【摘要】：化學(xué)療法是治療癌癥尤其是黑色素瘤的主要手段,但是全身治療的方式增加了藥物的毒副作用,也增加了多藥耐藥的風(fēng)險(xiǎn)。聚合物納米粒因其特殊的納米結(jié)構(gòu),在藥物遞送方面有著良好的應(yīng)用前景。其中,以多糖為骨架以疏水性小分子修飾的兩親性聚合物具有低毒、生物相容性和生物可降解性等優(yōu)點(diǎn),其自組裝納米粒具有制備方法簡單、避免引入有機(jī)溶劑的優(yōu)點(diǎn),作為藥物遞送載體用于腫瘤治療的應(yīng)用受到廣泛關(guān)注。如何設(shè)計(jì)多功能的納米結(jié)構(gòu)提高納米粒的穩(wěn)定性、實(shí)現(xiàn)藥物的腫瘤微環(huán)境刺激的可控釋放、以及實(shí)現(xiàn)多治療手段合為一體,是目前聚合物納米粒面臨的重要挑戰(zhàn)。本文以多糖硫酸軟骨素作為親水性骨架并以疏水性小分子修飾,構(gòu)建了多種不同的兩親性聚合物并以此制備了穩(wěn)定性良好、藥物釋放可控的自組裝載藥體系。詳細(xì)考察了該聚合物結(jié)構(gòu)和納米粒結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系,以及取代度對(duì)納米粒性質(zhì)的影響,為納米粒作為載藥體系的應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。設(shè)計(jì)了集多種環(huán)境響應(yīng)為一體、多重治療手段為一體的“All in one”的納米載體,以期納米粒在腫瘤部位實(shí)現(xiàn)響應(yīng)性結(jié)構(gòu)解離,促進(jìn)藥物釋放,發(fā)揮抗腫瘤效果。在體內(nèi)外深入考察了藥物釋放機(jī)制、組織分布和抗腫瘤應(yīng)用效果。將理論與技術(shù)結(jié)合,為納米載體的應(yīng)用提供了設(shè)計(jì)思路。為深入研究聚合物結(jié)構(gòu)與納米粒的關(guān)系,首先設(shè)計(jì)了以已二酸二酰肼(ADH)修飾的硫酸軟骨素(CS)作為氨基修飾的骨架,構(gòu)建硫酸軟骨素-脫氧膽酸(CS-ADH-DOCA,CSAD)梳狀聚合物,并制備自組裝納米粒用于化療藥物多西紫杉醇(DTX)的遞送。通過調(diào)節(jié)聚合物中不同疏水性小分子的修飾比例,合成并制備不同取代度(DS,聚合物中100個(gè)糖環(huán)單元上的DOCA的數(shù)量)的CSAD納米粒。研究了取代度對(duì)于自組裝納米粒作為藥物遞送載體的自組裝能力、藥物釋放行為、腫瘤細(xì)胞攝取及對(duì)細(xì)胞殺傷能力的影響。在深入了解基于多糖的自組裝納米粒特性的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)環(huán)境響應(yīng)型多功能納米粒作為藥物遞送載體并對(duì)其抗腫瘤作用進(jìn)行研究。在合成CSAD聚合物基礎(chǔ)上,以含二硫鍵的胱胺(CYS)作為連接臂將DOCA修飾于CS上,合成了 CS-CYS-DOCA聚合物(CSCD),并以此構(gòu)建了還原/酶敏感的智能納米給藥系統(tǒng)用于DTX的遞送。期望該納米系統(tǒng)可以在腫瘤微環(huán)境高還原電勢下發(fā)生結(jié)構(gòu)中二硫鍵的斷裂,CS骨架可以在酶的作用下實(shí)現(xiàn)特異性降解,從而可以實(shí)現(xiàn)DTX在腫瘤細(xì)胞內(nèi)快速釋放,發(fā)揮抗腫瘤的效果�；诖思僭O(shè)對(duì)納米粒的敏感性裂解和藥物的敏感性釋放進(jìn)行了研究,對(duì)細(xì)胞攝取、藥物分布和抗腫瘤及其轉(zhuǎn)移的能力進(jìn)行了評(píng)價(jià)。在此基礎(chǔ)上,為提高納米粒的穩(wěn)定性且同時(shí)促進(jìn)藥物在腫瘤部位的快速釋放,提高抗腫瘤效果,將化學(xué)交聯(lián)與環(huán)境響應(yīng)相結(jié)合;將聲動(dòng)力療法(SDT)和化學(xué)療法聯(lián)合,期望建立更加有效的藥物遞送系統(tǒng)。使用上述合成的ADH修飾的CS作為氨基修飾的親水性骨架,選擇功能性疏水性小分子二氫卟吩e6(Ce6)作為疏水段(超聲敏感劑),通過ADH連接到CS骨架,并引入含二硫鍵的硫辛酸(LA)作為交聯(lián)劑,依次通過ADH連接到CS骨架,合成CS-Ce6-LA聚合物。以此結(jié)構(gòu)自組裝形成可逆交聯(lián)、還原/酶敏感、并結(jié)合化學(xué)療法和聲動(dòng)力療法為一體的智能納米給藥系統(tǒng)。期望該交聯(lián)納米系統(tǒng)在藥物遞送中面對(duì)高倍稀釋具有較高的穩(wěn)定性,在腫瘤微環(huán)境發(fā)生響應(yīng)性的去交聯(lián)和骨架降解,促進(jìn)藥物釋放,發(fā)揮化療的作用。同時(shí)Ce6在外加超聲的作用下,發(fā)揮聲動(dòng)力療法,誘導(dǎo)腫瘤凋亡。對(duì)該交聯(lián)納米粒的穩(wěn)定性、藥物的包載和響應(yīng)型釋放能力、細(xì)胞攝取進(jìn)行考察。同時(shí)在細(xì)胞水平對(duì)聲動(dòng)力療法的機(jī)制進(jìn)行深入考察,在體內(nèi)對(duì)化療-聲動(dòng)力聯(lián)合療法對(duì)腫瘤及腫瘤轉(zhuǎn)移的治療效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)。本論文主要研究內(nèi)容和結(jié)果主要概括如下:(1)構(gòu)建兩親性CSAD聚合物納米粒,考察取代度對(duì)納米粒的影響通過兩步酰胺反應(yīng),將疏水性小分子DOCA通過連接臂ADH修飾到硫酸軟骨素CS親水骨架上,構(gòu)建兩親性聚合物CSAD。通過控制DOCA與CS的投料比,獲得三種不同取代度的CSAD聚合物,紫外分光光度法定量 DOCA的取代度范圍為2.5%-7.0%。CSAD聚合物的CAC值在0.027-0.050 mg/ml范圍內(nèi)。通過探頭超聲方法成功制備了 CSAD聚合物自組裝納米粒,形成的納米粒形態(tài)呈球狀,水化粒徑分布均一且在160-190nm以內(nèi),Zeta電位在-18 mV到-27 mV之間。納米粒的溶血率均低于5%,表現(xiàn)出良好的生物相容性。采用超聲-透析方法制備載藥自組裝納米粒DTX-CSAD,當(dāng)藥物-聚合物質(zhì)量比為3:10時(shí),載藥量達(dá)到11.8%,粒徑分布在180 nm左右,納米粒呈現(xiàn)球體、形態(tài)圓整、分布均一。載藥納米粒的體外釋放呈現(xiàn)突釋-緩慢釋放兩個(gè)階段,對(duì)于納米粒來說,較高取代度的載藥納米粒具有較為延緩的釋放速率,120 h時(shí)DTX的釋放百分比隨著取代度的增加從75%增加到86%。細(xì)胞攝取結(jié)果證明了 CSAD納米�？赏ㄟ^CD44受體分子介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞實(shí)現(xiàn)細(xì)胞攝取,且具有一定的時(shí)間和濃度依賴性。細(xì)胞毒性結(jié)果表明,DTX-CSAD納米粒具有良好的細(xì)胞殺傷效果且細(xì)胞存活率隨著取代度的的增加而降低。綜上所示,CSAD納米粒中疏水端DOCA取代度對(duì)納米粒的自組裝行為和藥物遞釋有著一定的影響,取代度增加,粒徑降低,CAC值降低,藥物釋放速度減慢。這主要是因?yàn)樵趦捎H性骨架上,疏水基團(tuán)增加可以提高骨架疏水端分子間作用力,從而賦予納米粒更易于自組裝的能力,因此更易形成緊實(shí)的疏水內(nèi)核。包載疏水性藥物DTX后,DTX與DOCA之間疏水作用增強(qiáng),從而聚合物納米粒中的藥物更加難以釋放。此外,取代度越高,CSAD納米粒的細(xì)胞攝取量相應(yīng)增加,DTX-CSAD納米粒的細(xì)胞毒性越強(qiáng)。通過對(duì)取代度的深入研究,可調(diào)節(jié)取代度實(shí)現(xiàn)不同的藥物釋放速率、以達(dá)到不同的治療效果。(2)還原/酶響應(yīng)型CSCD納米粒的設(shè)計(jì)及抗腫瘤作用的研究將DOCA通過含有二硫鍵的CYS連接到CS上,構(gòu)建兩親性聚合物CSCD。CSCD聚合物可以在水溶液中自組裝形成納米粒,獲得還原/酶敏感的智能CSCD納米粒用于DTX的遞送。其CAC值較低(0.022-0.048 mg/ml),形成納米粒呈球狀,水化粒徑分布均一且在130-170 nm以內(nèi),Zeta電位在-18 mV到-22 mV之間;納米粒的溶血率均低于5%。通過優(yōu)化的超聲-透析方法制備了 DTX-CSCD載藥納米粒,當(dāng)藥物-聚合物質(zhì)量比為3:10時(shí),載藥量達(dá)到15.6%,粒徑分布在175 nm左右,納米粒形態(tài)圓整。CSCD納米粒具有良好的環(huán)境響應(yīng)性,在體外通過模擬腫瘤細(xì)胞環(huán)境中(GSH或/和Hyal-1酶的孵育下),CSCD粒徑分布從100-200 nm之間的單峰分布變成雙峰,這是因?yàn)镃SCD納米粒中親水骨架CS在酶的作用下發(fā)生降解或氧化或CSCD納米粒中二硫鍵在GSH的作用下斷裂導(dǎo)致納米粒親水疏水作用失衡,從而發(fā)生結(jié)構(gòu)解離和粒徑改變。考察DTX-CSCD載藥納米粒的藥物釋放,在GSH或Hyal-1酶作用下,藥物釋放速率均有一定的提升,在GSH/Hyal-1酶的協(xié)同作用,釋放速率進(jìn)一步增大。以上結(jié)果均證明了制備的納米載藥體系具有良好的還原/酶響應(yīng)性。細(xì)胞水平上,CSCD可以被細(xì)胞有效攝取,且攝取機(jī)制主要依賴于CD44分子受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞,這一主動(dòng)攝取的過程需要能量的支持;也有部分納米�？赏ㄟ^網(wǎng)格蛋白和滲透壓介導(dǎo)完成細(xì)胞攝取。DTX-CSCD具有良好的細(xì)胞毒性,在納米粒中DTX濃度為50μg/ml孵育72h,細(xì)胞存活率低于20%。分別在Wistar大鼠和C57小鼠中進(jìn)行了DTX-CSCD的藥動(dòng)學(xué)和組織分布實(shí)驗(yàn),同時(shí)以無還原響應(yīng)性的DTX-CSAD納米粒作為對(duì)照。大鼠藥動(dòng)學(xué)結(jié)果表明,DTX-CSCD和DTX-CSAD顯著延長了DTX在血液中的滯留時(shí)間,減慢藥物被清除的速率,半衰期分別為Taxotere(?)的4.3倍和3.5倍。小鼠組織分布特征結(jié)果得出以下結(jié)論:DTX-CSCD和DTX-CSAD顯著提高了藥物在腫瘤部位的聚集,2 h時(shí)DTX-CSCD和DTX-CSAD在腫瘤部位的藥物濃度分別為Taxotere(?)的6.1倍和3.2倍。載藥納米粒還降低了藥物在心臟中的分布,降低了藥物在體內(nèi)的非特異性毒性。此外,相對(duì)于Taxotere(?),DTX-CSCD和DTX-CSAD在肺中分布較多,這有利于納米粒發(fā)揮抗肺中腫瘤轉(zhuǎn)移的功能。體內(nèi)藥效學(xué)結(jié)果表明,載藥納米粒具有良好的抗腫瘤和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的效果。可以顯著的抑制荷瘤小鼠的瘤體積,1 8天時(shí)DTX-CSCD和DTX-CSAD納米粒和Taxotere(?)組的腫瘤體積分別為生理鹽水對(duì)照組的12.6%、25.6%和38.4%。腫瘤組織HE染色和TUNEL分析進(jìn)一步證明了載藥納米粒通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡和死亡來達(dá)到抑制腫瘤生長的效果。載藥納米粒可以顯著降低肺部腫瘤轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的數(shù)量,減輕肺部病理狀態(tài)。同時(shí),腫瘤組織的免疫組化分析結(jié)果表明,DTX-CSCD和DTX-CSAD納米粒能顯著降低腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白環(huán)氧化酶-2(COX-2)的表達(dá)水平。相對(duì)于DTX-CSAD納米粒組,DTX-CSCD納米粒組具有較小的腫瘤體積和誘導(dǎo)更高的細(xì)胞凋亡百分比,體現(xiàn)了還原/酶敏感的CSCD納米粒作為多重環(huán)境響應(yīng)的藥物遞送載體在促進(jìn)藥物釋放,提高抗腫瘤及抗腫瘤轉(zhuǎn)移效果的優(yōu)越性。(3)還原/酶響應(yīng)型可逆交聯(lián)X-NPs納米粒的設(shè)計(jì)及其化療-聲動(dòng)力聯(lián)合療法抗腫瘤作用的研究基于CSCD的設(shè)計(jì),為進(jìn)一步提高聚合物納米粒的穩(wěn)定性,同時(shí)結(jié)合多種抗腫瘤手段,采用超聲敏感劑Ce6疏水小分子作為疏水改性劑,從而引入聲動(dòng)力療法(SDT);采取交聯(lián)手段與還原響應(yīng)相結(jié)合,引入可逆交聯(lián)策略,以期實(shí)現(xiàn)更加優(yōu)越的抗腫瘤效果。依次將Ce6和交聯(lián)劑LA分別通過ADH連接到CS上,獲得兩親性聚合物CS-Ce6-LA。聚合物自組裝獲得非交聯(lián)納米粒(NX-NPs),通過分子間二硫鍵交聯(lián)得到可逆交聯(lián)納米粒(X-NPs),作為DTX的載體。X-NPs具有還原/酶敏感特性,可實(shí)現(xiàn)化療-聲動(dòng)力治療的聯(lián)合治療手段。形成的納米粒呈球狀,粒徑分布均一。其中,NX-NPs粒徑在133-233 nm以內(nèi),Zeta電位在-12 mV到-22 mV之間。經(jīng)過交聯(lián),X-NPs粒徑比NX-NPs的粒徑低,分布范圍為118-197 nm,Zeta電位在-16 mV到-23 mV之間。X-NPs的溶血率均低于5%。利用超聲-透析方法制備了載藥納米粒DTX/X-NPs,當(dāng)藥物-聚合物質(zhì)量比為3:10時(shí),載藥量達(dá)到16.6%,粒徑分布在160.9 nm左右。X-NPs具有良好的穩(wěn)定性,在高離子強(qiáng)度溶劑、有機(jī)溶劑以及高倍稀釋的刺激下,X-NPs保持了膠體穩(wěn)定性,粒徑只有稍許增加。而NX-NPs在同樣條件下,難以保持原有的納米粒特性,部分降解為單聚體。X-NPs在GSH/Hyal-1酶作用下發(fā)生明顯的還原/酶敏感性裂解。交聯(lián)納米粒顯著降低了藥物的釋放速率,72 h時(shí),約62.3%DTX從非交聯(lián)納米粒DTX/NX-NPs中釋放,而DTX/X-NPs的釋放量不足DTX/NX-NPs的一半。但DTX/X-NPs在GSH和GSH/Hyal-1酶的作用下,釋放百分比分別增加到72.3%和97.8%。對(duì)比之下,DTX/NX-NPs的藥物釋放不受GSH的影響。以上結(jié)果說明了 X-NPs可以顯著提高納米粒的穩(wěn)定性和減緩藥物釋放,而在模擬腫瘤細(xì)胞環(huán)境中去交聯(lián)從而加速藥物的釋放;體現(xiàn)了交聯(lián)與響應(yīng)刺激相結(jié)合的優(yōu)越性,這一特性也完美的解決了化學(xué)交聯(lián)方式藥物在靶部位難以釋放的缺點(diǎn)。細(xì)胞對(duì)X-NPs具有理想的攝取量。DTX/X-NPs+SDT的化療-聲動(dòng)力協(xié)同治療具有顯著的腫瘤殺傷能力,DTX/X-NPs+SDT聯(lián)合療法的細(xì)胞毒性顯著高于單純DTX/X-NPs化療方式的結(jié)果,且細(xì)胞毒性隨著超聲時(shí)間從1 min到3 min顯著增加,超聲5 min中未見更優(yōu)越的效果。X-NPs+SDT誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率約為Ce6+SDT結(jié)果的2倍,這可能與X-NPs具有較高的細(xì)胞攝取量有關(guān)。進(jìn)一步對(duì)SDT促進(jìn)凋亡機(jī)制進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)SDT可誘導(dǎo)活性氧(ROS)產(chǎn)生,jc-1探針檢測線粒體膜電位MMP發(fā)現(xiàn)SDT促進(jìn)MMP的降低;通過PCR檢測發(fā)現(xiàn)SDT促進(jìn)線粒體內(nèi)的凋亡相關(guān)mRNA表達(dá)的變化,通過Western Blot檢測部分細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)上升。因此SDT誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方式可概括如下:X-NPs被細(xì)胞攝取入胞后,納米粒骨架中Ce6在超聲的刺激下促進(jìn)胞內(nèi)ROS大量產(chǎn)生,ROS具有一定的細(xì)胞毒性,激活線粒體-半胱天冬酶(Caspase)凋亡通路,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。即線粒體受損失,MMP下降,線粒體Bax表達(dá)上升,Bal-1表達(dá)下降,即引起下游Cytochrome C表達(dá)上升,激活Caspase家族,引起Caspase-9的降解,進(jìn)而激活下游信號(hào),引起下游Caspase-3的降解。Caspase-3的降解引起PARP的降解,PARP可能參與細(xì)胞凋亡的后期過程。DTX/X-NPs的藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果表明,DTX/X-NPs通過改變DTX在血液中的存在形式,顯著地提高血藥濃度,延長DTX在血液中的滯留時(shí)間。小鼠注射游離Ce6或X-NPs后,在不同時(shí)間點(diǎn)取出各組織,用小動(dòng)物活體成像儀進(jìn)行體外顯影,記錄Ce6的熒光強(qiáng)度。結(jié)果發(fā)現(xiàn):相比于Ce6溶液,基于CS-Ce6-LA聚合物制備的X-NPs可提高Ce6在腫瘤的熒光強(qiáng)度,并延長在腫瘤部位的滯留時(shí)間。X-NPs在肺中分布較多,這有利于納米粒發(fā)揮抗肺中腫瘤轉(zhuǎn)移的功能。體內(nèi)藥效學(xué)結(jié)果表明,化療-聲動(dòng)力療法聯(lián)合治療比單一療法具有更顯著的抗腫瘤作用,實(shí)驗(yàn) 18 天后,DTX/X-NPs+SDT、X-NPs+SDT、DTX/X-NPs 和 Taxotere(?)分別為生理鹽水對(duì)照組瘤體積的0.6%、10.0%、14.9%和61.8%。肺部腫瘤轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量結(jié)果、Western Blot和免疫組化考察腫瘤組織的轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的表達(dá)結(jié)果表明,化療、SDT以及聯(lián)合治療可顯著降低肺中轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的數(shù)量,降低腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白COX-2和uPA的表達(dá)水平,其中聯(lián)合療法結(jié)果最優(yōu)。這體現(xiàn)了還原/酶敏感的DTX/X-NPs作為藥物遞送載體在腫瘤細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)化療藥物快速釋放和在超聲作用下誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的聯(lián)合治療的優(yōu)越性。值得關(guān)注的是,DTX/X-NPs+SDT、X-NPs+SDT兩組促進(jìn)了腫瘤微環(huán)境CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTLs)的浸潤,兩組的CTLs百分比分別為1.6%和1.4%。對(duì)于無SDT參與的生理鹽水組,Taxotere(?)組和DTX/X-NPs組,CTLs的百分比均小于0.3%。SDT同時(shí)也促進(jìn)細(xì)胞因子γ-干擾素(INF-γ)的浸潤,引起機(jī)體自身的抗腫瘤免疫反應(yīng)。這一結(jié)果增加了 SDT用于抗腫瘤治療的潛力,為腫瘤免疫治療的應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【圖文】：

以一定量的ＥＤＣ／ＮＨＳ進(jìn)行ＤＯＣＡ羧基端的活化和ＤＯＣＡ－ＮＨＳ的合成，并加入一逡逑定量的ＴＥＭＥＤ終止活化反應(yīng)。通過ＣＳ－ＡＤＨ與ＤＯＣＡ－ＮＨＳ的酰胺反應(yīng)，獲得兩親性聚逡逑合物。合成路線如圖１－１所示。逡逑（Ｒ－ＳＯ３－邋ｏｒ邋Ｈ）邐0＾Ｈ３邐ｎ逡逑ＣＳ邐ＡＤＨ逡逑ｎｈ２逡逑ＮＨ逡逑０邋人邐ＮＨｂ，逡逑Ｘ逡逑ｘ邋Ｖ。邋＋逡逑0、ｎｈ邐口邐Ｎｒ逡逑、舟。今么於。、邐枿逡逑（Ｒ＝Ｓ０３－0ｒＨ）邐0＾ＣＨａ邐０Ｒ邐》ＣＨ邐Ｊｎ逡逑°邋３邐ＥＤＣ邋ＮＩＩＳ邋ＴＥＭＥＤ逡逑＾邋）逡逑0Ｓ５＾邐ＮＨ邐ｃｈ３邋0邐ｊ逡逑＼邐＼邋Ｊ逡逑ＮＨ邐ＯＲ邋0Ｒ逡逑Ｌ（Ｒ＾ｏｔｈ，邋°＞Ｃ＾邋0Ｈ邋－邋＞Ｈｃｈ３逡逑ＣＳＡＤ逡逑圖１－１邋ＣＳＡＤ的合成路線圖逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ邋ＣＳＡＤ逡逑硫酸軟骨素－己二酸二酰肼（ＣＳ－ＡＤＨ）的合成［７３］邋？？精確稱�。埃插澹纾茫渝澹ǎ埃靛澹恚恚铮欤�，逡逑溶于適量蒸餾水中，攪拌使其充分溶解，向其中依次加入０．８邋ｇ邋ＥＤＣ邋（４．０邋ｍｍｏｌ），０．１１７邋ｇ逡逑（１．０邋ｍｍｏｌ）邋ＮＨＳ，以鹽酸調(diào)節(jié)酸堿度至ｐＨ值６－７，攪拌１５ｍｉｎ左右，活化ＣＳ中的羧逡逑３５逡逑

ＮＨＳ的催化下生成活性酯，然后其活化的羧基端與ＣＳ－ＡＤＨ的另一端氨基端進(jìn)行酰胺反逡逑應(yīng)。為了防止ＣＳ分子間由ＡＤＨ交聯(lián)，合成過程中加入過量的ＡＤＨ。在ＣＳ的１Ｈ邋ＮＭＲ逡逑中，化學(xué)位移在２．０１邋ｐｐｍ為ＣＳ結(jié)構(gòu)中乙酰甲基氫質(zhì)子的特征吸收峰（圖１－２中ａ所逡逑示），化學(xué)位移在３．２３－４．６５邋ｐｐｍ為糖環(huán)骨架氧質(zhì)子的吸收峰。在ＣＳ－ＡＤＨ圖譜中，，ＡＤＨ逡逑中亞甲基中氫的特征吸收峰出現(xiàn)在化學(xué)位移１．６５－１．８２邋�。穑砗停玻�0－２．４５邋ｒｏｍ處（圖１－２中逡逑ｂ－ｅ所示），這主要由ＡＤＨ上不同亞甲基的化學(xué)環(huán)境不同所致。根據(jù)該吸收峰的峰面積逡逑與糖環(huán)結(jié)構(gòu)中乙酰甲基氫質(zhì)子的特征吸收峰的峰面積之比可以求得在ＣＳ－ＡＤＨ中ＡＤＨ的逡逑摩爾取代度（每一百個(gè)糖環(huán)單元上偶聯(lián)的ＡＤＨ的個(gè)數(shù)）。在ＣＳＡＤ圖譜結(jié)果中，化學(xué)位逡逑移０．７７邋ｐｐｍ附近出現(xiàn)的吸收峰歸屬于ＤＯＣＡ殘基中１８、１９及２１位上的角甲基的特征氫逡逑質(zhì)子峰（圖１－２中ｆ－ｈ所示），根據(jù)該信號(hào)峰的峰面積與糖環(huán)結(jié)構(gòu)中乙酰甲基氫質(zhì)子的吸逡逑３７逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R943


本文編號(hào)：2590524