【摘要】：近年來,由于納米技術(shù)的迅速發(fā)展,環(huán)境敏感型納米載體引發(fā)了人們的關(guān)注。在生物系統(tǒng)中,病理組織與正常組織之間的生理生化上的差異是藥物釋放的觸發(fā)器,另一方面,外部刺激,例如光、磁場和超聲可以在特定部位誘導(dǎo)載體破裂釋放藥物。與傳統(tǒng)納米載體相比,環(huán)境敏感型納米載體具有精準(zhǔn)遞送、可控性較強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。由于“瓦伯格效應(yīng)”腫瘤微環(huán)境呈弱酸性。利用這一特點(diǎn),設(shè)計(jì)一種pH敏感脂質(zhì)體,在腫瘤組織附近釋放藥物,實(shí)現(xiàn)制劑的主動(dòng)靶向。本課題中,小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)、多西紫杉醇(docetaxel,DTX)作為抗腫瘤藥物,pH敏感靶頭修飾的脂質(zhì)體作為藥物載體,旨在實(shí)現(xiàn)siRNA、DTX的有效轉(zhuǎn)染。研究最后合成了一種新型酸敏感功能肽,用于后續(xù)靶向載體的構(gòu)建。第一部分環(huán)境敏感脂質(zhì)體制備和表征目的:將低pH插入肽(pH low insertion peptides,pHLIPs)修飾脂質(zhì)體,制備共載脂質(zhì)體和載多西紫杉醇靶向脂質(zhì)體。方法:共載脂質(zhì)體(pH-Lip/DiD/si)的制備與表征:使用薄膜分散法制備脂質(zhì)體,后插入法將pHLIPs修飾在脂質(zhì)體表面,對制得的載藥脂質(zhì)體進(jìn)行粒徑、多分散系數(shù)(PDI)測定。載多西紫杉醇靶向脂質(zhì)體(DTX-PL)的制備與表征:使用薄膜分散法制備脂質(zhì)體,后插入法將pHLIPs修飾在脂質(zhì)體表面,對制得的DTX-PL進(jìn)行粒徑、多分散系數(shù)測定。結(jié)果:pH-Lip/DiD/si粒徑在160 nm左右,PDI小于等于0.3;DTX-PL粒徑小于200 nm,PDI小于等于0.4。結(jié)論:pH-Lip/DiD/si和DTX-PL粒徑、多分散系數(shù)基本符合要求,粒徑分布較集中。第二部分二維腫瘤細(xì)胞模型水平評價(jià)目的:選擇MCF-7細(xì)胞和Hela細(xì)胞為模型,考察pH-Lip/DiD/si胞內(nèi)攝取與分布。方法:p H-Lip/DiD/si作用于MCF-7細(xì)胞和Hela細(xì)胞,其中siRNA具有綠色熒光,DiD具有紅色熒光,Hoechst 33258對細(xì)胞核進(jìn)行染色,借助激光共聚焦顯微鏡考察pH-Lip/DiD/si在細(xì)胞中攝取和分布情況。結(jié)果:胞內(nèi)攝取與分布結(jié)果顯示pH-Lip/DiD/si能夠有效被細(xì)胞攝取,siRNA和DiD定位在胞漿中。結(jié)論:pH-Lip/DiD/si能夠?qū)崿F(xiàn)siRNA和DiD的有效攝取,并定位于胞漿。第三部分三維腫瘤細(xì)胞模型水平評價(jià)目的:選擇MCF-7腫瘤球和Hela腫瘤球?yàn)槟Ｐ?考察多西紫杉醇脂質(zhì)體對腫瘤球的抑制效果。方法:使用懸滴法構(gòu)建腫瘤細(xì)胞球,給藥0~5天,每天測量腫瘤球長短徑,計(jì)算腫瘤細(xì)胞球體積,綜合考察比較不同脂質(zhì)體對腫瘤球的抑制效果。結(jié)果:腫瘤細(xì)胞球毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示,多西紫杉醇脂質(zhì)體能夠抑制腫瘤生長,其中低pH插入肽修飾的脂質(zhì)體組呈現(xiàn)出最強(qiáng)的腫瘤球生長抑制效應(yīng)。結(jié)論:低pH插入肽修飾的納米脂質(zhì)載體具備顯著的腫瘤微酸環(huán)境敏感特性,可實(shí)現(xiàn)多西紫杉醇的有效轉(zhuǎn)染,抑制腫瘤球生長。第四部分酸敏感功能肽的研究目的:利用西佛堿反應(yīng),將NP肽與PP肽偶聯(lián),合成酸敏感肽NP-PP。方法:通過查閱文獻(xiàn)及多次預(yù)試驗(yàn),確定了幾種NP-PP的合成方法。30oC水浴弱酸條件下,充氮?dú)膺M(jìn)行攪拌32 h,對合成產(chǎn)物質(zhì)譜表征。結(jié)果:經(jīng)質(zhì)譜檢測,合成的酸敏感功能肽實(shí)際分子量與理論值一致,NP-PP合成成功。結(jié)論:成功合成了酸敏感功能肽,方法簡單,重現(xiàn)性好。
【圖文】：

共載脂質(zhì)體示意圖

圖 1-3 共載脂質(zhì)體、載 DTX 靶向脂質(zhì)體入胞示意圖Fig. 1-3Aschematic illustration of the mechanism for the cytosolic deliveryof pH-Lip/DiD/si/DTX-PL.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R943

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 孫偉紅;閆逍;楊少坤;向柏;杜青;曹德英;齊憲榮;;基于可激活細(xì)胞穿透肽修飾的納米載體系統(tǒng)的研究概況[J];中國藥學(xué)雜志;2015年23期

2 賀t，

本文編號：2595801