【摘要】：目的:抗腫瘤藥物的作用部位一般分布在細(xì)胞內(nèi),一定程度上血漿藥物濃度并不能完全代表藥物的療效,還需對(duì)藥物在細(xì)胞內(nèi)的行為進(jìn)行研究。所以本課題在實(shí)驗(yàn)室前期研究的基礎(chǔ)上旨通過建立細(xì)胞內(nèi)新藤黃酸(GNA)藥物濃度測(cè)定方法,研究新藤黃酸PEG化納米脂質(zhì)載體(P-GNA-NLC)細(xì)胞內(nèi)藥動(dòng)參數(shù)的變化,通過細(xì)胞毒性和凋亡實(shí)驗(yàn)研究藥物抗腫瘤作用;并通過細(xì)胞攝取機(jī)制的研究來探討P-GNA-NLC在細(xì)胞內(nèi)的動(dòng)力學(xué)過程和細(xì)胞藥效之間的關(guān)系。以期從細(xì)胞水平探究P-GNA-NLC的藥效和藥動(dòng)之間的關(guān)系,為P-GNA-NLC的評(píng)價(jià)提供理論依據(jù),為最終將新型的抗腫瘤藥物GNA應(yīng)用到臨床提供依據(jù),為新載體的優(yōu)化提供參考。方法:本文以人肺腺癌細(xì)胞A549為細(xì)胞模型,通過建立高效液相色譜法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GNA含量,研究P-GNA-NLC及GNA在A549細(xì)胞內(nèi)的藥動(dòng)參數(shù)及其攝取途徑,又通過MTT及流式細(xì)胞術(shù)研究GNA及P-GNA-NLC抗A549腫瘤細(xì)胞的作用。結(jié)果:(1)本文建立了簡單高效靈敏的細(xì)胞內(nèi)GNA含量的測(cè)定方法。(2)細(xì)胞藥動(dòng)學(xué)參數(shù)研究證明GNA經(jīng)過PEG化納米脂質(zhì)載體(P-NLC)包裹后,可以顯著的延長GNA在A549細(xì)胞中的半衰期及平均滯留時(shí)間,降低GNA的清除率。(3)本文經(jīng)過MTT及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)可以證明P-GNA-NLC可以很好的增強(qiáng)GNA的抗腫瘤作用。(4)通過攝取實(shí)驗(yàn)可知P-GNA-NLC通過巨胞飲、籠形及小窩轉(zhuǎn)白轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞中,GNA幾乎不通過籠形蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)途徑,GNA及P-GNA-NLC藥效不同可能是因?yàn)镻-GNA-NLC改變GNA的入胞途徑,從而改善了其藥動(dòng)參數(shù),進(jìn)而影響GNA的藥理效用。結(jié)論:本文從細(xì)胞水平探究P-GNA-NLC的細(xì)胞藥動(dòng)學(xué)和藥效之間的關(guān)系。細(xì)胞藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示P-GNA-NLC的藥動(dòng)參數(shù)與GNA的藥動(dòng)參數(shù)相比有明顯的改善。在相同給藥濃度下GNA初始細(xì)胞攝取量與P-GNA-NLC的相當(dāng)時(shí),藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示GNA的抗A549細(xì)胞作用比P-GNA-NLC的弱。為探究藥動(dòng)和藥效之間的關(guān)系,在A549細(xì)胞對(duì)GNA及P-GNA-NLC攝取機(jī)制實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)GNA及P-GNA-NLC進(jìn)入細(xì)胞的方式有共同的轉(zhuǎn)運(yùn)方式,也有不同的方式;GNA通過主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞的方式主要是經(jīng)過小窩蛋白和巨胞飲途徑,另外GNA還可以通過被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞;P-GNA-NLC主要通過主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的途徑是小窩蛋白、籠形蛋白及巨胞飲轉(zhuǎn)運(yùn)途徑,而不經(jīng)過被動(dòng)擴(kuò)散。結(jié)合藥動(dòng)參數(shù)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)及轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究,最終得出P-GNA-NLC可能通過改變GNA進(jìn)入細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑來改變GNA在A549細(xì)胞中的藥動(dòng)學(xué)參數(shù),從而改善GNA的抗A549細(xì)胞的作用。本論文初步證明細(xì)胞藥效、藥動(dòng)行為跟藥物進(jìn)入細(xì)胞的形式和途徑有一定的關(guān)系。本論文為進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用P-GNA-NLC提供理論依據(jù),為新制劑的開發(fā)與研究提供參考。
【圖文】：

第一章細(xì)胞內(nèi) GNA 含量分析方法的確立流速：1.0 mL/min柱溫：30℃檢測(cè)波長：360 nm進(jìn)樣量：20 μL3.4 專屬性實(shí)驗(yàn)與結(jié)果按照“3.2”制備空白細(xì)胞基質(zhì)、空白細(xì)胞基質(zhì)+新藤黃酸、空白細(xì)胞基質(zhì)+藤黃酸、新藤黃酸+藤黃酸甲醇溶液、空白細(xì)胞基質(zhì)+新藤黃酸+藤黃酸、細(xì)胞內(nèi)新藤黃酸+藤黃酸，按照“3.3”色譜條件”進(jìn)樣得色譜圖進(jìn)行比較，，結(jié)果顯示細(xì)胞基質(zhì)內(nèi)源性物質(zhì)不干擾待測(cè)樣品新藤黃酸的測(cè)定和內(nèi)標(biāo)物藤黃酸的測(cè)定，并且峰形良好。UvA

mL、50 μg/mL、10 μg/mL、1 μg/mL、0.5 μg/mL，并分別取 10 μL 加入至空白細(xì)胞基質(zhì)中，不同濃度的細(xì)胞含藥裂解液；精密量取“3.1.1”藤黃酸樣稀釋至濃度為 20 μg/mL，按“3.1.3”方法制備不同濃度樣品，按照“3.1.4”色”進(jìn)樣，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x, μg/mL）、峰面積比為縱坐進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 y=0.2462x+0.0114(R2=0.9994)。結(jié)果表明新藤 0.05~30 μg·mL-1的線性關(guān)系良好（t=49.61，P<0.01）結(jié)果見表 1 及圖 2。表 1 細(xì)胞裂解液中 GNA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果Tab.1 Results of standard curves of GNAin cell lysis (n=6)g/mL) 0.05 0.1 1 5 10 20 30 0.019 0.032 0.236 1.197 2.617 4.848 7.416
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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2 解方園;俞媛;耿雯倩;鐘延強(qiáng);;雙配體修飾聚合物泡囊的制備及細(xì)胞攝取[J];藥學(xué)實(shí)踐雜志;2015年01期

3 倪蘋;張經(jīng)緯;劉嘉莉;陳倩瑩;王廣基;周芳;;細(xì)胞藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展[J];藥學(xué)進(jìn)展;2014年12期

4 付寒;胡關(guān)蓮;何勤;;細(xì)胞穿膜肽TAT和可斷裂PEG共修飾載紫杉醇脂質(zhì)體的制備及體外促細(xì)胞凋亡作用[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2014年07期

5 朱邦勝;胡容峰;徐亞靜;陳建秀;葉蕾;車富強(qiáng);;新藤黃酸溫敏原位凝膠劑的設(shè)計(jì)與研究[J];安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

6 趙珊珊;張強(qiáng);李靜;周艷秋;單文衛(wèi);管潔;張藜莉;趙平;;香豆素6膠束的制備及在單層上皮細(xì)胞攝取和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)研究[J];中國藥學(xué)雜志;2014年10期

7 畢超;王言才;陳修平;鄭穎;;姜黃素納米混懸液的抗癌活性及細(xì)胞攝取研究[J];中藥新藥與臨床藥理;2013年04期

8 陳延杰;陳衛(wèi)東;;新藤黃酸固體脂質(zhì)納米粒的制備與質(zhì)量評(píng)價(jià)[J];中國藥業(yè);2011年21期

9 于蓮;崔丹;應(yīng)曉英;杜永忠;;表面修飾脂質(zhì)納米粒給藥系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2011年02期

10 張健;劉克辛;;藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的小腸吸收、腎臟排泄與藥物相互作用的關(guān)系[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2010年09期

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3 蔡卜磊;MRP1參與粘液表皮樣癌多藥耐藥機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

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4 黃發(fā)珍;Gell肽介導(dǎo)的靶向脂質(zhì)體抗腫瘤作用及其攝取機(jī)制的研究[D];蘇州大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2590574