PH=7.4)。將燒瓶放入恒溫水浴震蕩儀中,水位超過PBS溶液平面,震蕩條件:36-37℃,100-120 次/分。在 0.5h,1.0h,1.5h,2.0h,2.5h,3.0h 之后每間隔24小時(shí),采取上清液,直至第14天。每次移取樣本2ml,每次采樣后等量填充,所采集樣本儲存于4℃冰箱保存。(3)穩(wěn)定性測試:將不同投料比的微球(n≥500)分別置于EP管中,并將其放入4-8℃的冰箱中3個月,分別在第0、1、2、3月的第1日觀察其物理特征(光鏡下粒徑及外觀)是否有改變,并同時(shí)使用前述HPLC方法檢測其載藥量。(4)體外溶血實(shí)驗(yàn):將空白PLGA磁性微球置于已配制不同質(zhì)量濃度的大鼠去纖維的紅細(xì)胞懸液與生理鹽水/蒸餾水的混合物樣品中混勻,置于恒溫水浴震蕩儀中孵育3h,水溫為36-37℃。將上述處理的受試樣品離心,3000r/min,5min,留取上清液,室溫靜置30min。以陰性對照上清液為空白,根據(jù)540nm處光譜掃描得出的吸光值及溶血率。(5)體內(nèi)血液相容性:取3只SD大鼠,分別稱量體重,將供試品母液根據(jù)大鼠每100g體重注射0.8ml(高劑量),0.5ml(中劑量)及0.2ml(低劑量)計(jì)算注射劑量,分別經(jīng)尾靜脈注射大鼠體內(nèi)。分別于注射前及注射后0.5h,6h,12h,24h取血0.5ml,置于抗凝管(紫色)并行血常規(guī)檢查。(6)組織相容性實(shí)驗(yàn):大鼠七氟醚吸入麻醉后,剃除左側(cè)背部的毳毛,實(shí)驗(yàn)組皮下注射供試品母液1ml,對照組皮下注射1ml生理鹽水。第10天及30天后取注射部位皮膚及皮下組織做HE染色。(7)大鼠足底慢性炎性模型構(gòu)建:SD大鼠40只,220-250g,七氟醚麻醉后左后肢足底分別注射0.1mlCFA溶液。在之后2、4、6、8、10天觀察其外觀,用Von-Frey纖維絲測量機(jī)械痛閾,并在第10日在麻醉下取患足病理行HE染色。(8)微球治療模型大鼠的藥效評價(jià):將36只模型大鼠分為6組,分別為微球組、微球+磁療組、地米組、地米+磁療組、陽性對照組、磁療組,每組6只。分別注射地塞米松PLGA磁性微球(1:4)/地塞米松磷酸鈉注射液,按照分組加或不加磁療。在之后2、4、6、8、10天觀察其外觀,用Von-Frey纖維絲測量機(jī)械痛閾,并在第10日在麻醉下取患足病理行HE染色。結(jié)果:(1)地塞米松PLGA磁性微球,投料比分別為1:3,1:4,1:5的微球平均直徑(跨距,S1)分別為(27.47±8.78)um,(29.66±10.02)um,(30.14±11.2)um。產(chǎn)率(S2)分別為(87.02±2.25)%,(87.25±3.14)%,(84.00±5.53)%;包封率(S3)分別為(76.44±3.11)%,(78.89±2.42)%,(71.33±5.60)%;載藥量(S4)分別為(33.09±1.89)%,(30.33±2.01)%,(24.29±1.78)%;求和值(S)分別為(168.55±3.62),(167.47±4.15),(149.48±4.21)。以上微球表面光滑圓整,大小均一,分散性好,通針率高。(2)投料比為1:3,1:4,1:5的地塞米松PLGA磁性微球的體外釋藥模型分別為 Q=22.313In(t1/2)+28.651(R2=0.949),Q=4.0844t1/2+6.6602,(R2=0.977),Q=5.212t1/2+12.481,(R2=0.975);其第 2 日累計(jì)釋放分別為 79.12%,32.91%,40.33%,第 7 日的累計(jì)釋放率為 82.61%,62.74%,76.04%,第 14 日的累計(jì)釋放率為86.34%,66.99%,97.85%。(3)穩(wěn)定性測試:置于4-8℃冰箱后,其載藥量及粒徑無明顯變化。(4)體外溶血實(shí)驗(yàn):1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml的樣品吸光度分別為0.006,0.011,0.032;溶血率分別為0.5%,1.2%,3.3%。(5)體內(nèi)血液相容性:與給藥前血常規(guī)比較,高、中、低劑量組別的大鼠的注射后0.5h,6h,12h,24h的白細(xì)胞,紅細(xì)胞及血小板的計(jì)數(shù)的變化均在正常范圍內(nèi),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(6)組織相容性:大鼠注射部位病理切片(HE染色)第10天在40x10倍的視野中有少量炎癥細(xì)胞,第30天炎癥細(xì)胞較前增多,并且有纖維細(xì)胞增生及包裹。但與對照組比較無明顯差別。(7)大鼠慢性炎癥模型的構(gòu)建:大鼠患足外觀紅腫,機(jī)械痛閾顯著降低,病理(HE染色)可見大量炎性細(xì)胞浸潤。(8)微球治療模型大鼠的藥效評價(jià):微球(+磁療)組與地米(+磁療)組的效果比較,前2日的機(jī)械痛閾無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,第4-10日,微球+磁療組的機(jī)械痛閾明顯高于其他組別。病理切片提示與陽性對照比較除了磁療組外,其余各組的炎性細(xì)胞均明顯減少。改善程度于微球組與微球+磁療組最為明顯。結(jié)論:地塞米松PLGA磁性微球有一定的緩釋性、良好的生物相容性及針對慢性炎癥導(dǎo)致的慢性疼痛有明顯改善。
【圖文】：

圖２邋．邋ＰＬＧＡ／ＰＬＡ的電鏡下形態(tài)逡逑

圖２實(shí)驗(yàn)組大鼠注射第３０天皮膚表現(xiàn)逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R943;R96

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 魏爽;韓奇;鄭擁軍;王祥瑞;;上海市居民慢性疼痛患病現(xiàn)狀調(diào)查[J];中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志;2015年06期

2 張恒，

本文編號：2598303