【摘要】：目前,人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)由人血液提取,由于來源有限滿足市場的需求,且人血來源極其復雜,可能存在血源污染等潛在威脅,因此,迫切需要一種安全可靠、成本相對低廉的HSA替代品�；诳焖侔l(fā)展的基因重組技術(shù),可利用該技術(shù)來生產(chǎn)重組人血清白蛋白(recombinant human serum albumin,rHSA),由于該技術(shù)能夠克服傳統(tǒng)方法存在的血源供應不足以及血源污染等缺陷,目前已經(jīng)成為研究和生產(chǎn)rHSA的重點技術(shù)。由于臨床用藥和生化研究對轉(zhuǎn)基因豬血中分離純化出的rHSA的要求較高,因此,如何分離純化rHSA成為研究是關(guān)鍵。本研究中建立了一種從豬血中獲得高純度和高收率的rHSA分離純化方法,為規(guī)�；闹苽鋜HSA奠定基礎。本文由四章組成。第一章前言部分對HSA和rHSA進行了概述,簡單介紹了幾種常見的白蛋白的純化方法,并提出了本課題的研究目標與意義。第二章,首先采用低溫乙醇沉淀法的改良方法—熱乙醇沉淀法對豬血漿中rHSA進行粗提取。我們考察并優(yōu)化了熱乙醇沉淀法中反應體系pH、加熱溫度、恒溫反應時間和稀釋倍數(shù)等主要影響因素對rHSA提取效果的影響。由反相高效液相色譜色譜(RP-HPLC)純度表征結(jié)果可知,在pH6.5,65℃、40 min以及2倍稀釋倍數(shù)的最優(yōu)反應條件下,rHSA純度從豬血漿中的9.3%提高到熱乙醇沉淀法的69.5%。第三章,我們考察了陽離子、陰離子、陽-陰離子相結(jié)合和陰-陽離子交換色譜相結(jié)合的方法對熱乙醇沉淀粗純化后rHSA進行精純化的效果,并對色譜條件進行優(yōu)化。結(jié)果表明采用陰離子交換色譜法,對熱乙醇沉淀法粗純化的rHSA進行精純化,能達到最佳的純化效果,所得產(chǎn)物經(jīng)RP-HPLC純度表征結(jié)果為85.0%。第四章,為了進一步提高純度,采用兩種路線(反相色譜(路線一)和凝膠色譜法(路線二))對陰離子交換色譜法純化后的rHSA進行二次精純化。RP-HPLC表征結(jié)果,反相色譜和凝膠色譜法的產(chǎn)物純度均達到了100.0%。經(jīng)HPLC-MS/MS表征,兩種路線得到產(chǎn)物的純度分別約為97.33%和93.77%,總回收率分別約為41.1%和38.6%。盡管熱乙醇沉淀-陰離子-反相色譜(路線一)的純度和回收率相對于熱乙醇沉淀-陰離子-凝膠色譜法(路線二)均較高,但反相色譜的流動相中有機溶劑可能會導致目標蛋白發(fā)生變性,可能會破環(huán)蛋白的結(jié)構(gòu)從而限制了此純化路線的應用;而凝膠色譜法采用的是低濃度鹽緩沖液,條件更加溫和,利于保持蛋白在純化過程中的穩(wěn)定,更適用于rHSA的純化,因此最終采用路線二作為最終轉(zhuǎn)基因豬血中rHSA的純化方案。所建立的方法有望從轉(zhuǎn)基因豬血中提取出高純度rHSA,以實現(xiàn)其更廣泛的應用。
【圖文】：

圖 1-1 人血清白蛋白的分子的三維結(jié)構(gòu)圖1. The three-dimensional structure of human serum albumin mo成與代謝首先合成 HSA 的前體（prepro HSA），接著在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

26圖 2-1 不同 pH 值條件下，熱乙醇沉淀法提取的 rHSA 純度表征的反相色. 2-1 Purity characterization of rHSAafter thermal ethanol precipitation at differa reversed-phase liquid chromatography
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R914;Q78

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉丹丹;劉思國;陳建泉;許小琴;成國祥;;人血清白蛋白及其重組表達研究進展[J];生物技術(shù)通訊;2016年04期

2 王怡;;稻米生產(chǎn)人血清白蛋白技術(shù)[J];技術(shù)與市場;2010年06期

3 滿初日嘎;張英霞;張云;;重組人血清白蛋白的研究進展[J];生物醫(yī)學工程學雜志;2009年04期

4 ;我國成功研制稻米生產(chǎn)人血清白蛋白技術(shù)[J];廣東農(nóng)業(yè)科學;2009年12期

5 彭暉,余學清,婁探奇,方芳,周飛宇,尹培達;人血清白蛋白對近端腎小管上皮細胞骨調(diào)素和CD44表達的影響[J];中國病理生理雜志;2005年05期

6 黃明志,郭美錦,儲炬,杭海峰,莊英萍,張嗣良;重組人血清白蛋白發(fā)酵過程表達期的定量研究[J];生物工程學報;2003年01期

7 劉永東,王云山,蘇志國;重組人血清白蛋白生產(chǎn)工藝研究進展[J];微生物學通報;2003年05期

8 鄭新民,喬憲鳳,楊在清,魏慶信;轉(zhuǎn)人血清白蛋白基因豬的表達分析[J];經(jīng)濟動物學報;2002年02期

9 鄭新民,華文君,肖作煥;轉(zhuǎn)人血清白蛋白基因豬的整合與表達[J];湖北農(nóng)業(yè)科學;2002年05期

10 姚樹林,田嘉禾;~(99)Tc~m-人血清白蛋白掃描在小兒蛋白質(zhì)丟失性腸病中的運用[J];國外醫(yī)學(放射醫(yī)學核醫(yī)學分冊);2000年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 楊峰;卞傳兵;朱麗麗;趙更香;陳錦燦;葉小明;黃子祥;陳明晃;黃明東;;人血清白蛋白酯酶活性的結(jié)構(gòu)證據(jù)及其在藥物設計的應用[A];第十次中國生物物理學術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

2 鄭曉宇;何婷婷;孫洋洋;陳丹丹;杜傳榮;;一種咖啡酸衍生物的制備及其與人血清白蛋白相互作用研究[A];中國化學會第十七屆全國有機分析與生物分析學術(shù)研討會論文集[C];2013年

3 程小麗;黃強;李生海;郭思明;甘義磊;何麗君;;苦杏仁苷與人血清白蛋白的熒光光譜研究[A];甘肅省化學會第二十八屆年會暨第十屆中學化學教學經(jīng)驗交流會論文集[C];2013年

4 黃臻臻;王皓南;楊文勝;;基于金納米簇熒光增強效應的人血清白蛋白檢測方法[A];中國化學會第30屆學術(shù)年會摘要集-第三分會：納米傳感新原理新方法[C];2016年

5 何洋;寧婷婷;謝婷婷;仇晴川;張莉平;安娜;楊代常;;水稻胚乳細胞高效表達重組人血清白蛋白及產(chǎn)業(yè)化[A];中國植物生理學會第十次會員代表大會暨全國學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2009年

6 韓曉樂;李冉;李佳涵;劉義;;光譜法研究二氯喹啉酸與人血清白蛋白的相互作用[A];第六屆全國化學生物學學術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

7 彭暉;余學清;尹培達;婁探奇;方芳;周飛宇;;人血清白蛋白刺激人近端腎小管上皮細胞表達骨調(diào)素和CD44[A];“中華醫(yī)學會腎臟病學分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

8 王丹丹;喬曉娜;樊麗;雙少敏;;頭孢類抗生素與人血清白蛋白相互作用的光譜學研究[A];第十屆中國化學會分析化學年會暨第十屆全國原子光譜學術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

9 許小青;蔡稱心;;5-氟尿嘧啶與人血清白蛋白作用的機理研究[A];第十四屆全國有機電化學與工業(yè)學術(shù)會議暨中國化工學會精細化工專業(yè)委員會全國第182次學術(shù)會議會議論文摘要[C];2014年

10 王小茹;謝曉蕓;張雅珩;楊穎;陳興國;;利用分子模擬及光譜技術(shù)研究香蘭素與人血清白蛋白的相互作用[A];第十屆中國化學會分析化學年會暨第十屆全國原子光譜學術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 本報記者 李蘊明;楊代常：種出“人血清白蛋白”不是科幻[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2018年

2 本報駐鄂記者 錢忠軍 通訊員 朱明霞 吳江龍;用稻米“造血”，，這不是天方夜譚[N];文匯報;2017年

3 記者 李墨 通訊員 朱明霞;10年冷板凳煉就“黃金救命藥”[N];湖北日報;2017年

4 ;水稻種出人血清白蛋白？[N];北京日報;2011年

5 王懷民 趙鳳華;我國科學家從水稻中提取人血清白蛋白[N];糧油市場報;2009年

6 記者 戴勁松;我科學家利用稻米,生產(chǎn)出人血清白蛋白[N];新華每日電訊;2009年

7 實習記者 胡珉琦;楊代常：水稻產(chǎn)出人血清[N];北京科技報;2009年

8 戴勁松;武漢大學從稻米中成功提取生產(chǎn)人血清白蛋白[N];中國技術(shù)市場報;2009年

9 新文;人血清白蛋白有望從豬體中提取[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

10 記者 王春;基因重組人血清白蛋白項目邁向產(chǎn)業(yè)化[N];科技日報;2012年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 周喜敏;某些有機小分子與人血清白蛋白的相互作用研究[D];蘭州大學;2012年

2 林愛華;阿霉素與人血清白蛋白和心肌肌球蛋白的相互作用[D];武漢大學;2005年

3 唐江宏;有機小分子與人血清白蛋白的相互作用研究[D];蘭州大學;2006年

4 白國允;藥物與蛋白質(zhì)弱相互作用的NMR研究[D];中國科學院研究生院（武漢物理與數(shù)學研究所）;2005年

5 李穎;中藥有效成分與人血清白蛋白相互作用研究[D];蘭州大學;2007年

6 陳鎮(zhèn);植物源重組人血清白蛋白的殘留宿主雜質(zhì)研究[D];武漢大學;2014年

7 林朝陽;構(gòu)建可選擇性殺滅轉(zhuǎn)基因水稻并利用該體系表達人血清白蛋白[D];浙江大學;2008年

8 岳園園;某些染料、藥物小分子與蛋白質(zhì)的相互作用研究[D];蘭州大學;2010年

9 周喜敏;某些有機小分子與人血清白蛋白的相互作用研究[D];蘭州大學;2012年

10 張青;葡聚糖內(nèi)切酶在轉(zhuǎn)基因水稻種子中的表達及水稻種子中重組人血清白蛋白的純化[D];浙江大學;2013年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 余謙;轉(zhuǎn)基因豬血中重組人血清白蛋白分離純化方法研究[D];安徽醫(yī)科大學;2019年

2 彭榜婭;重組凝血因子Ⅻ的構(gòu)建及功能鑒定和兩種新型抗凝藥與人血清白蛋白結(jié)合位點初探[D];遵義醫(yī)科大學;2019年

3 龔含情;抗病毒藥物與蛋白的相互作用及分子模擬[D];上海師范大學;2019年

4 姚杰;LaPO_4:Eu/NaYF_4:Yb,Er納米晶的制備及其與人血清白蛋白的結(jié)合作用和應用于酸性品紅的檢測[D];遼寧大學;2018年

5 徐麗萍;熒光碳點的制備及其與人血清白蛋白的相互作用和作為熒光探針用于環(huán)丙沙星的檢測[D];遼寧大學;2018年

6 胡延喜;赤芍總苷在大鼠體內(nèi)藥代動力學和芍藥苷與人血清白蛋白相互作用研究[D];遼寧大學;2018年

7 彭雙周;長效性PAI-1抑制劑的設計及分子藥理活性研究[D];福建農(nóng)林大學;2018年

8 王燕波;近紅外及中紅外光譜分析技術(shù)用于表征人血清白蛋白和免疫球蛋白G結(jié)構(gòu)變化的研究[D];山東大學;2018年

9 吳銘芳;甘草酸偶聯(lián)人血清白蛋白包載白藜蘆醇肝靶向制劑的制備、表征與活性評價[D];東北林業(yè)大學;2017年

10 胡玉瑋;鹽酸小檗堿與人血清白蛋白相互作用研究[D];河北科技大學;2019年

本文編號：2590573