本文關(guān)鍵詞：氨肽酶N抑制劑與5-FU及其衍生物聯(lián)合抗腫瘤活性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的生命健康,它的治療是醫(yī)學(xué)上亟待解決的難題。目前,化學(xué)治療在惡性腫瘤的治療中起著不可或缺的角色。然而,由于腫瘤多藥耐藥性的出現(xiàn)以及腫瘤干細(xì)胞的存在,單一化療藥物無(wú)法起到很好的治療效果,加之新藥研發(fā)成本過(guò)高、進(jìn)度遲緩,因而無(wú)法滿(mǎn)足臨床需求�？鼓[瘤藥物的聯(lián)合使用作為一種高效低毒的治療策略越來(lái)越受到人們的關(guān)注與重視,尤其是靶向藥物和細(xì)胞毒類(lèi)藥物的聯(lián)用為腫瘤的徹底治愈提供了可能。5-FU是一種常用的化療藥物,然而,由于其存在骨髓抑制,胃腸道反應(yīng)等嚴(yán)重的不良反應(yīng),使其在臨床上的應(yīng)用逐漸受到限制。聯(lián)合用藥的出現(xiàn)為5-FU在臨床上的應(yīng)用找到了一條新的出路,其中,氨肽酶N抑制劑與5-FU的聯(lián)合應(yīng)用受到了科學(xué)家們的重視。氨肽酶N(Aminopeptidase N, APN)隸屬于金屬蛋白酶M1家族中的Gluzincins亞族中的一員,它能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移有著重要的聯(lián)系,一直是抗腫瘤藥物研究的熱門(mén)靶點(diǎn)。因此,本課題選擇氨肽酶N抑制劑與5-FU聯(lián)合應(yīng)用進(jìn)行研究。通過(guò)以下幾方面進(jìn)行研究并得到了相關(guān)結(jié)論：(1)體外活性評(píng)價(jià)：首先通過(guò)體外酶活實(shí)驗(yàn)初步確實(shí)了二者聯(lián)用不會(huì)產(chǎn)生相互作用,5-FU不影響氨肽酶N抑制劑與其結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合；再通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各種腫瘤細(xì)胞表面氨肽酶N的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)人卵巢癌細(xì)胞(ES-2)與人小細(xì)胞肺癌(A549)為高表達(dá),選擇ES-2進(jìn)行細(xì)胞酶活實(shí)驗(yàn),細(xì)胞酶活實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了5-FU不會(huì)與氨肽酶N以及氨肽酶N抑制劑中的其中任何一個(gè)發(fā)生相互作用,這一結(jié)論為二者能夠聯(lián)合提供了合理性證明。然后進(jìn)行了八株腫瘤細(xì)胞的抑制增殖實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥組的抑制能力明顯優(yōu)于單獨(dú)5-FU以及Bestatin組,其中在大部分腫瘤細(xì)胞中5-FU:Bestatin 5:1 與 5-FU:Bestatin 10:1作用較為突出；正常細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明聯(lián)合用藥的毒性5-FU:Bestatin 5:1是單獨(dú)5-FU組的1/6,5-FU:Bestatin 10:1是其1/2,因此最終選擇5：1進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。體外實(shí)驗(yàn)初步證明聯(lián)合用藥具有減毒增效的作用。(2)體內(nèi)活性評(píng)價(jià)：H22荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn)中,5-FU聯(lián)合Bestatin的低劑量組抑瘤率接近于單獨(dú)5-FU給藥組,分別為50.4%與49.2%,高劑量聯(lián)合用藥組抑瘤率達(dá)到了62%, Bestatin單獨(dú)給藥組抑瘤率僅僅為30.6%,而且5-FU單獨(dú)給藥組出現(xiàn)了動(dòng)物死亡,體重下降的現(xiàn)象,這在聯(lián)合用藥組及Bestatin單獨(dú)給組中沒(méi)有出現(xiàn)�？梢�(jiàn)5-FU聯(lián)合Bestatin確實(shí)具有減毒增效的作用。(3)機(jī)制的初步研究：通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)各實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行凋亡與周期檢測(cè),在人卵巢癌細(xì)胞(ES-2)與人肝癌細(xì)胞(PLC/PRF/5)的凋亡率分別為：Bestatin為25.01%,5-FU為28.48%,而5-FU:Bestatin 5:1為41.58%; Bestatin為6.57%,5-FU為8.85%,而5-FU:Bestatin 5:1為20.86%,聯(lián)合用藥大大的增加了對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用,這可能是兩藥聯(lián)合應(yīng)用具有更好的體內(nèi)體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖的原因之一。PLC/PRF/5細(xì)胞的周期檢測(cè)結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥使大部分腫瘤細(xì)胞阻滯S期,相對(duì)于5-FU來(lái)說(shuō),它對(duì)于Go/G1期細(xì)胞也有一定的阻滯作用。(4)氨肽酶N抑制齊4Q, M03與5-FU聯(lián)合：此部分主要對(duì)本實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的氨肽酶N抑制劑與5-FU的聯(lián)合進(jìn)行了體外活性的評(píng)價(jià)。首先通過(guò)體外酶活實(shí)驗(yàn)與ES-2細(xì)胞表面酶活實(shí)驗(yàn)確定了4Q,M03與5-FU聯(lián)用不會(huì)產(chǎn)生相互作用,5-FU不影響氨肽酶N抑制劑與其結(jié)合。MTT實(shí)驗(yàn)證明氨肽酶N抑制劑4Q,M03與5-FU聯(lián)合對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的增殖具有抑制作用。體外活性實(shí)驗(yàn)證明氨肽酶N抑制劑4Q,M03與5-FU聯(lián)合有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。(5)5-FU衍生物與Bestatin聯(lián)合：為了使聯(lián)合給藥方便,設(shè)計(jì)用與Bestatin給藥方式相同的口服給藥有效的5-FU衍生物希羅達(dá)與替加氟聯(lián)用。MTT實(shí)驗(yàn)證明聯(lián)合用藥可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的體外增殖活性,且大多以1：1的比例為最佳。以此比例進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn),結(jié)果希羅達(dá)高劑量組與替加氟高劑量組抑瘤率均高于希羅達(dá),替加氟單獨(dú)給藥組動(dòng)物并沒(méi)有出現(xiàn)體重下降的現(xiàn)象。體內(nèi)體外活性結(jié)果說(shuō)明5-FU衍生物與Bestatin聯(lián)合具有很好的抗腫瘤活性�？傮w來(lái)說(shuō),氨肽酶N抑制劑與5-FU及其衍生物聯(lián)合抗腫瘤具有相對(duì)更好的療效,毒副作用低,耐受性好,具有很好的臨床開(kāi)發(fā)價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R914.5;R96
【目錄】：

• 摘要12-14
• ABSTRACTS14-17
• 符號(hào)說(shuō)明17-18
• 第一章 前言18-38
• 1.1 聯(lián)合用藥18-23
• 1.1.1 抗菌藥物的聯(lián)合用藥20
• 1.1.2 抗高血壓藥物的聯(lián)合應(yīng)用20-21
• 1.1.3 抗腫瘤藥物的聯(lián)合應(yīng)用21-23
• 1.2 APN/CD1323-35
• 1.2.1 APN/CD13結(jié)構(gòu)24-27
• 1.2.2 氨肽酶N的組織分布27-28
• 1.2.3 氨肽酶N的生物功能28-30
• 1.2.4 氨肽酶N與腫瘤的關(guān)系30-33
• 1.2.5 氨肽酶N抑制劑33-35
• 1.3 5-氟尿嘧啶35-38
• 1.3.1 5-氟尿嘧啶的理化性質(zhì)35
• 1.3.2 5-氟尿嘧啶的抗腫瘤機(jī)制35-36
• 1.3.3 5-氟尿嘧啶的研究進(jìn)展36-38
• 第二章 氨肽酶N抑制劑烏苯美司聯(lián)合5-氟尿嘧啶酶活評(píng)價(jià)38-45
• 2.1 引言38
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器38-39
• 2.2.1 材料38-39
• 2.2.2 儀器39
• 2.3 聯(lián)合用藥體外抑酶實(shí)驗(yàn)39-41
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)原理39-40
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)方法40
• 2.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-41
• 2.4 氨肽酶N的表達(dá)41-42
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)原理41
• 2.4.2 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 2.4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42
• 2.5 ES-2細(xì)胞酶活42-44
• 2.5.1 實(shí)驗(yàn)原理42-43
• 2.5.2 實(shí)驗(yàn)方法43
• 2.5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-44
• 2.6 小結(jié)44-45
• 第三章 氨肽酶N抑制劑Bestatin聯(lián)合5-FU細(xì)胞活性評(píng)價(jià)45-53
• 3.1 引言45
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器45-46
• 3.2.1 材料45-46
• 3.2.2 儀器46
• 3.3 細(xì)胞系46-47
• 3.3.1 腫瘤細(xì)胞系46-47
• 3.3.2 正常細(xì)胞系47
• 3.4 MTT實(shí)驗(yàn)47-48
• 3.4.1 實(shí)驗(yàn)原理47
• 3.4.2 實(shí)驗(yàn)方法47-48
• 3.4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48
• 3.5 正常細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)48-50
• 3.5.1 實(shí)驗(yàn)原理49
• 3.5.2 實(shí)驗(yàn)方法49
• 3.5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-50
• 3.6 集落生成實(shí)驗(yàn)50-52
• 3.6.1 實(shí)驗(yàn)原理50
• 3.6.2 實(shí)驗(yàn)方法50-51
• 3.6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-52
• 3.7 小結(jié)52-53
• 第四章 氨肽酶N抑制劑Bestatin聯(lián)合5-FU體內(nèi)活性評(píng)價(jià)53-58
• 4.1 引言53
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器53-54
• 4.2.1 材料53-54
• 4.2.2 儀器54
• 4.3 H22腹水種鼠54-55
• 4.3.1 H22細(xì)胞的復(fù)蘇54-55
• 4.3.2 H22種鼠55
• 4.4 實(shí)驗(yàn)方法55-56
• 4.4.1 H22荷瘤模型的建立55
• 4.4.2 分組給藥55-56
• 4.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果56-57
• 4.6 小結(jié)57-58
• 第五章 氨肽酶N抑制劑Bestatin聯(lián)合5-FU的作用機(jī)制58-64
• 5.1 引言58
• 5.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器58-59
• 5.2.1 材料58-59
• 5.2.2 儀器設(shè)備59
• 5.3 細(xì)胞系59-60
• 5.4 ES-2細(xì)胞凋亡60-61
• 5.4.1 赫斯特33342染色60
• 5.4.2 流式細(xì)胞檢測(cè)凋亡60-61
• 5.5 PLC/PRF/5細(xì)胞凋亡61-62
• 5.5.1 赫斯特33342染色61-62
• 5.5.2 流式細(xì)胞檢測(cè)凋亡62
• 5.6 PLC/PRF/5細(xì)胞周期檢測(cè)62-63
• 5.6.1 實(shí)驗(yàn)原理62
• 5.6.2 實(shí)驗(yàn)方法62-63
• 5.6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果63
• 5.7 小結(jié)63-64
• 第六章 5-FU衍生物與氨肽酶N抑制劑的聯(lián)合用藥64-73
• 6.1 引言64
• 6.2 氨肽酶N抑制劑4Q,M03與5-FU的聯(lián)合64-68
• 6.2.1 主要材料與儀器64-65
• 6.2.2 酶活65
• 6.2.3 ES-2細(xì)胞表面酶活65-66
• 6.2.4 MTT法66-68
• 6.3 5-FU衍生物與氨肽酶N抑制劑Bestatin的聯(lián)合68-72
• 6.3.1 MTT實(shí)驗(yàn)68-70
• 6.3.2 H22昆明鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)70-72
• 6.4 小結(jié)72-73
• 總結(jié)與展望73-75
• 參考文獻(xiàn)75-83
• 致謝83-84
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文84-85
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表85

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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  本文關(guān)鍵詞：氨肽酶N抑制劑與5-FU及其衍生物聯(lián)合抗腫瘤活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：256943