本文關鍵詞：青蒿琥酯通過神經酰胺合酶—神經酰胺通路抑制肝纖維發(fā)生，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝纖維化表現為肝臟細胞外基質(Extracellular matrix,ECM)異常大量沉積,其生成大于降解,尤其是I型膠原大量沉積,若不采取治療措施可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。在肝纖維化形成的進程中,其中心環(huán)節(jié)為HSCs的增殖和激活,活化的HSCs增殖顯著、膠原分泌增多,細胞外基質的沉積與其降解失去平衡,肝臟功能受到破壞。近年來隨著對肝纖維化發(fā)病原因及機制研究的深入,提出肝纖維化是可逆轉的。治療肝纖維化的藥物有很多種,本文選用青蒿琥酯作為工具藥。目的探討青蒿琥酯影響肝星狀細胞產生神經酰胺的作用,初步揭示神經酰胺合酶-神經酰胺通路在青蒿琥酯抑制肝纖維發(fā)生中的作用。方法1、選用體外培養(yǎng)的人源肝星狀細胞LX-2為實驗對象,實驗分為細胞對照組、青蒿琥酯組、油酰乙醇胺組及兩藥合用組,采用MTT法測定LX-2的增殖,比色法檢測各組LX-2上清中乳酸脫氫酶活性,應用HPLC-FLD法對LX-2上清中神經酰胺(C2)的含量進行測定,Western Blot法檢測各組中PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表達,酶消化法測定羥脯氨酸的含量。2、LX-2為實驗對象,實驗分為細胞對照組、Fumonisn B1組、青蒿琥酯組及青蒿琥酯與Fumonisn B1合用組,MTT法檢測各給藥組對LX-2增殖的影響,Western Blot法測定神經酰胺合酶(LASS2)的表達,HPLC-FLD法測定各給藥組LX-2上清中神經酰胺(C2)的含量變化,Western Blot法檢測與LX-2增殖及凋亡相關的PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表達,酶消化法測定羥脯氨的含量。結果1、與細胞對照組比較,青蒿琥酯各劑量均可顯著抑制LX-2的增殖,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),且抑制作用呈劑量依賴性及時間依賴性;不同濃度的青蒿琥酯作用于LX-2 24 h后,LX-2上清中LDH的活性與細胞對照組比較,無顯著性差異(P0.05);青蒿琥酯可顯著增加LX-2上清中神經酰胺的含量,且具有劑量依賴性,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);青蒿琥酯能使PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表達增加,與細胞對照組比較,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。羥脯氨酸的含量隨著青蒿琥酯濃度的增加而降低(P0.05)。油酰乙醇胺可呈劑量依賴性地抑制LX-2的增殖(P0.05);油酰乙醇胺各劑量組LX-2中LDH的活性與細胞對照組比較,無顯著性差異(P0.05);與細胞對照組比較,LX-2上清中神經酰胺水平顯著上升(P0.05);PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表達隨著油酰乙醇胺濃度的增大而增加,各劑量組中羥脯氨酸的水平均降低(P0.05),且兩藥合用藥物作用均加強。2、與細胞對照組比較,Fumonisn B1 6μmol/L處理LX-2時細胞增殖顯著,Fumonisn B1 6μmol/L與青蒿琥酯250μmol/L、350μmol/L、450μmol/L合用后,均可顯著降低青蒿琥酯對LX-2的增殖抑制作用;與細胞對照組比較,應用Fumonisn B1后LASS2的表達下降,青蒿琥酯可顯著提高LASS2的表達,Fumonisn B1能減低青蒿琥酯提高LASS2表達的作用;Fumonisn B1具有降低青蒿琥酯增加神經酰胺含量的作用;與二者合用組比較,PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白表達及羥脯氨酸水平在青蒿琥酯單用組最高,Fumonisn B1單用組最低,差異皆有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論1、青蒿琥酯和油酰乙醇胺可通過不同的途徑增加LX-2中神經酰胺水平,均能增加PPAR-γ、p53、Caspase-3表達,青蒿琥酯呈劑量依賴性和時間依賴性地抑制LX-2增殖,促進LX-2凋亡,減低羥脯氨酸的產生。2、青蒿琥酯通過上調神經酰胺合酶-神經酰胺通路,提高神經酰胺的水平,進而增加PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白表達,發(fā)揮抑制肝纖維發(fā)生的作用。
【關鍵詞】：青蒿琥酯 肝星狀細胞 神經酰胺 神經酰胺合酶
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略語12-13
• 前言13-16
• 研究現狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、青蒿琥酯及油酰乙醇胺對LX-2 增殖及凋亡的影響16-40
• 1.1 對象和方法16-19
• 1.1.1 實驗對象16
• 1.1.2 實驗材料16-18
• 1.1.3 主要試劑配制18-19
• 1.2 實驗方法19-29
• 1.2.1 LX-2 細胞培養(yǎng)19-20
• 1.2.2 MTT法繪制LX-2 生長曲線20
• 1.2.3 MTT法檢測青蒿琥酯及油酰乙醇胺對LX-2 增殖的影響20-21
• 1.2.4 比色法測定LX-2 培養(yǎng)上清液中LDH的活性21-22
• 1.2.5 HPLC-FLD法測定神經酰胺的含量22-23
• 1.2.6 Western blotting測定PPAR-γ、p53、Caspase-3 蛋白的表達23-28
• 1.2.7 LX-2 細胞上清中羥脯氨酸的含量的測定28-29
• 1.2.8 統(tǒng)計學方法29
• 1.3 實驗結果29-37
• 1.3.1 繪制LX-2 生長曲線29
• 1.3.2 Art對LX-2 增殖的影響29-31
• 1.3.3 NOE對LX-2 增殖的影響31-32
• 1.3.4 Art與NOE聯合用藥對LX-2 增殖的影響32-33
• 1.3.5 乳酸脫氫酶活性的檢測33
• 1.3.6 LX-2 中神經酰胺含量的變化33-34
• 1.3.7 Western blotting檢測PPAR-γ蛋白的表達34-35
• 1.3.8 Western blotting檢測p53、Caspase-3 蛋白的表達35-36
• 1.3.9 LX-2 中羥脯氨酸的含量36-37
• 1.4 討論37-39
• 1.4.1 藥物對LX-2 的增殖抑制的影響38
• 1.4.2 藥物對LX-2 神經酰胺含量的影響38
• 1.4.3 藥物對LX-2 細胞PPAR-γ蛋白表達的影響38-39
• 1.4.4 藥物對LX-2 細胞p53、Caspase-3 蛋白表達的影響39
• 1.5 小結39-40
• 二、神經酰胺合酶在青蒿琥酯抗肝纖維發(fā)生中的作用40-54
• 2.1 對象和實驗材料40-42
• 2.1.1 實驗對象40
• 2.1.2 實驗材料40-42
• 2.2 實驗方法42-43
• 2.2.1 MTT法測定神經酰胺合酶阻斷劑對LX-2 增殖的影響42
• 2.2.2 MTT法檢測神經酰胺合酶阻斷劑與Art合用對LX-2 增殖的影響42
• 2.2.3 Western blotting檢測LASS2蛋白的表達42-43
• 2.2.4 測定LX-2 上清中神經酰胺的含量43
• 2.2.5 Western blotting檢測PPAR-γ、p53、Caspase-3 蛋白的表達43
• 2.2.6 測定LX-2 上清中羥脯氨酸的含量43
• 2.2.7 統(tǒng)計學方法43
• 2.3 實驗結果43-50
• 2.3.1 神經酰胺合酶阻斷劑對LX-2 增殖的影響43-44
• 2.3.2 神經酰胺合酶阻斷劑與Art合用對LX-2 增殖的影響44
• 2.3.3 神經酰胺合酶阻斷劑與Art合用對LASS2表達的影響44-45
• 2.3.4 檢測LX-2 上清中神經酰胺的量45-46
• 2.3.5 Western blotting測定PPAR-γ蛋白的表達46-47
• 2.3.6 Western blotting測定p53、Caspase-3 蛋白的表達47-49
• 2.3.7 LX-2 上清中羥脯氨酸的含量49-50
• 2.4 討論50-53
• 2.4.1 神經酰胺合酶阻斷劑及Art對LX-2 細胞增殖的影響50-51
• 2.4.2 神經酰胺合酶阻斷劑與Art合用對神經酰胺合酶表達的影響51
• 2.4.3 神經酰胺合酶阻斷劑與Art合用對神經酰胺的影響51-52
• 2.4.4 神經酰胺合酶阻斷劑與Art合用對PPAR-γ表達的影響52
• 2.4.5 神經酰胺合酶阻斷劑與Art合用對p53、Caspase-3 表達的影響52
• 2.4.6 神經酰胺合酶阻斷劑與Art合用對LX-2 中羥脯氨酸分泌的影響52-53
• 2.5 小結53-54
• 結論54-55
• 參考文獻55-59
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明59-60
• 綜述60-72
• 綜述參考文獻68-72
• 致謝72

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前5條

1 方步武,來麗娜,林雅軍,馬敏,甄山林,林秀珍,崔志清,高衛(wèi)真,張才麗,婁建石;青蒿琥酯抗四氯化碳致大鼠肝纖維化的作用[J];中國藥理學通報;2005年06期

2 邢偉;孔維涵;方步武;;蒿鱉養(yǎng)陰軟堅方對免疫性肝纖維化大鼠的治療作用[J];中草藥;2010年10期

3 諶輝;賀永文;李玲;;PPARγ配體羅格列酮對血吸蟲病肝纖維化小鼠血清TNF-α和IL-6的影響[J];肝臟;2007年02期

4 來麗娜;方步武;;青蒿琥酯抗牛血清白蛋白免疫性大鼠肝纖維化作用的研究[J];中藥藥理與臨床;2006年Z1期

5 率紅莉;方步武;邢偉;劉潔瑩;;蒿鱉養(yǎng)陰軟堅方對四氯化碳復合因素所致肝纖維化的預防作用[J];中國實驗方劑學雜志;2013年16期

  本文關鍵詞：青蒿琥酯通過神經酰胺合酶—神經酰胺通路抑制肝纖維發(fā)生，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：256311