本文關(guān)鍵詞：活性鹵酚化合物對血管內(nèi)皮細胞EA.hy926中HO-1的誘導(dǎo)及其上游信號通路的調(diào)控作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:課題組前期通過系統(tǒng)結(jié)構(gòu)優(yōu)化獲得了多個對過氧化氫(H2O2)損傷的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)具有顯著保護活性的新型鹵酚類化合物,其中2,4’,5’-三羥基-5,2’-二溴二苯甲酮(LM49)、4,5-二羥基2,3-二溴二苯甲酮(LM48)和3,4-二羥基-3’-氯二苯甲酮(LM46)的活性最高。同時該類化合物具有顯著的抗大鼠動脈粥樣硬化及心肌缺血再灌注損傷的保護作用,顯示了重要的應(yīng)用開發(fā)價值。但是,由于對其作用機制仍不十分清楚,極大地限制了此類化合物的進一步開發(fā)利用。本論文旨在以高活性鹵酚化合物為小分子探針,探討此類化合物保護血管內(nèi)皮細胞損傷作用的調(diào)控機制;尋找作用靶點,為后續(xù)針對性設(shè)計合成高活性化合物和進一步開發(fā)利用等深入研究提供科學(xué)依據(jù)。方法:本實驗首先采用Western blot證實10μM LM49、LM48和LM46對血紅素加氧酶-1(HO-1)表達誘導(dǎo)作用;同時,MTT法考察HO-1特異性阻滯劑——Zn PP預(yù)處理后,LM49、LM48和LM46對細胞保護率的變化。利用流式細胞術(shù)及ELISA法證實LM49、LM48和LM46對H2O2損傷EA.hy926后的活性氧(ROS)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)表達水平影響;并且在Zn PP預(yù)處理后,化合物對ROS和TNF-α抑制作用的變化。進一步選取6個細胞保護活性不同的同類鹵酚化合物1-[4-溴-2-(2-溴-4,5-二羥基苯甲酰)芐基]哌啶-4-羧酸(LM50);(2,3-二羥基-4,5-二氯-苯基)(呋喃-2-基)甲酮(LM51),4,5,2’-三羥基2,5’-二氯-二苯甲酮(LM52);2’,3,4-三羥基-2,5,5’-三氯-二苯甲酮(LM53);[2-(1H-苯并[d]咪唑-1-取代)甲基]-5-溴苯)(2-溴-4,5-二羥基苯基)甲酮(LM54);1-[4-溴-2-(2-溴-4,5-二羥基苯甲酰)芐基]哌嗪-4-乙酮(LM55)進一步驗證其對HO-1的誘導(dǎo)作用與細胞保護活性。后續(xù)實驗選擇活性最高的LM49采用Western blot進一步研究LM49對HO-1、Nrf2誘導(dǎo)和激活p38、JNK、Erk1/2、AKT和PKC-δ磷酸化誘導(dǎo)活性;并且加入特異性阻斷劑預(yù)處理后,考察LM49對HO-1誘導(dǎo)活性的變化。結(jié)果:10μM LM49、LM48和LM46對血紅素加氧酶-1(HO-1)表達具有顯著誘導(dǎo)作用,誘導(dǎo)活性依次為LM49LM48LM46,這與細胞保護活性的強弱存在一致性,即誘導(dǎo)HO-1活性高的化合物其細胞保護活性也相對較高。同時,Zn PP預(yù)處理后,LM49、LM48和LM46對細胞的保護率均顯著降低。LM49、LM48和LM46還能夠顯著降低H2O2損傷EA.hy926后的ROS及TNF-α表達水平;并且在Zn PP預(yù)處理后,化合物對ROS和TNF-α的抑制作用也顯著減弱。進一步驗證6個不同程度細胞保護活性的同類鹵酚化合物,結(jié)果顯示其對HO-1的誘導(dǎo)作用與細胞保護活性強弱仍存在明確的一致性,這與前述研究結(jié)果一致。但是,涉及HO-1調(diào)控的具體機制仍不清楚。后續(xù)實驗結(jié)果顯示LM49對HO-1、Nrf2誘導(dǎo)和激活Erk1/2、AKT磷酸化具有顯著量效關(guān)系,但是對p38、JNK磷酸化和PKC-δ表達無明顯影響;分別加入PD98059(Erk特異性阻斷劑)和Wortmannin(PI3K特異性阻斷劑)預(yù)處理后,LM49對HO-1的誘導(dǎo)活性顯著降低。結(jié)論:(1)HO-1為鹵酚化合物抗氧化、發(fā)揮細胞保護活性的關(guān)鍵蛋白。LM49、LM48和LM46通過誘導(dǎo)HO-1表達,降低ROS水平和抑制TNF-α表達,最終發(fā)揮細胞保護活性;(2)高活性鹵酚化合物LM49主要是通過Erk1/2和PI3K/AKT介導(dǎo)的Nrf2轉(zhuǎn)錄活化,進而調(diào)控HO-1表達。
【關(guān)鍵詞】：鹵酚化合物 EA.hy926 血紅素加氧酶1(HO-1) 細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(Erk1/2) 磷脂酰肌醇(-3)激酶(PI3K)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 第一部分 HO-1—鹵酚化合物發(fā)揮內(nèi)皮細胞EA.Hy926 保護活性的關(guān)鍵蛋白14-29
• 1 材料與方法15-19
• 1.1 主要儀器15
• 1.2 主要試劑15-16
• 1.3 細胞來源16
• 1.4 化合物來源16
• 1.5 實驗方法16-18
• 1.6 統(tǒng)計分析18-19
• 2 結(jié)果19-26
• 2.1 藥物毒性實驗19
• 2.2 細胞保護活性實驗19-21
• 2.3 化合物對EA.hy926 中HO-1 誘導(dǎo)作用21-24
• 2.4 化合物對H2O2損傷EA.hy926 后ROS和TNF-α 表達的影響24-26
• 3 討論26-28
• 3.1 藥物毒性實驗26
• 3.2 細胞保護活性實驗26
• 3.3 化合物對EA.hy926 中HO-1 誘導(dǎo)作用26-27
• 3.4 化合物對H2O2損傷EA.hy926 后ROS和TNF-α 表達的影響27-28
• 4 結(jié)論28-29
• 4.1 誘導(dǎo)HO-1 表達與細胞保護活性相關(guān)性28
• 4.2 誘導(dǎo)HO-1，抑制ROS和TNF-α 表達，發(fā)揮細胞抗氧化保護活性28-29
• 第二部分 高活性鹵酚LM49 對內(nèi)皮細胞EA.hy926 中HO-1 蛋白上游信號通路的調(diào)控作用29-41
• 1 材料與方法29-33
• 1.1 主要儀器29-30
• 1.2 主要試劑30
• 1.3 細胞來源30
• 1.4 化合物來源30-31
• 1.5 實驗方法31-32
• 1.6 統(tǒng)計分析32-33
• 2 結(jié)果33-39
• 2.1 LM49 誘導(dǎo)EA.hy926 中HO-1 表達33-34
• 2.2 LM49 對H2O2損傷的EA.hy926 中ROS及TNF-α 表達的影響34-35
• 2.3 LM49 對胞核Nrf2 含量的影響35
• 2.4 LM49 對MAPK、PI3K/AKT及PKC通路磷酸化影響35-39
• 3 討論39-40
• 3.1 LM49 誘導(dǎo)EA.hy926 中HO-1 表達39
• 3.2 LM49 對H2O2損傷的EA.hy926 中ROS及TNF-α 表達的影響39
• 3.3 LM49 對胞核Nrf2 含量的影響39
• 3.4 LM49 對MAPK、PI3K/AKT及PKC通路磷酸化影響39-40
• 4 結(jié)論40-41
• 4.1 LM49 誘導(dǎo)HO-1 和Nrf2 表達40
• 4.2 LM49 主要是通過Erk1/2 和PI3K/AKT介導(dǎo)的HO-1/Nrf2 轉(zhuǎn)錄活化40-41
• 參考文獻41-48
• 綜述48-62
• 參考文獻55-62
• 致謝62-63
• 在學(xué)期間承擔/參與的科研課題與研究成果63-64
• 個人簡歷64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 史大永;李曉紅;李敬;郭書舉;蘇華;范曉;;Antithrombotic effects of bromophenol,an alga-derived thrombin inhibitor[J];Chinese Journal of Oceanology and Limnology;2010年01期

  本文關(guān)鍵詞：活性鹵酚化合物對血管內(nèi)皮細胞EA.hy926中HO-1的誘導(dǎo)及其上游信號通路的調(diào)控作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：258264