【摘要】：癌癥是全球醫(yī)學(xué)領(lǐng)域不斷探索卻難以攻克的難題。目前治療癌癥的常用藥物毒副作用很大,天然抗腫瘤的多酚類(lèi)物質(zhì)毒副作用小且效果顯著,但因分子量大,脂溶性差,機(jī)體內(nèi)利用度低等因素限制了其開(kāi)發(fā)利用。故對(duì)天然多酚進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,研究衍生物抗腫瘤活性已經(jīng)成為科研的熱點(diǎn)。本文研究了松多酚強(qiáng)抗腫瘤活性成分,在提高其純度的基礎(chǔ)上,進(jìn)行化學(xué)修飾,用以改善此類(lèi)大分子在機(jī)體內(nèi)的利用度。并系統(tǒng)的研究了松多酚PK-40及其衍生物CPK-40的體內(nèi)外抗腫瘤活性,及其對(duì)S180荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)及體內(nèi)抗氧化酶系的影響。旨在為抗腫瘤天然藥物的開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)支持。本研究采用超聲輔助乙醇法提取紅松球果鱗片活性物質(zhì),以AB-8大孔樹(shù)脂為分離介質(zhì),通過(guò)響應(yīng)面技術(shù)分段富集松多酚。對(duì)一級(jí)純化物PK組分進(jìn)行成分分析后,采用梯度洗脫方式進(jìn)行二級(jí)分離,洗脫濃度為20%、40%及60%�？鼓[瘤增殖活性研究:一級(jí)分離物采用MTT法對(duì)7種腫瘤細(xì)胞(HT-29、HeLa、A375、A549、MCF-7、SY5Y及LOVO)進(jìn)行抗腫瘤增殖活性篩選,結(jié)合半數(shù)致死濃度EC50值比較篩選出藥物敏感性腫瘤細(xì)胞LOVO進(jìn)行后期實(shí)驗(yàn)研究。收集不同洗脫濃度下的二級(jí)多酚分離組分進(jìn)行抗LOVO腫瘤細(xì)胞增殖活性研究,MT結(jié)果顯示:40%的多酚組分(PK-40)純度最高,對(duì)LOVO抑制活性最強(qiáng),其EC50值為0.2154mg/m L。富集PK-40進(jìn)行氧�；疤减；苌锏闹苽�。PK-40�；苌锏闹苽�:通過(guò)MTT法選擇抗腫瘤能力最強(qiáng)的C-�；磻�(yīng)物進(jìn)行衍生條件優(yōu)化,以抗LOVO增殖活性的EC50值為篩選指標(biāo),確定了PK-40:硬脂酰氯:無(wú)水氯化鋁的最優(yōu)摩爾比為1:1:1.5,最佳轉(zhuǎn)化溫度40℃及反應(yīng)時(shí)間為8h的條件下合成的CPK-40抗腫瘤活性最強(qiáng),并對(duì)衍生物初步運(yùn)用紫外光譜法、紅外光譜法進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。研究PK-40和酰化衍生物細(xì)胞水平及動(dòng)物水平的毒理實(shí)驗(yàn),確定了它們的安全濃度使用范圍后在體內(nèi)建立S180荷瘤小鼠腫瘤模型,對(duì)PK-40及CPK-40體內(nèi)抗腫瘤活性進(jìn)行系統(tǒng)研究。通過(guò)對(duì)小鼠生命延長(zhǎng)率、抑瘤率及細(xì)胞周期等指標(biāo)分析,結(jié)果看出:CPK-40高劑量組抑瘤效果最明顯,抑瘤率為44.27%,顯著的延長(zhǎng)了小鼠的存活時(shí)間。流式細(xì)胞儀檢測(cè)的結(jié)果顯示PK-40-M劑量組和CPK-40-H劑量組凋亡峰面積顯著,凋亡率分別是:33.4%,45.6%。且發(fā)現(xiàn)PK-40-M劑量組將腫瘤細(xì)胞阻滯在G2/M期,而CPK-40-H劑量組將腫瘤細(xì)胞阻滯在G0/G1期。免疫組化研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CPK-40能夠提高小鼠腫瘤組織凋亡相關(guān)蛋白Bax、TNFα和Caspase-3活化亞基的表達(dá)率,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),從而能很好的促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。Tunel檢測(cè)的結(jié)果也證實(shí)了CPK-40高劑量組處理的腫瘤細(xì)胞凋亡率最高。對(duì)CPK-40對(duì)S180小鼠免疫系統(tǒng)影響的結(jié)果顯示:CPK-40能有效的增加S180小免疫器官及血液系統(tǒng)免疫指數(shù),并能促進(jìn)ConA轉(zhuǎn)化脾細(xì)胞增殖能力,且巨吞噬細(xì)胞吞噬作用也有所加強(qiáng)。對(duì)荷瘤小鼠各臟器及血液的抗氧化酶系檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn):CPK-40能夠有效升高小鼠體內(nèi)的抗氧化酶系(SOD和GSH-Px)的活性和提升抗氧化物質(zhì)GSH的合成能力,并能降低小鼠體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的水平,表明CPK-40的抗氧化活性與其抗癌活性之間存在內(nèi)在的關(guān)聯(lián)性。本研究對(duì)于揭示多酚化學(xué)修飾物抗癌途徑具有一定的理論價(jià)值,對(duì)進(jìn)一步開(kāi)發(fā)天然低毒功效顯著的抗癌劑具有現(xiàn)實(shí)意義。
【圖文】：

-2-圖 1-1 細(xì)胞周期模式圖事件的發(fā)生連接使細(xì)胞得以生長(zhǎng)和復(fù)制。在整個(gè)細(xì)胞周期運(yùn)行過(guò)程中有原癌基因和抑癌基因兩大類(lèi)基因起著重要的作用。在給予細(xì)胞膜一系列刺激與細(xì)胞相關(guān)因

一點(diǎn)受到損傷，發(fā)生基因異常引起細(xì)胞增殖紊亂，過(guò)度增生引發(fā)腫瘤，P53 會(huì)通過(guò)調(diào)整表達(dá)量及時(shí)發(fā)揮作用[12]，當(dāng)P53過(guò)度表達(dá)時(shí)發(fā)揮了和Rb關(guān)閉時(shí)一樣的效應(yīng)，會(huì)使細(xì)胞阻滯在 G1 期不能順利進(jìn)入 S 期完成細(xì)胞 DNA 復(fù)制，，這種阻滯留給了細(xì)胞修復(fù)的時(shí)間（如圖 1-2）[13]。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R943

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2562974