本文關(guān)鍵詞：青蒿琥酯通過(guò)神經(jīng)酰胺合酶—神經(jīng)酰胺通路抑制肝纖維發(fā)生，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝纖維化表現(xiàn)為肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)異常大量沉積,其生成大于降解,尤其是I型膠原大量沉積,若不采取治療措施可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。在肝纖維化形成的進(jìn)程中,其中心環(huán)節(jié)為HSCs的增殖和激活,活化的HSCs增殖顯著、膠原分泌增多,細(xì)胞外基質(zhì)的沉積與其降解失去平衡,肝臟功能受到破壞。近年來(lái)隨著對(duì)肝纖維化發(fā)病原因及機(jī)制研究的深入,提出肝纖維化是可逆轉(zhuǎn)的。治療肝纖維化的藥物有很多種,本文選用青蒿琥酯作為工具藥。目的探討青蒿琥酯影響肝星狀細(xì)胞產(chǎn)生神經(jīng)酰胺的作用,初步揭示神經(jīng)酰胺合酶-神經(jīng)酰胺通路在青蒿琥酯抑制肝纖維發(fā)生中的作用。方法1、選用體外培養(yǎng)的人源肝星狀細(xì)胞LX-2為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,實(shí)驗(yàn)分為細(xì)胞對(duì)照組、青蒿琥酯組、油酰乙醇胺組及兩藥合用組,采用MTT法測(cè)定LX-2的增殖,比色法檢測(cè)各組LX-2上清中乳酸脫氫酶活性,應(yīng)用HPLC-FLD法對(duì)LX-2上清中神經(jīng)酰胺(C2)的含量進(jìn)行測(cè)定,Western Blot法檢測(cè)各組中PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表達(dá),酶消化法測(cè)定羥脯氨酸的含量。2、LX-2為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,實(shí)驗(yàn)分為細(xì)胞對(duì)照組、Fumonisn B1組、青蒿琥酯組及青蒿琥酯與Fumonisn B1合用組,MTT法檢測(cè)各給藥組對(duì)LX-2增殖的影響,Western Blot法測(cè)定神經(jīng)酰胺合酶(LASS2)的表達(dá),HPLC-FLD法測(cè)定各給藥組LX-2上清中神經(jīng)酰胺(C2)的含量變化,Western Blot法檢測(cè)與LX-2增殖及凋亡相關(guān)的PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表達(dá),酶消化法測(cè)定羥脯氨的含量。結(jié)果1、與細(xì)胞對(duì)照組比較,青蒿琥酯各劑量均可顯著抑制LX-2的增殖,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且抑制作用呈劑量依賴性及時(shí)間依賴性;不同濃度的青蒿琥酯作用于LX-2 24 h后,LX-2上清中LDH的活性與細(xì)胞對(duì)照組比較,無(wú)顯著性差異(P0.05);青蒿琥酯可顯著增加LX-2上清中神經(jīng)酰胺的含量,且具有劑量依賴性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);青蒿琥酯能使PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表達(dá)增加,與細(xì)胞對(duì)照組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。羥脯氨酸的含量隨著青蒿琥酯濃度的增加而降低(P0.05)。油酰乙醇胺可呈劑量依賴性地抑制LX-2的增殖(P0.05);油酰乙醇胺各劑量組LX-2中LDH的活性與細(xì)胞對(duì)照組比較,無(wú)顯著性差異(P0.05);與細(xì)胞對(duì)照組比較,LX-2上清中神經(jīng)酰胺水平顯著上升(P0.05);PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表達(dá)隨著油酰乙醇胺濃度的增大而增加,各劑量組中羥脯氨酸的水平均降低(P0.05),且兩藥合用藥物作用均加強(qiáng)。2、與細(xì)胞對(duì)照組比較,Fumonisn B1 6μmol/L處理LX-2時(shí)細(xì)胞增殖顯著,Fumonisn B1 6μmol/L與青蒿琥酯250μmol/L、350μmol/L、450μmol/L合用后,均可顯著降低青蒿琥酯對(duì)LX-2的增殖抑制作用;與細(xì)胞對(duì)照組比較,應(yīng)用Fumonisn B1后LASS2的表達(dá)下降,青蒿琥酯可顯著提高LASS2的表達(dá),Fumonisn B1能減低青蒿琥酯提高LASS2表達(dá)的作用;Fumonisn B1具有降低青蒿琥酯增加神經(jīng)酰胺含量的作用;與二者合用組比較,PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白表達(dá)及羥脯氨酸水平在青蒿琥酯單用組最高,Fumonisn B1單用組最低,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1、青蒿琥酯和油酰乙醇胺可通過(guò)不同的途徑增加LX-2中神經(jīng)酰胺水平,均能增加PPAR-γ、p53、Caspase-3表達(dá),青蒿琥酯呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性地抑制LX-2增殖,促進(jìn)LX-2凋亡,減低羥脯氨酸的產(chǎn)生。2、青蒿琥酯通過(guò)上調(diào)神經(jīng)酰胺合酶-神經(jīng)酰胺通路,提高神經(jīng)酰胺的水平,進(jìn)而增加PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白表達(dá),發(fā)揮抑制肝纖維發(fā)生的作用。
【關(guān)鍵詞】：青蒿琥酯 肝星狀細(xì)胞 神經(jīng)酰胺 神經(jīng)酰胺合酶
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略語(yǔ)12-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、青蒿琥酯及油酰乙醇胺對(duì)LX-2 增殖及凋亡的影響16-40
• 1.1 對(duì)象和方法16-19
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 1.1.3 主要試劑配制18-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-29
• 1.2.1 LX-2 細(xì)胞培養(yǎng)19-20
• 1.2.2 MTT法繪制LX-2 生長(zhǎng)曲線20
• 1.2.3 MTT法檢測(cè)青蒿琥酯及油酰乙醇胺對(duì)LX-2 增殖的影響20-21
• 1.2.4 比色法測(cè)定LX-2 培養(yǎng)上清液中LDH的活性21-22
• 1.2.5 HPLC-FLD法測(cè)定神經(jīng)酰胺的含量22-23
• 1.2.6 Western blotting測(cè)定PPAR-γ、p53、Caspase-3 蛋白的表達(dá)23-28
• 1.2.7 LX-2 細(xì)胞上清中羥脯氨酸的含量的測(cè)定28-29
• 1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法29
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-37
• 1.3.1 繪制LX-2 生長(zhǎng)曲線29
• 1.3.2 Art對(duì)LX-2 增殖的影響29-31
• 1.3.3 NOE對(duì)LX-2 增殖的影響31-32
• 1.3.4 Art與NOE聯(lián)合用藥對(duì)LX-2 增殖的影響32-33
• 1.3.5 乳酸脫氫酶活性的檢測(cè)33
• 1.3.6 LX-2 中神經(jīng)酰胺含量的變化33-34
• 1.3.7 Western blotting檢測(cè)PPAR-γ蛋白的表達(dá)34-35
• 1.3.8 Western blotting檢測(cè)p53、Caspase-3 蛋白的表達(dá)35-36
• 1.3.9 LX-2 中羥脯氨酸的含量36-37
• 1.4 討論37-39
• 1.4.1 藥物對(duì)LX-2 的增殖抑制的影響38
• 1.4.2 藥物對(duì)LX-2 神經(jīng)酰胺含量的影響38
• 1.4.3 藥物對(duì)LX-2 細(xì)胞PPAR-γ蛋白表達(dá)的影響38-39
• 1.4.4 藥物對(duì)LX-2 細(xì)胞p53、Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響39
• 1.5 小結(jié)39-40
• 二、神經(jīng)酰胺合酶在青蒿琥酯抗肝纖維發(fā)生中的作用40-54
• 2.1 對(duì)象和實(shí)驗(yàn)材料40-42
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象40
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料40-42
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法42-43
• 2.2.1 MTT法測(cè)定神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑對(duì)LX-2 增殖的影響42
• 2.2.2 MTT法檢測(cè)神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑與Art合用對(duì)LX-2 增殖的影響42
• 2.2.3 Western blotting檢測(cè)LASS2蛋白的表達(dá)42-43
• 2.2.4 測(cè)定LX-2 上清中神經(jīng)酰胺的含量43
• 2.2.5 Western blotting檢測(cè)PPAR-γ、p53、Caspase-3 蛋白的表達(dá)43
• 2.2.6 測(cè)定LX-2 上清中羥脯氨酸的含量43
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法43
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-50
• 2.3.1 神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑對(duì)LX-2 增殖的影響43-44
• 2.3.2 神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑與Art合用對(duì)LX-2 增殖的影響44
• 2.3.3 神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑與Art合用對(duì)LASS2表達(dá)的影響44-45
• 2.3.4 檢測(cè)LX-2 上清中神經(jīng)酰胺的量45-46
• 2.3.5 Western blotting測(cè)定PPAR-γ蛋白的表達(dá)46-47
• 2.3.6 Western blotting測(cè)定p53、Caspase-3 蛋白的表達(dá)47-49
• 2.3.7 LX-2 上清中羥脯氨酸的含量49-50
• 2.4 討論50-53
• 2.4.1 神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑及Art對(duì)LX-2 細(xì)胞增殖的影響50-51
• 2.4.2 神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑與Art合用對(duì)神經(jīng)酰胺合酶表達(dá)的影響51
• 2.4.3 神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑與Art合用對(duì)神經(jīng)酰胺的影響51-52
• 2.4.4 神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑與Art合用對(duì)PPAR-γ表達(dá)的影響52
• 2.4.5 神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑與Art合用對(duì)p53、Caspase-3 表達(dá)的影響52
• 2.4.6 神經(jīng)酰胺合酶阻斷劑與Art合用對(duì)LX-2 中羥脯氨酸分泌的影響52-53
• 2.5 小結(jié)53-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明59-60
• 綜述60-72
• 綜述參考文獻(xiàn)68-72
• 致謝72

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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  本文關(guān)鍵詞：青蒿琥酯通過(guò)神經(jīng)酰胺合酶—神經(jīng)酰胺通路抑制肝纖維發(fā)生，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：256311