【摘要】：癌癥是全球醫(yī)學領域不斷探索卻難以攻克的難題。目前治療癌癥的常用藥物毒副作用很大,天然抗腫瘤的多酚類物質毒副作用小且效果顯著,但因分子量大,脂溶性差,機體內利用度低等因素限制了其開發(fā)利用。故對天然多酚進行結構修飾,研究衍生物抗腫瘤活性已經成為科研的熱點。本文研究了松多酚強抗腫瘤活性成分,在提高其純度的基礎上,進行化學修飾,用以改善此類大分子在機體內的利用度。并系統(tǒng)的研究了松多酚PK-40及其衍生物CPK-40的體內外抗腫瘤活性,及其對S180荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)及體內抗氧化酶系的影響。旨在為抗腫瘤天然藥物的開發(fā)提供理論基礎及實驗支持。本研究采用超聲輔助乙醇法提取紅松球果鱗片活性物質,以AB-8大孔樹脂為分離介質,通過響應面技術分段富集松多酚。對一級純化物PK組分進行成分分析后,采用梯度洗脫方式進行二級分離,洗脫濃度為20%、40%及60%�？鼓[瘤增殖活性研究:一級分離物采用MTT法對7種腫瘤細胞(HT-29、HeLa、A375、A549、MCF-7、SY5Y及LOVO)進行抗腫瘤增殖活性篩選,結合半數(shù)致死濃度EC50值比較篩選出藥物敏感性腫瘤細胞LOVO進行后期實驗研究。收集不同洗脫濃度下的二級多酚分離組分進行抗LOVO腫瘤細胞增殖活性研究,MT結果顯示:40%的多酚組分(PK-40)純度最高,對LOVO抑制活性最強,其EC50值為0.2154mg/m L。富集PK-40進行氧�；疤减；苌锏闹苽洹K-40�；苌锏闹苽�:通過MTT法選擇抗腫瘤能力最強的C-酰化反應物進行衍生條件優(yōu)化,以抗LOVO增殖活性的EC50值為篩選指標,確定了PK-40:硬脂酰氯:無水氯化鋁的最優(yōu)摩爾比為1:1:1.5,最佳轉化溫度40℃及反應時間為8h的條件下合成的CPK-40抗腫瘤活性最強,并對衍生物初步運用紫外光譜法、紅外光譜法進行結構分析。研究PK-40和�；苌锛毎郊皠游锼降亩纠韺嶒�,確定了它們的安全濃度使用范圍后在體內建立S180荷瘤小鼠腫瘤模型,對PK-40及CPK-40體內抗腫瘤活性進行系統(tǒng)研究。通過對小鼠生命延長率、抑瘤率及細胞周期等指標分析,結果看出:CPK-40高劑量組抑瘤效果最明顯,抑瘤率為44.27%,顯著的延長了小鼠的存活時間。流式細胞儀檢測的結果顯示PK-40-M劑量組和CPK-40-H劑量組凋亡峰面積顯著,凋亡率分別是:33.4%,45.6%。且發(fā)現(xiàn)PK-40-M劑量組將腫瘤細胞阻滯在G2/M期,而CPK-40-H劑量組將腫瘤細胞阻滯在G0/G1期。免疫組化研究結果發(fā)現(xiàn)CPK-40能夠提高小鼠腫瘤組織凋亡相關蛋白Bax、TNFα和Caspase-3活化亞基的表達率,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達,從而能很好的促進腫瘤細胞的凋亡。Tunel檢測的結果也證實了CPK-40高劑量組處理的腫瘤細胞凋亡率最高。對CPK-40對S180小鼠免疫系統(tǒng)影響的結果顯示:CPK-40能有效的增加S180小免疫器官及血液系統(tǒng)免疫指數(shù),并能促進ConA轉化脾細胞增殖能力,且巨吞噬細胞吞噬作用也有所加強。對荷瘤小鼠各臟器及血液的抗氧化酶系檢測結果發(fā)現(xiàn):CPK-40能夠有效升高小鼠體內的抗氧化酶系(SOD和GSH-Px)的活性和提升抗氧化物質GSH的合成能力,并能降低小鼠體內脂質過氧化產物MDA的水平,表明CPK-40的抗氧化活性與其抗癌活性之間存在內在的關聯(lián)性。本研究對于揭示多酚化學修飾物抗癌途徑具有一定的理論價值,對進一步開發(fā)天然低毒功效顯著的抗癌劑具有現(xiàn)實意義。
【圖文】：

-2-圖 1-1 細胞周期模式圖事件的發(fā)生連接使細胞得以生長和復制。在整個細胞周期運行過程中有原癌基因和抑癌基因兩大類基因起著重要的作用。在給予細胞膜一系列刺激與細胞相關因

一點受到損傷，發(fā)生基因異常引起細胞增殖紊亂，過度增生引發(fā)腫瘤，P53 會通過調整表達量及時發(fā)揮作用[12]，當P53過度表達時發(fā)揮了和Rb關閉時一樣的效應，會使細胞阻滯在 G1 期不能順利進入 S 期完成細胞 DNA 復制，，這種阻滯留給了細胞修復的時間（如圖 1-2）[13]。
【學位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R943

【參考文獻】

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本文編號：2562974