【摘要】：目的:1.考察SD大鼠分別灌胃及靜脈注射給予不同劑量PBA后血漿中PBA的濃度變化,研究PBA經(jīng)口及靜脈給藥染毒的吸收特性,以探索并完成PBA的毒代動力學(xué)研究。2.研究大鼠灌胃PBA后其在心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胃腸道、甲狀腺、生殖器、脂肪、皮膚等組織中的分布情況。3.研究大鼠灌胃PBA后,PBA在尿液、糞便和膽汁中的排泄情況。方法:1.建立SD大鼠血漿中4-氯-2氟-3-甲氧基苯硼酸(PBA)的LC-MS測定方法。取檢疫合格的SD大鼠,分為單次灌胃低劑量組(10 mg/kg),單次灌胃中劑量組(30rmg/kg),單次灌胃高劑量組(100mg/kg),單次靜注組(5mg/kg),每組8只,雌雄各半,染毒前禁食不禁水。動物染毒后從眼眶靜脈叢取血并肝素抗凝,取血量為0.3 mL。灌胃給藥組血樣采集時間分別為染毒前,染毒后10 min、30min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12 h 和 24 h。靜脈注射組血樣采集時間分別為染毒前,染毒后5min、15min、30min、45min、1h、2h、4 h、6 h、8 h、12 h和24 h。取血漿樣本,加入內(nèi)標(biāo)溶液(對甲氧基苯甲酸400ng/mL)渦旋混合1min;加入乙腈0.3 mL,渦旋混合2 min,離心10 min(13000 rpm),分離上清液于另一試管中,取10 μL進(jìn)行分析。采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析,獲得血漿中PBA的濃度,并采用DAS藥動學(xué)軟件擬合主要動力學(xué)參數(shù) AUC、Cmax、Tmax、MRT、t1/2。2.考察大鼠灌胃給予100mg/kg PBA 0.5h、2h、8h和168h后,PBA在心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胃腸道、甲狀腺、生殖器、脂肪、皮膚等組織和血漿中的分布情況。3.建立了大鼠尿液、糞便和膽汁中PB A的LC-MS測定方法,研究大鼠灌胃PBA 100 mg/kg后,尿液、糞便和膽汁中PBA的排泄情況。結(jié)果:1.SD大鼠分別灌胃及靜注給予不同劑量PBA后血漿中PBA的濃度變化:(1)血漿中的內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾PBA測定,血漿中PBA提取回收率為88.8%-94.4%,日間精密度6.4%-8.9%,日內(nèi)精密度3.85%-5.87%,準(zhǔn)確度為97.8%-105.5%。PBA的線性范圍為20-2500ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r0.9914。PBA 的定量下限為 20 ng/ml(RSD=9.67%)。(2)雌性大鼠 10mg/kg 劑量組單次灌胃染毒 AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分別是 3602.2±672μg/L*h、532±77 μg/L、2.625±0.75 h、10.19±2.36 h、7.69±3.44 h,絕對生物利用度為10.2%。30mg/kg劑量組灌胃染毒AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分別是 7533.3±3131.7μg/L*h、776±179μg/L、3±0.816h、10.54±3.71h、7.039±2.951h,絕對生物利用度為 7.1%。100mg/kg 劑量組灌胃染毒 AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2 分別是 10020.1±3225.7 μg/L*h、1120±79 μg/L、3±0.816 h、10.85±3.87 h、6.918±3.32 h,絕對生物利用度為 2.9%。5mg/kg劑量組單次靜注染毒AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分別是17575.2±5151.3μg/L*h、3465±1073 μg/L、0.083±0.00h、23.81±16.74h、18.29±12.82h。(3)雄性大鼠10mg/kg劑量組單次灌胃染毒AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分別是 2062.4±438.6 μg/L*h、339±131 μg/L、2.6±2.3 h、8.00±2.53 h、3.97±2.21 h,絕對生物利用度為8.9%。30mg/kg劑量組灌胃染毒AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分別是6421.5±1654.6μg/L*h、775±444 μg/L、2.625±1.109h、16.02±8.48h、11.86±8.38h,絕對生物利用度為9.2%。100mg/kg劑量組灌胃染毒 AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2 分別是 9119.9±3432.2μg/L*h、1426±866 μg/L、3±0.816 h、12.43±3.66 h、9.22±4.48 h,絕對生物利用度為 3.9%。5mg/kg劑量組單次靜注染毒AUC(0-∞)Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分別是11606.5±3650.5μg/L*h、3830±466μg/L、0.083±0.00h、17.37±20.55h、13.92±18.14h。2.建立了大鼠肝臟組織中PBA的LC-MS測定方法,組織樣品中內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾PBA的測定。組織勻漿中PBA的準(zhǔn)確度在100.9%-104.7%之間,日內(nèi)精密度在8.8%-10.3%之間,日間精密度在5.9%-8.4%之間。PBA的線性范圍為20-1600ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r0.9932。PBA的定量下限為20 ng/ml(RSD%=1.9%)。因此,本方法適合于組織樣品中PBA的分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),PBA在大鼠組織中分布廣泛,四個取樣時間點(diǎn)PBA在肝臟、胃腸道、腎臟、心臟、皮膚、脾臟等組織都廣泛分布,甲狀腺和生殖器組織中僅在8h時間點(diǎn)檢測到PBA的分布,皮膚組織中除0.5 h時間點(diǎn)外都能檢測到分布。值得注意的是在168 h后PBA仍在除甲狀腺和生殖器外的組織中有較高濃度的分布,提示該化合物在體內(nèi)的殘留時間較長。3.大鼠尿液、糞便和膽汁中的內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾PBA的測定。尿液中PBA檢測的日內(nèi)精密度在6.0%-10.5%之間、日間精密度在7.3%-12.0%之間;線性范圍為20-2000ng/ml;定量下限為20ng/ml(RSD%=9.0%),基質(zhì)效應(yīng)介于92.4%-111.5%。穩(wěn)定性研究結(jié)果表明:尿液樣品在-20 ℃冷凍保存30天、反復(fù)凍融3次、室溫放置24 h、處理后樣品4℃放置24h,均符合要求。大鼠單次灌胃100mg/kgPBA后,尿液、糞便和膽汁中PBA的累積排泄率均非常低,染毒168 h后的尿液和糞便樣品中PBA的總平均排泄率分別0.214±0.128‰、0.295士0.062‰,染毒48 h后的膽汁樣品中PBA的總平均排泄率為0.0607±0.0212‰。結(jié)論:1.本試驗結(jié)果表明,PBA灌胃給予大鼠后在大鼠體內(nèi)有一定的吸收,但絕對生物利用度在雌性和雄性大鼠中分別小于10.2%和9.2%,隨著染毒劑量的增加口服生物利用度下降顯著。PBA在大鼠體內(nèi)的暴露水平與染毒劑量成非線性動力學(xué)行為,系統(tǒng)暴露量沒有隨染毒劑量線性增加。2.PBA的組織分布結(jié)果提示其在肝臟、胃腸道、腎臟、心臟等中有高濃度的分布,而且組織中殘留時間較長。3.排泄研究結(jié)果表明,大鼠灌胃給予PBA后,尿液、糞便和膽汁中PBA的累積排泄均非常低,累積排泄率糞便尿液膽汁。
【圖文】：

取６只不同ＳＤ大鼠（雌雄各半）的空白血漿９０邋ｐＬ，置２．０邋ｍＬ離心管中，除不逡逑加內(nèi)標(biāo)外（以５邋ｐＬ甲醇代替），其余按“血漿樣品的處理”項下方法操作，在本實驗逡逑ＨＰＬＣ條件下進(jìn)樣１０［ｘＬ，進(jìn)行ＨＰＬＣ分析，獲得空白血漿色譜圖（圖１Ａ）；將一定逡逑濃度的ＰＢＡ標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及內(nèi)標(biāo)溶液加入空白血漿中，依同法操作，獲得相應(yīng)的逡逑色譜圖（圖１Ｂ），記錄內(nèi)標(biāo)和ＰＢＡ標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間；取灌胃染毒ＰＢＡ的ＳＤ大鼠逡逑１．５邋ｈ時間段血漿樣品，依同法操作，得色譜圖（圖１Ｃ）。該色譜條件下，，ＰＢＡ的逡逑出峰時間約為２．８ｍｉｎ，內(nèi)標(biāo)的出峰時間約為２．５邋ｍｉｎ。結(jié)果表明，在本實驗條件下，逡逑ＰＢＡ標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)分離良好，血漿中的內(nèi)源性不干擾測定。逡逑６逡逑

逡逑圖２．１Ｂ空白肝組織加入濃度為２００ｎｇ／ｍｌＰＢＡ的色譜圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．１Ｂ邋Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｂｌａｎｋ邋ｌｉｖｅｒ邋ｔｉｓｓｕｅｓ邋ａｄｄｉｎｇ邋２００ｎｇ／ｍｌ邋ＰＢＡ逡逑３７逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R99

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文編號：2593026